摘要：高等药学教育的目标是培养药学专业高层次人才,从事药物研究及开发等相关领域的工作。免疫学是药学专业学生的必修课程之一,不仅理论体系完整,而且技术应用广、实用性强,与药学学科有着广泛交叉和渗透。

摘要：目的 :进行点突变的SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体的构建 ,并进行表达、分离纯化与鉴定。方法 :采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使得到的SEA基因 75 2位碱基突变由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7位氨基酸残基由D(GAT)突变为A(GCT) ,构建pRSET SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中进行原核表达 ,再通过Westernblot进行鉴定。结果 :构建的SEA(D2 2 7A)基因经测序证实与设计的序列一致。成功地构建pRSET SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,通过IPTG诱导得到分子量约为 32kD的蛋白 ,Westernblot显示其能够与抗SEA的单克隆抗体特异性结合 ,最后采用Ni2 + NTA柱进行分离纯化。结论 :成功地构建SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 。

摘要：目的:观察抗原中残留的洗涤剂成分在间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆时,对抗原包被效率的影响以及相应的对策。方法:以卵白蛋白(OVA)、卵运铁蛋白(OT)和本室制备的相应的单克隆抗体(mAb)作为实验模型,在抗原中加入不同浓度梯度的Triton X-100包被ELISA板,用相应的mAb细胞株培养上清做间接ELISA,确定Triton X-100对包被效率的影响。结果:当包被抗原中Triton X-100的浓度为3×10-6(v/v)时,可以明显抑制包被效率,当TritonX-100的浓度为1.6×10-4(v/v)时几乎可以完全抑制抗原的包被;在含有一定浓度Triton X-100的条件下,提高抗原的浓度,或适当增大包被过程中的稀释倍数,可以明显提高包被效率。结论:洗涤剂对抗原包被有较强的影响,在抗体制备过程中,应尽量提高抗原的初始浓度,降低洗涤剂的浓度,设计合理的针对含有洗涤剂抗原的ELISA筛选方案,是mAb制备成功的关键之一。

摘要：目的使用针对E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)的siRNA在结肠癌HCT116细胞中下调ZEB1的表达,研究其对HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人ZEB1的mRNA序列设计并合成2对针对ZEB1的siRNA,瞬时转染HCT116细胞后,利用实时荧光定量PCR,Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测siRNA对ZEB1的抑制效果;利用MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,针对ZEB1的siRNA可在mRNA和蛋白水平有效抑制ZEB1的表达,ZEB1的表达下调可有效抑制HCT116细胞的增殖,并促进细胞凋亡。结论 ZEB1对结肠癌细胞的生存和增殖具有重要作用,可能参与结肠癌的发生发展过程。

摘要：从Adam等发现针对口蹄疫病毒的多肽疫苗,到Lerner建立多肽疫苗合成的方法,再到联合T、B细胞表位多肽疫苗设计的出现,新型疫苗的研制快速发展。

摘要：目的设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果。方法设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接。测序正确后包装成病毒并感染U251细胞,分别用qRT-PCR及Western blot法检测干扰效果。结果 qRT-PCR及Westernblot结果证实设计的3条RNA干扰序列中有2条可有效沉默U251细胞中B7-H1的表达。结论所制备的针对B7-H1的shR-NA慢病毒能特异性沉默B7-H1。

摘要：目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况.结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢.结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.

摘要：目的: 构建针对增强型(EGFP)的pSUPERsiRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并在哺乳动物细胞COS 7细胞中观察其干扰效果.方法: 设计针对EGFP编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BglⅡ和HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSUPER中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.通过脂质体介导,将重组干扰质粒与pIRESE2 EG FP瞬时共转染COS 7细胞, 48h后荧光显微镜下观察干扰效果.结果: 经酶切鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中已插入了目的基因片段.瞬时共转染后荧光显微镜观察结果显示: 只转染pIRES2 EGFP及共转染pIRES2 EGFP和空载体pSUPER的COS 7细胞中有大量的EGFP表达.而共转染pIRES2 EGFP和pSUPER R237、pSUPER R304、pSUPER R447的COS 7细胞中发出荧光的细胞数量明显减少,荧光强度也明显降低.结论: 成功构建了针对EGFP的RNA干扰表达载体pSUPER R237,pSUPER R304和pSUPER R447,并与pIR ESE2 EGFP瞬时共转染COS 7细胞,有效地抑制了EGFP在哺乳动物细胞中的表达.

摘要：目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protam ine,tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFvHBs15基因,在其3′端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得ScFv/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-32 a后,在大肠杆菌BL2 l(DE3)LysS内诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及W estern b lot鉴定后,用N i-NTA螯合层析介质纯化.间接ELISA分析ScFv/tP融合蛋白的亲和活性,凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合的情况.结果:成功获得人抗HBsAg ScFv/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的ScFv/tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力,同时具有DNA结合活性.结论:ScFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,为该ScFv的进一步应用奠定了基础.

摘要：目的:构建人抗HER2单链抗体(ScFv)/人轻链恒定区(Ck)/鱼精蛋白截短体(tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达、纯化并分析该融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HER2单链抗体e23sFv基因和轻链恒定区编码序列(Ck),连接成ScFv/Ck片段,人工合成tP序列,连接于ScFv/Ck末端,构建成ScFv/Ck/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a后,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定后,用Ni-NTA螯合层析介质纯化.细胞ELISA分析ScFv/Ck/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移实验检测ScFv/Ck/tP融合蛋白与DNA的结合活性.结果:成功构建了人抗HER2ScFv/Ck/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达.表达的ScFv/Ck/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力.结论:ScFv与Ck,tP融合后,同时具有抗原和DNA结合活性,为该ScFv用于HER2阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础.