摘要：目的构建含有TGF-βⅡ型受体(TGF-β R Ⅱ)的真核表达载体及针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒,并观察RNA干扰对TGF-β R Ⅱ表达的抑制作用。方法PCR方法扩增TGF-β R Ⅱ的cDNA序列,将全长的TGF-β R ⅡcDNA插入pcD-NA3.1中,构建TGF-β R Ⅱ的真核表达载体pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ,并检测其在293T细胞中的表达。根据TGF-β R Ⅱ的基因序列,设计针对TGF-β R Ⅱ的干扰RNA,构建针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ。脂质体介导质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ和pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ共转染293T细胞,Western blot法检测RNA干扰质粒的生物活性。结果真核表达载体pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ和RNA干扰质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ经酶切鉴定构建正确,测序结果显示未发生基因突变。间接免疫荧光检测pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ转染的293T细胞,可见绿色荧光。针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-β R Ⅱ的表达。结论已成功构建了TGF-β R Ⅱ的真核表达载体及针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒,为进一步研究针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用奠定了基础。

摘要：目的 :通过RT PCR ,以特异引物 ,从人新鲜手术肌肉组织获得人葡萄糖转运子 4 (GLUT4 )cDNA基因 ,并体外克隆入测序载体 ,获得具有正确序列的目的基因 .方法 :经GeneBank在线检索 ,确定人GLUT4cDNA基因特异引物 ,采用反转录聚合酶链方法从 1例人手术新鲜腹部肌肉组织RNA模板中 ,获得人GLUT4表达片段cDNA的基因 ,经克隆入测序载体pGEM 3zf(- ) ,自动测序 ,验证cDNA大小及序列 .结果 :以我们设计的特异引物 ,从人肌肉组织模板中能得到预期大小的人GLUT4cDNA基因RT PCR产物 ,并能插入预定的克隆载体中测序 ,所得基因的序列符合目的基因的序列 .结论 :从人肌肉组织中能获得具有正确序列。

摘要：为了调查西安地区职业献血员及血液透析患者TTV感染状况,通过在TTV基因组ORF1区设计两套引物,用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测我院有偿献血员208例、血液透析病人30例及我院住院的非肝炎患者128例TTV感染率。结果显示,西安地区职业献血员TTV阳性率16.83％(35/208),血透患者TTV阳性率46.67％(14/30),非肝炎患者TTV阳性率2.23％(3/128),前两组与后一组统计处理(X^2=14.26)(X^2=47.28)(x^2=49.49)P<0.001,整体比较(x^2=41.886)P<0.001。提示西安地区与血液紧密接触人群中存在严重的TTV感染,其分布以输血传播为主。

摘要：笔者采用自行设计的问卷,对肾病综合征的遵医行为及影响因素进行调查分析,提出相应的护理措施,以提高患者的治疗依从性.

摘要：目的:了解合并高血压维持性血液透析患者遵医行为,帮助其控制病情,提高生活质量。方法:采用自行设计的问卷,对随机抽样的120例合并高血压维持性血液透析患者,进行调查分析。结果:120例患者,完全遵医者36例,不完全遵医者62例,完全不遵医者22例。影响不遵医行为最常见的原因是缺乏高血压、血液透析知识,担心血液透析并发症,医疗费用高等。结论:合并高血压维持性血液透析患者不遵医行为发生率很高,原因复杂。应加强健康教育,保证足够的医疗费用,社会与家庭支持,才能帮助合并高血压维持性血液透析患者控制病情,提高生活质量。

摘要：目的:克隆Nox4基因入pLenti6.3慢病毒表达载体,为探索Nox4基因在ROS产生中的作用提供实验基础。方法:根据NCBI人Nox4 mRNA序列设计引物,再利用酶切连接反应将Nox4插入到入门载体pENTR3C中,成功构建pENTR3C-Nox4后,通过LR反应,将Nox4和EGFP tag插入到慢病毒表达载体pLenti6.3中,经酶切和测序验证正确后,将重组表达质粒转染入人Hela细胞,通过Western-Blot验证Nox4的表达情况,免疫荧光验证Nox4在细胞内的定位情况。结果:入门载体及表达质粒测序比对完全正确,转染Hela细胞后可见明显的表达条带,并且主要定位于细胞器内质网中。结论:成功构建了带有EGFP tag的Nox4基因慢病毒重组表达载体,转染Hela细胞后,其能正确表达并定位于内质网中,为研究Nox4在调节ROS产生中的作用奠定了基础。

摘要：目的:克隆SLC25A6基因入pcDNA3.0表达载体中,同时给基因两端加入HA和Myc标签,为探索SLC25A6基因作为工具研究线粒体生物合成作用在急性肾损伤产生机制提供基础。方法:根据NCBI人SLC25A6 mRNA序列设计引物,通过酶切连接反应将SLC25A6插入到pcDNA3.0中,成功构建pcDNA3.0-1xHA-SLC25A6-1xMy后,经酶切和测序验证正确后,将重组表达质粒转染入人Hela细胞,通过Western-Blot验证重组质粒的表达情况。结果:pcDNA3.0-1xHA-SLC25A6-1xMyc表达质粒测序比对完全正确,转染Hela细胞后可见明显的表达条带。结论:成功构建了N端带有HA tag,C端带有Myc tag的SLC25A6基因表达载体pcDNA3.0-1xHA-SLC25A6-1xMyc,通过转染Hela细胞证明其能正确表达,为研究SLC25A6作为线粒体生物合成能力的监测工具探索线粒体在急性肾损伤中的机制奠定了基础。

摘要：目的:观察针对TGF-βRⅡ的干扰RNA对TGF-βRⅡ表达的抑制作用,探讨RNA干扰TGF-βRII的方法对肾间质纤维化的抑制作用。方法:PCR方法扩增TGF-βRⅡ的cDNA序列,将全长的TGF-βRⅡcDNA插入pcDNA3中,构建TGF-βRⅡ的真核表达载体,酶切、测序及间接免疫荧光鉴定;根据TGF-βRⅡ的设计针对TGF-βRⅡ的干扰RNA,构建针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ并进行酶切及测序鉴定;脂质体介导针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒和TGF-βRII的真核表达载体共转染293T细胞,western-blot检测293细胞内TGF-βRⅡ的表达。结果:pcDNA3-TGF-βRⅡ测序结果显示TGF-βRⅡ基因未发生突变。间接免疫荧光检测TGF-βRⅡ在293T细胞内的表达;测序显示RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ序列正确,RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-βRⅡ的表达。结论:成功构建了TGF-βRⅡ的真核表达载体及针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒,RNA干扰质粒能够抑制TGF-βRⅡ的表达,为进一步研究针对TGF-βRⅡ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用提供有用工具。