摘要：通过基因工程的手段所获得的各种重组毒素已在肿瘤的基础和临床应用研究中显示出良好的前景。CD80-SEA重组毒素可能会显著提高机体抗癌能力。但是，由于重组毒素并非自然界所固有的天然蛋白，而且国际上至今对如何能设计构建成人们所期望的理想的重组细胞因子融合蛋白还缺乏具有指导性的理论[1],本研究所设计的CD80-Linker-SEA融合基因在翻译后是否可达到预期的蛋白结构和生物活性，是我们最为关注的问题。为此，我们利用计算机模拟了CD80-Linker-SEA融合基因翻译后在二级结构水平上的一些生物学特性，诸如柔性、抗原性、亲水性及表位等，以预测融合基因及其接头设计的合理性。1 材料和方法1.1 材料 携带CD80cDNA和SEA基因各自的pBlue-script IIKS(+)质粒为本室保存。1.2 引物设计 按照参考文献[2]设计CD80上游引物CCGCTCGAGGCCATGGGCCACACACGG、下游引物CGGGATCCTCCACTACCTACAGGGCGTACACTTTCC。按照参考文献[3]设计SEA上游引物GGGATCCGGTGG-AGGTAGCGAGAAAAGCGAAGAAA、下游引物CCGCTCG-AGTTAACTTGTATATAAATAT,两片段相连的Linker部分已设计入引物内。上述引物均为赛百盛公司合成。1.3 pLXSN-CD80-SEA重组体的构建 PCR扩增CD80和SEA片段后，均以BamH I、Xhol I双酶切后，与经Xhol I酶切的逆转录真核表达载体pLXSN行连接反应。