摘要：设计二套特异引物,用双温度点套式PCR方法,以煮沸法快速萃取样本DNA为模板,选择性扩增SSUrDNA特定片段用于人体间日疟原虫(P.v.)的检测和鉴定.实验表明,该系统检测P.v.的灵敏度至少可达1.08×10^(-6)(约10个原虫/μL全血);检测经镜检证实的30份采自我国五省疟区间日疟患者冻存血样、10份原虫率约为10^(-4)或厚血片可见原虫而薄血片未见原虫的低原虫率血样及10份、1984年采集在4℃干燥保存至今的间日疟患者滤纸血样,除一份滤纸血样扩增阴性外,其余均在同一大小位置(约516bp)产生特定的扩增片段;而20份非疟区采集的健康供血员血样、4株培养红内期恶性疟原虫(P.f)、1株人源弓形虫(T.g)、1株人源Leishman原虫(L.d)及空白对照均无此扩增带出现.此外,鉴定30份采自云南疟区、镜检确认为恶性疟患者血样及3份采自海南的非典型形态疟原虫感染血样,其中17份产生明显的P.v特定扩增带型,占样本数的51.5％.利用该系统检测及鉴定P.v,从样本处理到结果观察共约需4h.上述结果表明,该系统具备灵敏、准确,操作较为简便、快速,结果易于判定等优点,同时还具有鉴别虫种、确认有无混合感染的潜力.

摘要：目的：建立简易、快速的复合ＰＣＲ系统，用于检测间日疟、恶性疟及混合感染。方法：以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段，设计疟原虫属特异性上游引物Ｓ１和间日疟原虫、恶性疟原虫种特异性下游引物Ｓ２和Ｓ３，建立双温度点复合ＰＣＲ扩增系统并用于临床血样的检测。结果：从间日疟原虫和恶性疟原虫感染血样中分别扩增出７０５ｂｐ和５７５ｂｐ特定扩增带，而食蟹猴疟原虫、诺氏疟原虫及健康人血样均未见扩增带。检测原虫水平达２－１０虫／μｌ全血。限制性内切酶酶切分析证实扩增产物为目的片段。检测１０４份镜检确诊疟疾患者血样，其中８１份与镜检结果相符，并查出镜检未发现的１７份混合感染和２份虫种鉴别失误的恶性疟。结论：本系统敏感性高，特异性强，操作简便，可在一次扩增中同时检出间日疟和恶性疟两种原虫。

摘要：根据已知疟原虫、其它寄生人体原虫及人的小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）编码区序列，借助计算机核酸序列软件分析，设计出一对用于恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）ＳＳＵｒＤＮＡ特定片段扩增的引物。采用双温度点聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，从我国Ｐ．ｆ．ＦＣＣ／ＹＮ茅芽株红内期基因组ＤＮＡ中，扩增出约５７０个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段，与预期长度相符；而间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）、利什曼原虫（Ｌ．ｄ．）、弓形虫（Ｔ．ｇ．）及人白细胞ＤＮＡ样本均无此扩增带出现。扩增片段经限制性内切酶消化和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交分析，证实为Ｐ．ｆ．ＳＳＵｒＤＮＡ目的片段。

摘要：设计2对针对恶性疟原虫（P．f.）小亚单位核糖体核糖核酸基因（SSUrDNA）的特异引物，采用双温度点套式聚合酶链式反应（PCR）技术，从用煮沸法快速萃取的样本DNA中，扩增***片段，进行恶性疟原虫的检测。结果表明，该系统扩增样本DNA片段大小恒定，经限制性酶切进一步分析，证实均为***目的片段，其检测原虫的灵敏度为0．8×10-6，较常规镜检敏感，并具有鉴别红内期早期阶段疟原虫种类和确认有无混合感染的潜力。因而认为该系统是灵敏、准确、简易、快速的疟疾诊断新方法，值得推广使用。

摘要：根据已知间日疟原虫、其它相关原虫及人小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因序列,借助计算机程序分析,设计一对寡聚核苷酸引物。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,从云南省两例间日疟患者血样DNA抽提物中,均扩增出长约641个碱基对(bp)的SSUrRNA基因特定片段;双脱氧链末端终止法测序结果表明,两份样本扩增片段DNA序列完全相同,但与背景序列比较,在第269位出现碱基置换由G变为A,而在第630位则缺失一碱基C,从而导致该两处限制性内切酶位点的改变。

摘要：目的应用一种简易、快速的复合ＰＣＲ扩增系统检测恶性疟原虫及混合感染。方法以间日疟原虫（Ｐｖ）和恶性疟原虫（Ｐ．ｆ）小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）特定片段为靶基因，设计并合成引物，建立复合ＰＣＲ扩增系统。采用煮沸法快速制备ＤＮＡ模板研究本系统的敏感性和特异性，并用于临床血样的检测。结果从Ｐ．ｖ和Ｐ．ｆ感染血样中分别扩增出分子量大小为７０５ｂｐ和５７５ｂｐ的特定扩增带。而食蟹猴疟原虫、诺氏疟原虫及正常人血样均无扩增带出现。单独检测Ｐ．ｆ敏感度达到０４７×１０－６（约２虫／μｌ全血），在Ｐ．ｖ存在的情况下，检测Ｐ．ｆ敏感度为０４７×１０－５。检测１０４例疟区门诊患者冻存血标本，８４例与镜检法结果相同，并发现２４例混合感染和２例为镜检虫种鉴别失误。结论本系统敏感性高，特异性强，操作简单，并可在一次扩增中同时检出Ｐ．ｖ和Ｐ．ｆ，具有一定的推广应用价值。