摘要：本文采用纯化蛋白Hsp70-NP,NP,Hsp70分别免疫C57/BL6小鼠,取各组小鼠脾淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验和细胞毒试验。此外,为了获得细胞毒实验的靶细胞,本文还采用脂质体介导质粒pcDNA3.1/S转染黑色素瘤细胞B16,通过G418筛选稳定克隆,并用RT-PCR,Westernblots以及免疫荧光染色证实N蛋白在胞浆中表达。淋巴细胞增殖实验表明,Hsp70-NP,NP组小鼠脾淋巴细胞均能够对体外抗原刺激产生增殖反应,而Hsp70-NP组的增殖指数明显高于NP免疫组。细胞毒实验结果表明,LDH的释放具有效应细胞依赖性,Hsp70-NP,NP免疫组脾淋巴细胞均可以特异性杀伤靶细胞B16-N,而Hsp70-NP免疫组的杀伤率显著高于NP免疫组。实验结果显示,Hsp70可以增强NP诱导产生特异性CTL的能力。本研究结果为进一步设计基于NP的合成肽疫苗或基因疫苗提供了重要实验依据。

摘要：目的探讨体表检测小肠电的方法和肠易激综合征（ＩＢＳ）患者体表小肠电的主频有无变化。方法应用自适应滤波方法通过自行设计的生物电检测分析系统检测正常对照组２４例及ＩＢＳ组２６例受检者的小肠体表电活动。结果体表检测小肠电活动波形清晰；经功率谱计算对照组和ＩＢＳ组小肠体表电的主频分别为１０．８８±０．７０周次／分（ｃｐｍ）和１１．０３±０．８４ｃｐｍ，范围均为９－１２ｃｐｍ，两组比较ｐ＝０．１０６。结论本实验方法可在体表清晰地记录小肠电活动，ＩＢＳ患者空腹状态下体表小肠电主频可能与正常人一致。

摘要：目的设计以NF-E2-related factor2(Nrf2)基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染大鼠肝星状细胞株HSC-T6,观察其对Nrf2表达的影响。方法应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体p GLV3-GFP中,构建p GLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染72 h和96 h后大鼠肝星状细胞株HSC-T6 Nrf2基因的表达情况。结果测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109TU/ml,p GLV3-GFP-Nrf2-shRNA转染后72 h和96 h可抑制Nrf2基因mRNA及蛋白的表达。结论成功构建Nrf2基因的shRNA慢病毒载体,可有效抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6中Nrf2基因的表达。

摘要：本文介绍自行设计腹膜活检针并对临床95例不同原因引起的腹水病人进行检查,结果表明:这种活检针对临床上组织病理学确诊结核性腹膜炎有较大价值(诊断率达92.86％);对原因不明的腹水有较高鉴别诊断价值(70.37％);对肝硬化腹水病人原发性腹膜炎的诊断优于腹水常规检查,同时操作简单、安全、适合基层医院使用.

摘要：近30年来国外对临床推理进行了深入的研究，在方法学和理论上取得了很大的进展。按照时间将研究划为三个阶段：①尝试将临床推理理解为一般技巧-临床推理过程研究；②与知识数量和记忆能力相关的记忆-推理研究；③与不同心理表达相关的研究。从中可以归纳出两个观点：首先，尚不能认为推理具有一般过程的变量特征。其次，专业素质与记忆中多个协调的心理表达方式相关。不同的表达方式可能应用于不同的环境，但对引起策略变化的环境特征却知之甚少。专业能力存在于多种知识表达方式之中，通过传授特定的策略、技巧和知识培养临床推理能力并不现实．医学生通过大量精心设计的病例实践来熟悉和理解概念性知识，积累解决问题的经验才是培养临床推理能力的关键。

摘要：背景:针刺对红细胞免疫和T细胞亚群均有正向调节作用,但其机制尚未完全阐明。目的:探讨免疫系统在针刺治疗相关疾病中的调控作用及可能的机制。设计:随机对照实验研究。地点和对象:实验地点:解放军第四军医大学唐都医院消化内科实验室。将SD大鼠40只随机分成正常对照组、非经非穴组、免疫抑制组、足三里组、足三里+免疫抑制组(n=8)。干预:应用放射免疫法测定脑垂体和外周血P物质放免活性(ir-SP)和血管活性肠肽放免活性(ir-VIP)含量的变化;应用流式细胞仪技术,通过微量全血直接免疫荧光染色法测定外周血T细胞亚群以反映细胞免疫功能;应用红细胞C3b受体-酵母菌花环试验和红细胞-IC花环试验检测红细胞免疫功能。主要观察指标:各组大鼠的ir-SP和ir-VIP含量;T细胞亚群和红细胞免疫功能的变化。结果:足三里组大鼠外周血和脑垂体中P物质(substanceP,SP)、血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpeptide,VIP)含量犤外周血SP:(591.83±142.59)pg/L,VIP(92.05±22.11)pg/L;脑垂体SP:(47.00±9.12)pg/L,VIP(308.36±34.16)pg/L、T4(CD4+)细胞百分率犤(65.55±8.42)%犦、C3b受体花环率(RBC-C3bRR)犤(15.88±2.99)%犦、红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)犤(12.14±1.22)%犦明显高于正常对照组犤(569.36±8.04)pg/L,(20.45?

摘要：目的构建携带抑制表达hsa-miR-150-5p的慢病毒载体,建立稳定表达该载体的HT-29细胞。方法设计并合成hsa-miR-150-5p抑制序列,并克隆到工具载体GV-280(h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)构建重组载体,将重组载体与p Helper1.0载体和p Helper2.0载体共转染293T细胞,得到所需的病毒液LV-hsa-miR-150-5p-down,最后感染HT-29细胞,并通过嘌呤霉素筛选出稳定感染的细胞株。荧光显微镜观察HT-29细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR检测hsa-miR-150-5p在HT-29细胞中的表达水平。结果测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组(转染过表达LV-hsa-miR-150-5p-down病毒)病毒滴度为5×10~8TU/ml,阴性对照组(转染阴性LV-NC病毒)病毒滴度为8×10~8TU/ml。所得病毒液感染HT-29细胞并筛选出稳定细胞株HT29-150-5p-down。荧光显微镜观察带有绿色荧光蛋白的目的重组质粒在人结肠癌HT-29细胞中高表达,PCR进一步验证了这一结果。结论 LV-hsa-miR-150-5p-down慢病毒载体构建成功,HT-29细胞稳定表达该载体,为后续miR-150的功能研究奠定基础。

摘要：目的探讨不同频率和声压级水平的次声对大鼠胃窦粘膜形态学的影响。方法共选取210只雄性SD大鼠,将其中140只随机分为对照A组、8 Hz-90 dB组、8 Hz-130 dB组及16 Hz-130 dB组,每组35只。各次声组大鼠按设计要求分别暴露于不同频率和强度的次声舱内,每天2 h；对照A组大鼠则置于次声舱内,每天2 h,期间无次声作用。每组于次声作用第1,7,14,21及28天时各随机取出7只大鼠,采用HE染色及电子显微镜观察其胃窦粘膜病理改变情况。另外70只大鼠则随机分为暴露组及对照B组,每组各35只。将暴露组大鼠置于次声舱内,次声参数为8 Hz、130 dB,每天作用2 h,持续14 d后停止；对照B组大鼠亦每日置于次声舱中2 h,期间无次声作用。2组大鼠分别于次声作用结束后第1,7,14,21及28天时各随机取出7只大鼠进行上述指标检测。结果①8 Hz、90 dB次声作用1 d后,大鼠胃窦粘膜损伤积分与对照A组间差异无统计学意义(P＞0．05)；作用7,14,21及28 d后则明显高于对照A组(P＜0．01)。8 Hz、130 dB及16 Hz、130 dB次声作用1,7,14,21及28 d后,大鼠胃窦粘膜损伤积分均明显高于对照A组(P＜0．01)。②8 Hz、130 dB次声作用1,7,14,21及28 d时,其胃窦粘膜损伤积分均明显高于8 Hz-90 dB组(P＜0．01)；作用14,21及28 d时,则明显高于16 Hz-130 dB组(P＜0．01)。③8 Hz、130 dB次声连续作用14 d后,发现大鼠胃窦粘膜损伤积分随后逐渐下降,但在次声作用停止后1,7,14,21及28 d时仍显著高于对照B组(P＜0．05～0．01)。④8 Hz及16 Hz次声可引起大鼠胃窦牯膜细胞线粒体和内质网等超微结构发生异常改变。结论8 Hz、90 dB或8 Hz、130 dB或16 Hz、130 dB次声作用均可引起大鼠胃窦粘膜损伤,其严重程度与次声频率、强度及作用时间等密切相关；大鼠经次声多次作用后可产生一定的适应性,当次声作用停止后,其胃窦粘膜损伤有自我恢复趋势。

摘要：目的:设计以Rap1b基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染食管鳞癌细胞,观察其在食管鳞癌细胞中的表达。方法:应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA1/2/3/4。并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染食管鳞癌细胞株Eca109后Rap1b基因的表达情况。结果:测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109TU/ml,pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA3/4转染后72h和96h均可显著抑制Rap1b基因mRNA及蛋白的表达。结论:成功构建Rap1b基因的shRNA慢病毒载体,所介导的RNAi能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109中Rap1b基因的表达。

摘要：背景：肠易激综合征（IBS）是一种常见的慢性功能性肠病,严重影响患者的生活质量,现有治疗药物多数疗效欠佳.目的：观察盐酸屈他维林对IBS的疗效和安全性.方法：采用前瞻性、自身对照、多中心试验设计.217例IBS患者接受盐酸屈他维林片80 mg tid 口服治疗,疗程2周.每天记录腹痛以及排便不尽感、排便费力、排便急迫感等伴随症状及其严重程度,同时记录排便次数和粪便性状.结果：经盐酸屈他维林治疗2周,IBS患者的周平均腹痛评分较治疗前显著减低（0.66±0.59对1.42±0.42,P=0.0000）,总有效率达77.9%;便秘型IBS（IBS-C）患者的一周日平均排便次数较治疗前显著增加（0.8±0.3对0.6±0.4,P=0.0004）.腹泻型IBS（IBS-D）患者则较治疗前显著减低（1.6＋0.8对2.8±1.2,P=0.0000）,两组患者的粪便性状以及排便不尽感、排便费力、排便急迫感等亦分别有不同程度的改善.试验中未发生严重不良事件.结论：盐酸屈他维林能有效且安全地治疗各亚型IBS.