摘要：目的将贴壁状态的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞(CHO-S),并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性。方法将贴壁状态的CHO-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬浮培养的CHO-S细胞。根据从噬菌体抗体库筛选获得的抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体的基因序列,人工设计并合成其重链和轻链基因,分别克隆入真核表达载体pc DNA3.1中,所得载体命名为pc DNA3.1-HC和pc DNA3.1-LC。将构建好的2个载体按照轻、重链比例为3∶1的量用Free Style MAX转染试剂瞬时转染CHO-S细胞,转染7 d后收集培养上清,用SDS-PAGE和Western blot法检测抗体表达情况,用流式细胞术检测其与PSMA阳性细胞的结合活性。结果成功将贴壁CHO细胞驯化成悬浮CHO-S细胞,成功构建了表达抗PSMA人源性抗体重链和轻链基因的真核表达载体,并在CHO-S细胞中实现了抗体的分泌表达,流式细胞术检测证实其可特异性结合PSMA阳性前列腺癌细胞。结论成功驯化获得悬浮CHO-S细胞,驯化后的CHO-S细胞可用于抗体的真核表达,为后续抗体的大量表达纯化及功能研究提供了工具。

摘要：目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的小干扰RNA(siRNA)在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1的mRNA序列设计并合成2对针对UHRF1的siRNA,用脂质体将其瞬时转染入769-P细胞。利用实时定量PCR检测UHRF1 mRNA的水平,Western blot法检测UHRF1的蛋白水平;利用MTT法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 UHRF1 siRNA可显著抑制UHRF1的mRNA和蛋白水平,下调769-P细胞UHRF1水平后,细胞增殖显著减弱,细胞凋亡显著增加。结论下调UHRF1的表达可抑制肾癌细胞的增殖并促进其凋亡。

摘要：目的探讨下调婆罗双树样基因4(SALL4)对肾癌ACHN细胞周期和细胞凋亡的影响。方法根据人SALL4的mRNA序列设计合成靶向SALL4的小干扰RNA(siRNA),用于沉默ACHN细胞SALL4的表达。运用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测SALL4的mRNA与蛋白表达水平;使用流式细胞术检测ACHN细胞的细胞周期和细胞凋亡情况。结果 SALL4 siRNA可显著下调ACHN细胞中SALL4的mRNA和蛋白表达水平,下调SALL4后ACHN细胞的细胞周期受到抑制,G1期细胞增多,S/G2期减少,细胞凋亡显著增加。结论下调SALL4基因表达可抑制肾癌ACHN细胞增殖并促进其凋亡,SALL4可能是肾癌治疗的新靶点。

摘要：目的　构建抗前列腺特异抗原 (PSA)单链抗体(sc Fv) /人羧肽酶 A(h CPA)融合基因 ,为前列腺癌的抗体导向酶 -前体药物疗法奠定基础 .方法　在已克隆抗 PSA sc Fv和 h CPA基因的基础上 ,用加端 PCR分别在 sc Fv基因的 3′端和 h CPA基因的 5′端加上部分连接肽 (linker)基因序列 ,回收后混合 ;应用重叠延伸拼接法 ,将抗 PSA sc Fv基因和 h CPA基因通过 linker序列串联为 sc Fv/h CPA融合基因 ;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体 p GEX- 4T- 1中进行表达 .结果　序列测定结果表明 ,构建的抗 PSA sc Fv/h CPA融合基因中 sc Fv和 h CPA序列均正确 ,sc Fv和 h CPA间有 18bp的linker序列 ,推导的氨基酸序列为 GSGGSG,与设计的序列相符 .融合基因经 IPTG诱导表达重组蛋白并以 SDS- PAGE分析 ,在 Mr为 940 0 0左右出现一条新生蛋白带 ,表达量约占菌体总蛋白的 34% .结论　成功构建并原核表达了抗 PSAsc Fv/h

摘要：目的证明用于治疗胡桃夹综合征的3D打印聚醚醚酮(PEEK)材料血管外支架的三维建模和制作方法的可行性和有效性。方法以37例胡桃夹综合征患者为对象,利用患者的CT影像数据,分别对左肾静脉(LRV)受压迫处的动脉和静脉部分进行三维重建并进行3D打印。根据患者动静脉三维数字模型设计血管外支架,并利用PEEK材料进行3D打印。将3D打印PEEK材料血管外支架在1:1动静脉模型上模拟置入并进行术前规划。利用T检验对比分析患者术前和术后3个月的复查数据。结果术前CT影像上测得LRV狭窄处直径均值为(2.81±1.67) mm,动静脉三维数字模型上测得其均值为(2.85±1.59)mm,误差绝对值为(0.17±0.21)mm。患者术前与术后3个月复查结果显示,LRV狭窄处直径(P <0.01)、LRV肾门处直径与狭窄处比值(P <0.01)以及LRV肾门处血流速度(P <0.05)均有显著性差异。37位患者术后均无并发症,其中有22位症状完全消失,15位症状明显缓解。CT影像显示支架位置稳定,无移位。结论用于治疗胡桃夹综合征的3D打印PEEK材料血管外支架的建模及制作程序可行且有效。

摘要：目的 :研究西安地区TTV(Transfusiontransmittedvirus)基因组结构是否为环状 ;对西安地区TTVDNA部分序列直接测序分析 ,比较其与中国 1株同源性。方法 :自行在TTV基因组首尾端设计一套环形检测引物 ,检测西安地区肝炎患者TTVDNA阳性血清 ,有无特异性片段。参照文献设计一套套式检测引物 ,内引物扩增片段长为 197bp ,将 197bp处特异性条带从低熔点凝胶中切下 ,纯化后以自带引物直接测序法测序 ,测得的 143bp序列与Genebank注册的BDH1同源性比较。结果 :环形引物套式PCR扩增在 30 0bp处出现特异性条带 ,提示西安地区TTV毒株可能首尾相连。西安地区TTV毒株与BDH1同源性为 6 5 .0 % ,差异率 35 .0 % (>30 % ) ;143bp中的 6 2bp序列与BDH1同源性达 75 .8%。结论 :西安地区TTVDNA结构可能有环形株存在 。