摘要：目的构建ｃｅｒｂＢ２特异性核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）基因及其底物基因的体外转录载体并探讨其体外切割作用。方法在计算机设计的核酶ＲＺ１基因的３′端加上新的限制性酶切位点ＥｃｏＲＶ，先合成ＲＺ１基因并将之与其底物分别克隆入体外转录载体ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－），经用ＥｃｏＲＶ快速初选出含有ＲＥ１基因重组子并测序鉴定。体外转录物用３２Ｐ标记。体外切割作用在Ｍｇ＋＋的存在下，３７℃反应１小时，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影后经图像分析计算出切割率。结果用ＥｃｏＲＶ筛选很快鉴定出了含有ＲＥ基因的重组子并命名为ｐＧＥＭ３ＺＲＺ１，自动测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的Ｔ７启动子。ＲＺ１的靶基因片段也被插入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的ＳＰ６启动子下。经体外转录出核酶ＲＺ１及靶ＲＮＡ后，体外切割反应１小时，７９．３％的靶ＲＮＡ即被切开。结论ｃｅｒｂＢ２特异性核酶ＲＺ１在体外有良好的切割活性，该实验为进一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础。