摘要：目的:探讨一种能够更好的制备单一均匀的纳米 免疫金颗粒的方法,使蛋白芯片在临床诊断疾病时更为灵敏、 准确.方法:利用不同的方法制备3种胶体金,用分光光度计 对其均一性和颗粒大小进行评价;用麦氏方法寻找出3种胶 体金的最佳蛋白标记量;根据免疫金的制备条件设计5种离 心条件,制备出15种免疫金;利用质控蛋白芯片、梅毒检测蛋 白芯片和弓形虫检测芯片分别对15种免疫金显色,通过 XK2100阅读仪得到其相应的灰度值,分析这些数值来确定免 疫金的稳定性和灵敏度,最终确定相对优化的免疫金及其制 备工艺.结果:在制备200mL胶体金的3种配方中以400g/L 氯金酸50μL与10g/L的柠檬酸三钠溶液8mL得到的胶体 金颗粒较为均匀;而该胶体金以30100g,离心2次得到的免 疫金能够在灵敏度和稳定性之间达到一个较好的平衡点. 结论:改进后的免疫金制备方法是更优良的方案.

摘要：目的:建立特异、灵敏的荧光PCR检测乙型肝炎病毒cccDNA的方法。方法:首先用煮沸法提取血清中的HBVDNA,然后用绿豆核酸酶(Mung Bean Nuclease)消化松弛环状HBVDNA(rcDNA),保留共价闭合环状DNA(cccDNA)。设计一条嵌合引物,该引物分为两部分序列,近5′部分为人为设定的序列,近3′部分是与正链缺口下游互补序列。先用该嵌合引物以正链为模板,自HBV cccDNA1590nt开始向上游延伸,然后以嵌合引物中人为设定的序列为下游引物、与负链互补的上游引物以及一条在两引物之间与正链互补的Taqman探针,扩增检测嵌合引物延伸的产物。由于带有缺口的HBV rcDNA无法被嵌合引物延伸,因此最终只能扩增检测到cccDNA。结果:用含有相应HBV DNA片端的PUC19质粒模拟HBV cccDNA,该检测方法的检测灵敏度为1×103拷贝/ml;以模拟松弛环状DNA(rcDNA)与模拟HBV cccDNA按不同比例混合,在rcDNA与cccDNA的比为1×109拷贝/ml:1×103拷贝/ml时,该方法仍可检测到模拟cccDNA;单独检测模拟rcDNA浓度为1×109拷贝/ml时,该方法检测未出现假阳性。结论:该检测乙型肝炎病毒cccDNA的方法操作简单、灵敏、特异,适用于检测血清中HBV cccDNA。