摘要：多聚酶链反应(PCR)技术最突出的优点是灵敏度极高,但是,作为一种分子生物学新技术,这又是最大的缺点,极其微量的非样品靶序列的污染及实验设计稍欠周慎,就会导致整个实验的失败。本文对合理的实验设计和规范化的操作作一概述,力求避免上述不测。

摘要：为了检测牙龈炎组织中ＩＬ－１的表达，设计合成了扩增人ＩＬ－Ｉａ基因的引物，用ＲＴ－ＰＣＲ技术从牙龈炎组织ＲＮＡ中扩增了ＩＬ－Ｉα基因，而正常牙龈中扩增不到该产物。将扩增片段克隆后进行了部分序列的测定，结果表明ＰＣＲ方法可以简便，快速，特异，灵敏地检出炎症组织中ＩＬ－１的表达，这对于牙龈炎发病机理及治疗的研究具有重要意义。

摘要：HIV疫苗的研究曾遇到过巨大的障碍,但是,随着近两年不断取得前沿性进展,HIV疫苗的研究进入了一个新的阶段。首先,在动物模型中候选疫苗的效果得到证实使人们受到了极大的鼓舞。最近,对病毒变异性尤其是诱导T和B细胞记忆的关键靶位的研究所取得的进展又给HIV疫苗的设计带来了新的曙光。在HIV疫苗设计过程中。

摘要：Ｐｇ与口腔感染性疾病关系密切．现根据Ｐｇ特异的菌毛亚单位蛋白结构基因设计寡聚核苷酸引物，采用ＰＣＲ技术扩增了其中长５４２ｂｐ的片段并对其进行了特异性鉴定。结果表明：所设计的引物能从５株Ｐｇ菌中扩增出大小一致的特异ＤＮＡ片段，但不能从其它１８株异种菌中扩增出产物，故具有高度的种特异性．其检测的敏感性为０．ｌｎｇ，为ＰＣＲ应用于口腔致病菌的检测奠定了基础。

摘要：本文从两例临床确诊为乙型肝炎患者的2mg肝穿刺标本中利用基因扩增方法,设计扩增出缺失羧基端34个氨基酸的乙型肝炎病毒C抗原(HBcAg)基因的0.45kb基因片段,将此片段克隆入表达载体,导入大肠杆菌中表达,结果获得每毫升培养液含有100万酶联反应单位的HBgAg,也存在1万酶联反应单位的HBcAg。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,其表达产物占菌体总蛋白的30～37％,分子量为155kD。HBeAg基因结构及表达形式有待进一步研究和探讨。

摘要：根据Pg的特异的fimA基因设计一对引物,采用PCR技术扩增其中542bp长的DNA片段,用^(32)P标记作为探针与25株细菌DNA进行杂交鉴定.结果显示该探针能识别5株同种菌,而与其它20株异种菌DNA无阳性信号出现,探针的敏感性达到微微克级.提示该探针具有特异、敏感、快速、简便的特性.适用于对Pg的检测.

摘要：目的构建ｃｅｒｂＢ２特异性核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）基因及其底物基因的体外转录载体并探讨其体外切割作用。方法在计算机设计的核酶ＲＺ１基因的３′端加上新的限制性酶切位点ＥｃｏＲＶ，先合成ＲＺ１基因并将之与其底物分别克隆入体外转录载体ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－），经用ＥｃｏＲＶ快速初选出含有ＲＥ１基因重组子并测序鉴定。体外转录物用３２Ｐ标记。体外切割作用在Ｍｇ＋＋的存在下，３７℃反应１小时，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影后经图像分析计算出切割率。结果用ＥｃｏＲＶ筛选很快鉴定出了含有ＲＥ基因的重组子并命名为ｐＧＥＭ３ＺＲＺ１，自动测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的Ｔ７启动子。ＲＺ１的靶基因片段也被插入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的ＳＰ６启动子下。经体外转录出核酶ＲＺ１及靶ＲＮＡ后，体外切割反应１小时，７９．３％的靶ＲＮＡ即被切开。结论ｃｅｒｂＢ２特异性核酶ＲＺ１在体外有良好的切割活性，该实验为进一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础。

摘要：作者设计并合成了一对用于PCR技术的突变引物HIV-1 Pr1和HIV-1Pr2,分别在两引物中设计了两个突变点,使突变后基因含有EcoRI、HindⅢ和TAA序列,便于HIV-1 Pr基因的定向克隆和表达。用HIV-1 Pr1和HIV-1 Pr2作引物,采用PCR方法从HIV-1基因组DNA中扩增出了一个360bp长的DNA片段,用EcoRI和HindⅢ双酶切法将此片段定向克隆入pUC19质粒,将克隆基因插入M13mp18进行DNA序列分析。结果表明,该基因序列的读框完全正确,从而为HIV-1 Pr基因的表达及抑制剂的研究奠定了基础。

摘要：背景:能否通过病毒或者非病毒载体将骨形态发生蛋白2转导到骨髓基质细胞发挥成骨作用?目的:观察真核表达载体pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞后体外表达,同时将MSC转染后但未筛选兔骨髓基质细胞自体回植入肌组织,利用X线观察其成骨情况。设计、时间及地点:观察对比实验。实验于2004-11/2005-04在辽宁医学院骨科研究室完成。材料:6只成年新西兰大白兔,雌雄不拘,体质量2.0～3.0kg。BMP2抗体为美国Sanaka公司产品,pcDNA3-hBMP2由解放军第四军医大学生化教研室蒲勤教授提供,限制性内切酶购于大连宝生物工程有限公司。方法:从大肠杆菌提取超纯质粒pcDNA3-hBMP2,从成年兔股骨抽取骨髓,密度梯度分离法分离培养骨髓基质干细胞,将细胞分成4组:A组:pcDNA3-hBMP2转染进行G418筛选;B组:pcDNA3-hBMP2转染未用G418筛选;C组:给予pcDNA3空载体转染;D组:仅加入脂质体转染试剂Fugene6。主要观察指标:①应用免疫组织化学法检测转染后瞬时表达。②应用免疫组织化学法检测细胞骨钙素表达,分别应用原位杂交法检测细胞Ⅰ型胶原表达。③转染2周后将B组细胞自体回植入兔后腿肌组织中,移植4周后应用X射线观察成骨情况。结果:①pcDNA3-hBMP2成功转染入骨髓基质干细胞内并100%瞬间表达BMP2。②基因转染4周后,A组细胞骨钙素及Ⅰ型胶原表达高于C组及D组。③B组细胞回植肌组织4周后,X射线可显示新骨形成。结论:pcDNA3-hBMP2能安全有效转染兔骨髓基质干细胞,通过其分泌物BMP2来作用诱导细胞加速分化为成骨细胞。

摘要：在对一组单克隆抗体可变区ｃＤＮＡ进行体外扩增时，为了克服通用可变区引物的局限性，我们在ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ上合成固相ｃＤＮＡ，并采用一种称为“单引物预掺入ＰＣＲ”的新ＰＣＲ程序，即：在只有一侧引物存在的情况下，先让ＰＣＲ反应在低退火延伸温度下运转３个循环；追加另一侧引物后，转入常规ＰＣＲ循环。新方法扩展了“通用引物”的适用范围，并为引物设计和一些其它基因的ＰＣＲ放大提供了思路。