摘要：目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对肾透明细胞癌786O细胞的survivin蛋白表达、细胞凋亡、增殖的影响,及其对表阿霉素诱导细胞凋亡的作用。方法设计并合成特异性靶向survivin的ASODN及正义寡核苷酸(SODN),将其转入786O细胞。设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和600nmol/LASODN组,处理24h后收获各组细胞。透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数。结果ASODN组的细胞呈典型凋亡的形态学改变,而对照组细胞生长良好;ASODN组细胞survivin表达减弱,凋亡指数明显升高(P<0.05);转染ASODN24h后,表阿霉素诱导786O细胞凋亡的作用明显增强。结论survivinASODN能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖,并增强表阿霉素诱导的细胞凋亡。

摘要：目的 :克隆细胞凋亡抑制蛋白Survivin(SVV)的编码序列 ,构建含SVV基因的真核细胞表达载体并在肝癌细胞系HepG2中表达 ,为进一步研究该基因在肝癌发病中的作用奠定基础 .方法 :根据已发表的SVV基因的核苷酸序列设计并合成一对引物 ,以HL 6 0细胞系抽提的RNA为模板进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增产物用BamHI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体 pcDNA3.0中 ,用限制性内切酶酶切重组质粒 pcDNA3.0 SVV和DNA序列测定进行鉴定 .用脂质体法将 pcDNA3.0 SVV导入肝癌细胞系HepG2中 ,G4 1 8选择培养 ,经免疫组化法和RT PCR鉴定其表达 .结果 :RT PCR扩增出长 4 4 5bp的特异性片段 ,经克隆至pcDNA3.0后酶切鉴定证实 ,并测序表明序列与GenBank报道完全一致 .pcDNA3.0 SVV在HepG2细胞中有稳定表达 .结论 :成功克隆了SVV的编码序列 ,构建了其真核细胞表达载体 pcDNA3.0 SVV 。

摘要：背景:构建大鼠小肠移植模型是研究小肠移植排斥反应的重要基础,实验中对动物无法进行长期持续的静脉输液成为延误实验顺利开展的最大障碍。目的:将自制旋转持续静脉输液装置与大鼠异位小肠移植模型相结合,验证输液装置的可靠性和动物模型的稳定性。设计、时间及地点:随机区组,对照观察实验,于2008-03/06在解放军第四军医大学西京医院消化病研究所全军医学重点实验室完成。材料:选用健康雄性近交系F344/NCrl BR大鼠48只为供体,LEW/Crl大鼠48只为受体,建立同种异体节段性异位小肠移植模型。方法:将移植后的大鼠以随机化完全区组设计分为3组(n=16):对照组、输液组和他克莫司治疗组。对照组大鼠仅行小肠移植,移植前后不做持续静脉输液。输液组大鼠给予持续输注肠外营养液。他克莫司治疗组持续输注肠外营养液+静脉注射他克莫司0.5mg/(kg·d)。主要观察指标:移植后观察移植大鼠的一般状况和存活时间,并于移植后3,5,7d分别取各组大鼠移植肠标本(n=3)进行组织病理学检查,每组剩余的大鼠作存活时间观察,观察期限为5周。结果:对照组大鼠平均存活时间为(5.4±1.7)d,手术成功率56.3%。采用旋转输液装置的输液组和他克莫司治疗组大鼠手术成功率为90.6%,与对照组比较,差异有显著性意义(P30d,存活时间超过5周,与对照组和输液组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和输液组大鼠术后3,5,7d移植肠组织病理学检查分别符合轻、中、重度排斥反应。他克莫司治疗组大鼠术后3,5,7d未见明显排斥反应征象。结论:旋转持续静脉输液装置制作简单,固定安全可靠,能成功地为研究大鼠连续输液30d以上,与异位小肠移植模型联合应用,能建立稳定可靠的排斥反应模型。

摘要：背景:α-转化生长因子及表皮生长因子受体在不同病变中的表达和意义不尽相同。目的:观察α-转化生长因子及表皮生长因子受体在人类肝硬变组织中的表达。设计:非随机对照实验。材料:实验于2003-03/2004-05在解放军第四军医大学西京医院病理科完成。63份人类肝硬变组织选自解放军第四军医大学西京医院外科手术标本(患者知情同意),5份正常人类肝脏组织取自第四军医大学病理学教研室尸检组织(排除有肝脏疾病)。方法:运用免疫组织化学和原位杂交的方法对63份人类肝硬变组织及5份正常人类肝脏组织进行研究,计算α-转化生长因子及表皮生长因子受体阳性率并进行统计学处理。主要观察指标:免疫组织化学染色方法和原位杂交染色检测肝硬变组织中α-转化生长因子及表皮生长因子受体的表达。结果:免疫组织化学方法检测α-转化生长因子与表皮生长因子受体在63份肝硬变组织中的阳性率分别为84%(53/63)及52%(33/63),阳性产物为棕黄色颗粒,主要弥漫分布于肝细胞浆内,α-转化生长因子与表皮生长因子受体的表达在肝硬变组织中呈显著正相关(r=0.32,P0.05)。结论:在肝脏组织硬变形成过程中可能存在α-转化生长因子/表皮生长因子受体自分泌循环,而α-转化生长因子、表皮生长因子受体高水平表达是促使肝脏组织硬变形成的重要因素之一。

摘要：背景:bcl-2,c-myc基因在不同肿瘤中的表达和意义不尽相同。目的:探讨凋亡相关基因bcl-2和c-myc在人类大肠腺癌中的表达及其与预后的关系。设计:非随机对照的实验研究。地点、材料和干预:实验在解放军第四军医大学西京医院病理科完成。72例人类大肠腺癌选自西京医院外科手术及活检标本,5例正常人类结肠组织取自第四军医大学病理学教研室尸检组织(排除有结肠疾病)。运用HE染色和免疫组织化学方法对72例人类大肠腺癌及5例正常人类结肠组织进行研究,计算凋亡指数及免疫组化阳性率。主要观察指标:①不同分化程度的大肠癌凋亡指数。②大肠腺癌中Bcl-2及c-Myc的表达。③bcl-2和c-myc的关系。结果:大肠腺癌的细胞凋亡随肿瘤分化的不同,其差异有显著性意义(t=16.84,P<0.01),肿瘤分化程度越高,凋亡指数值越大。bcl-2和c-Myc在大肠腺癌中均具有较高程度的表达,两者的阳性率分别为61.1%和66.7%。Bcl-2与大肠腺癌的分化程度有关(χ2=11.29,P<0.05),肿瘤分化越低,其表达也就越低。c-myc在不同分化程度大肠腺癌的表达差异无显著性意义。Bcl-2和c-Myc在大肠腺癌组织中的阳性反应呈显著正相关(r=0.40,P<0.05)。结论:大肠腺癌细胞凋亡与肿瘤的恶性程度有关,bcl-2与c-myc均与大肠腺癌的细胞凋亡的调控有关。

摘要：目的研究survivin反义寡核苷酸对肾透明细胞癌786O细胞表达survivin蛋白、细胞凋亡、增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸(ASODN)。肾透明细胞癌细胞株786O分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600nmol/LASODN转染组。作用24h后收获各组细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况和流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数,MTT法检测survivin反义寡核苷酸对各组细胞的生长抑制率。结果电镜下可以见到典型凋亡样改变,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞survivin表达有不同程度减弱;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P0.05)。结论不同浓度survivinASODN转染后能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖。

摘要：目的:采用RNAi抑制APMCF1基因表达,并观察其对HepG2细胞生长和细胞周期的影响。方法:根据APMCF1基因序列及其二级结构特征,设计并合成针对APMCF1基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUNeo载体,并采用脂质体介导法将其稳定转染至人肝癌细胞系HepG2,RT-PCR检测siRNA对靶基因mRNA的抑制效果,然后采用MTT实验、流式细胞仪等对细胞的生长及细胞周期进行观察。结果:HepG2细胞的APMCF1基因表达被成功的抑制。APMCF1基因表达受抑制的HepG2细胞的生长速度加快;细胞周期发生改变,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增多,差异具有显著性。结论:HepG2细胞的APMCF1基因表达被成功的抑制。APMCF1基因对HepG2细胞的生长和细胞周期有明显的调节作用,可能是一个侯选的细胞周期调节基因。

摘要：目的:建立荧光原位杂交方法(fluorescent in situ hybridization,FISH)检测ROS1基因重排,评价检测试剂在临床样本中的检测情况。方法:依据ROS1断裂重排方式,设计、制备双色荧光探针。以人外周血培养细胞为检测对象评价ROS1基因重排检测探针的灵敏度和特异性,建立阴性阈值。以NSCLC患者的肿瘤组织样本为对象进行ROS1重排检测及性能评价。结果:建立的FISH方法在人外周血培养细胞检测中特异性和灵敏度均达到100%,在对192例临床样本制备的高密度组织芯片的检测中,筛查出1例ROS1 FISH阳性样本。结论:本研究制备的双色荧光探针可用于ROS1基因重排检测。通过ROS1重排检测,将有助于临床方案制定,辅助个体化治疗。

摘要：目的通过在兔腹部复制缺损创面并于创基放置硅胶垫片,用背阔肌肌皮瓣带蒂移植进行修复,构建一种新型的肌皮瓣带蒂移植模型。方法采用新西兰大耳白兔20只,在兔腹部设计软组织缺损创面约6.0 cm×8.0 cm,创基覆盖硅胶垫片,背阔肌肌皮瓣带蒂转移修复腹部创面。按移植术后时间的不同进行分组,每组5只。观察肌皮瓣的大体存活情况、肌纤维的组织病理学改变及肌瓣中微血管密度的改变。结果大体观察各组肌皮瓣均存活良好,无皮瓣坏死,取材时见肌肉外观红润。HE及Masson染色结果显示各组肌纤维形态良好。各组间微血管计数6周>5周>4周>3周,各组内微血管计数近端>中段>远端,差异有统计学意义(P<0.05)。结论以胸背血管为蒂的兔背阔肌肌皮瓣移植修复腹部创面是一种理想的肌皮瓣移植模型,适用于药物、细胞及血运重建等实验研究。

摘要：如何培养独立的科学研究能力是研究生学习期间面临的实际问题。认为从7个方面加强培养可能会有较好的效果。这7个方面分别是:搜集和分析科学信息能力;提出科学问题能力;针对科学问题提出假说并设计出解决方案的能力;熟练运用基本实验技术完成实验方案能力;分析结果得出科学结论能力;阐述结论的科学意义能力;科学论文写作能力。