摘要：目的 :设计两种新的桥联基以合成两种新的不对称二羟化反应的金鸡纳碱衍生物配体并将其用于催化四种烯烃的不对称二羟化反应 ,考察催化效果 .方法 :以苯酚、α 萘酚和氰尿酰氯为原料 ,制备两种新桥联基 ,然后在氮气保护下 ,于5 0℃分别与奎宁反应生成两个新配体 ,并将其用于锇酸钾 铁氰化钾、H2 O tBuOH(1∶1 )体系 ,催化四种烯烃的不对称二羟化反应 .结果 :结果表明 ,化学产率为 75 %～ 98% ,对映体过量均大于 80 % .结论 :以氰尿酰氯衍生物为桥联基合成的两种奎宁金鸡纳碱衍生物配体 ,方法简便、成本低廉 。

摘要：目的 :设计并建立一种合成有光致变色性能的单体8 硝基 6 乙烯基 1 ,3,3 三甲基螺吲哚啉苯并吡喃的低成本 ,反应条件温和 ,操作简便的新方法 .方法 :水杨醛经氯甲基化 ,硝化 ,成磷盐后与甲醛起Witting反应得到 3 醛基 4 羟基 5 硝基苯乙烯 .2 ,3,3 三甲基吲哚甲基化后与氢氧化钠反应得Fischer碱 .所得Fischer碱与 3 醛基 4 羟基 5 硝基苯乙烯缩合得目标产物 .结果 :按起始原料计算 ,螺吲哚苯并吡喃单体的总产率为 2 1 .1 % .经熔点、元素分析、红外、核磁等方法鉴定 ,各中间体及目标产物均与其分子结构相符 .结论 :该合成方法所用原料价廉易得 ,反应条件温和 ,操作简便 ,总产率较文献大为提高 。

摘要：目的:构建用于RNAi的shRNA(small hairpinRNA)表达载体及检测其对低氧诱导因子-1(Hypoxia-inducibleFactor-1,HIF1)基因的沉默效果。方法:从人血基因组中PCR扩增出H1基因启动子,克隆入酶切处理后的pEGFP-C1载体片段中,此载体命名为pWH1。以人HIF1cDNA基因为靶标设计引物,退火后克隆入pWH1。新的载体转染SGC7901细胞,然后用RT-PCR和Western blot检测HIF1基因的表达改变。结果:构建的pWH1载体能很好地表达针对HIF1基因的shRNA,RT-PCR和Western blot的结果显示HIF1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。结论:成功构建了shRNA表达载体pWH1,这对于基因的功能研究具有重要的意义。

摘要：目的 :克隆并表达小鼠气道杯状细胞的特定钙激活Cl 通道(mCLCA3)。方法 :根据GenBank(*** 0 174 74 )的信息 ,设计针对mCLCA3的 3个胞外段基因的引物。以重组质粒pcD NA3.1(- ) /mCLCA3为模板 ,PCR法扩增 3个胞外段的基因。将N端和C端胞外段基因分别亚克隆到原核表达载体pRSET A中 ,中间胞外段基因则亚克隆入原核表达载体pGEX T1中。分别转化大肠杆菌BL2 1(DE3)感受态细胞 ,使用IPTG诱导表达。结果 :酶切鉴定和序列分析表明 ,克隆的mCLCA3的 3个胞外段基因序列与GenBank中登录的完全一致。将这些基因亚克隆到相应表达载体 ,经IPTG诱导在大肠杆菌中获得表达 ,并且表达产物主要以包涵体的形式存在。结论 :获得了mCLCA3抗原分子胞外段基因及其原核表达产物 ,对进一步制备单克隆抗体 ,探讨mCLCA3的通道调控机制具有重要意义。

摘要：目的 :探讨 1,5 二芳基吡唑类环加氧酶 2选择性抑制剂分子结构与活性定量关系 ,建立反映该类化合物构效关系的数学模型 ,为进一步药物设计提供理论依据 .方法 :按类型衍化出的先导化合物 ,采用多元回归分析方法 ,将 2 2个 5 取代吡唑化合物的环加氧酶 1抑制活性 ,环加氧酶 2抑制活性和抑制选择性与化合物疏水性参数logP ,取代基电性参数幃,立体参数MR进行相关及定量构效分析 .结果 :得到 3个反映该类抑制剂活性及选择性的定量构效关系 (QSAR)方程 :PIC50 ,COX -1=8.789838(1.76 81) - 0 .4 0 75 92 5 (0 .1839)logP ;PIC50 ,COX 2 =6 .4 374 34(0 .2 32 2 ) +0 .884 4 0 70 (0 .3487)logP 1.6 93330 (0 .5 0 0 3)Σ幃 ;Ps =- 6 1.18379(2 6 .10 91) +13.2 6 386(5 .5 6 937)logP - 0 .6 875 0 92 (0 .2 96 4 7) (logP) 2 .结论 :环加氧酶抑制选择性与疏水性呈抛物线关系 ;5位苯环 3,4位引入推电子基团或疏水性取代基 ,有利于提高该类化合物环加氧酶 2抑制活性 .所得QSAR方程可较好地预测该类化合物选择性抑制环加氧酶

摘要：目的 :克隆并在大肠杆菌中表达人bit1cDNA基因 .方法 :从新鲜的胎盘组织中提取总RNA ,经反转录成单链cDNA ,以此为模板扩增出人bit1cDNA基因 ,将该基因克隆入载体pUC19中 ,测序正确后亚克隆入表达载体 pGEX 4T3中进行表达 .结果 :利用所设计的引物扩增出完整的人bit1cDNA基因 .以大肠杆菌为宿主在IPTG的诱导下获得表达 ,激光薄层扫描显示表达蛋白占总蛋白的 4 0 6 % .结论 :获得了人bit1cDNA基因及其原核表达产物 ,对研究人Bit1蛋白的功能具有重要的意义 .

摘要：目的 :选择针对ADAR1mRNA的 5′非编码区 (NCR)和翻译起始区的锤头状核酶 (ribozyme ,Rz)切割位点 ,构建针对ADAR1的Rz可诱导真核表达载体 ,旨在knockdownADAR1基因 ,开展ADAR1基因功能的研究 .方法 :应用计算机辅助设计 ,根据能量最低化原理 ,以ADAR1mRNA的 5′NCR和翻译起始区为靶序列 ,预测其二级结构 ,选择理想的Rz切割位点 ,设计并合成锤头状核酶 .采用亚克隆法首先将人工合成的RzDNA序列插入原核载体p1.5的XbaⅠ和KpnⅠ位点获得Rz原核表达质粒pRz 6 13;再将pRz 6 13中ADAR1Rz基因连同其两端的自剪切Rz序列一起克隆入可诱导真核表达载体pTRE的SacⅡ和EcoRⅠ位点得到真核表达质粒pRz ADAR1;通过酶切电泳和测序检查质粒重组后序列情况 .结果 :选出ADAR1mRNA的第 2 0 8位为Rz切点 ,设计并合成了RzDNA序列 .所构建的pRz ADAR1经酶切电泳鉴定显示 ,插入Rz序列大小约为 180kb ,和预期结果相同 ;经测序证实Rz序列正确 .结论 :利用计算机辅助设计 ,成功构建了针对ADAR1锤头状Rz可诱导真核表达载体pRz ADAR1.

摘要：目的：合成人β防御素4（HBD4）基因并构建其克隆载体.方法：根据GenBank中HBD4结构基因的序列, 设计合成了6条长度为32 ～60 bp的寡聚核苷酸片段, 用重叠延伸PCR法扩增合成HBD4 cDNA全长.PCR产物经双酶切后, 克隆入载体pMD18-T中, 并导入细菌中进行扩增.结果：HBD4基因的PCR产物和重组载体经凝胶电泳和酶切鉴定、 测序分析证实, 合成的目的基因与设计的HBD4 cDNA的序列相一致, 并成功地克隆入克隆载体pMD18-T中.结论：用重叠延伸PCR法能方便、 准确地获得目的基因片段.重组克隆载体pMD18-T-HBD4 的获得, 为构建HBD4基因的表达载体并表达奠定了基础.

摘要：目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况.结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢.结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.

摘要：目的:构建汉坦病毒(Hantavirus,HV)单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P基因的原核表达载体,蛋白经表达后纯化并进行1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白的功能活性鉴定.方法:采用PCR的方法,扩增单链抗体基因1A8 ScFv和1A8 ScFv/Cκ,将鱼精蛋白片段的编码序列设计入扩增引物,获得HV单链抗体/鱼精蛋白片段的融合蛋白基因1A8 ScFv/Cκ/P.将获得的重组基因克隆入原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中表达.表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,用Ni-NTA螯合层析介质进行纯化.采用ELISA方法分析1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与HV抗原的结合活性,凝胶迁移阻滞实验检测1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与质粒DNA的结合活性.结果:成功构建了HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白基因的表达载体,在大肠杆菌中实现了可溶性表达.通过功能活性测定,纯化的1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白既保持了与HV抗原的结合能力,同时又具有与核酸的结合活性.结论:构建和表达的HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白具有HV抗原结合活性和DNA结合的活性.