摘要：目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA(shortinterferingRNA)表达载体pSUPER-S1和pSUPER-S2,观察其对HepG22.2.15细胞中的HBV基因表达的影响。方法设计并合成针对HBVS区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG22.2.15细胞,经200μg/ml潮霉素抗性筛选,4周后获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,免疫荧光染色检测细胞内抗原的表达,同时用RT-PCR检测靶基因mRNA的抑制效果。结果成功构建了针对HBVS基因的siRNA表达载体pSUPER-S1和pSUPER-S2,两种siRNA均能明显抑制HepG22.2.15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为83%和78%,免疫荧光染色显示siRNA能抑制细胞内抗原的合成,RT-PCR结果证实HBV的mRNA表达降低,而无关序列的siRNA和对照则无此作用。结论载体产生的针对HBVS基因的siRNA能稳定、高效、特异地抑制HBV基因的表达。

摘要：目的对人工颈椎复合关节系统球窝关节进行优化设计。方法建立人工颈椎复合关节系统的三维模型,并采用有限元方法对其进行网格划分;设置球窝零件球柄高度的尺寸的变化范围,模拟假体系统在体负载情况;对模型进行优化设计分析,对不同尺寸特征的复合关节系统进行应力、应变分析,并评价系统安全系数。结果系统最大Vonmises应力出现在该装置前屈位球柄和基底部相接处,并随球柄高值增大,最小安全系数呈近似抛物线变化。结论综合考虑系统的稳定性和活动度需要,认为当球柄高为6.0mm时,球窝关节结构最优。

摘要：目的　观察人白细胞介素 2 (IL 2 )基因在皮肤角朊细胞中的稳定表达及分泌情况。方法　lipofectamine介导法转染 ,以G4 18筛选出阳性克隆并做扩大培养 ,用DNA斑点杂交、RNA斑点杂交、细胞铺片原位杂交、免疫组织化学、Western印迹杂交分析及噻唑蓝 (MTT)法检测外源基因在角朊细胞内的表达及分泌情况。结果　DNA斑点杂交、RNA斑点杂交、原位杂交和免疫组织化学染色均显示转染组有阳性信号 ;Western印迹杂交分析显示转染组细胞在相对分子质量为 15 0 0 0处出现一条特异性着色带 ,其位置与IL 2的相对分子质量一致 ,IL 2表达时间可持续在 1个月以上 ;MTT法检测结果显示 ,第二代、第四代转染细胞培养上清中IL 2的活性分别是 2 7 7U/ml和 15U/ml。结论　外源基因在角朊细胞内能够持续、稳定表达基因产物 ,并能分泌具有生物学活性的蛋白质。用角朊细胞作靶细胞进行基因转染、基因表达、甚至基因治疗的设计是可行的。

摘要：目的:利用反义策略,设计、筛选针对agrA mRNA的反义锁核酸,阻断agr群体感应系统,降低MRSA毒力因子的表达,减小细菌生存压力,为抗耐药菌感染提供一种新策略。方法:应用Primer Premier 5.0和RNA structure 4.5两种软件,设计、筛选2条针对agrA mRNA的反义寡核苷酸序列,对其进行锁核酸修饰,并与透膜肽(KFF)3K共价连接,将这两条反义序列导入细菌体内。体外与MRSA共培养,观察细菌生存情况。实时定量PCR检测其对agrA及agr群体感受系统的效应分子RNAⅢ和下游毒力基因hla的转录水平的影响,Western blot检测其是否能抑制α-溶血素的表达。结果:两条反义锁核酸序列PLNA34和PLNA522在体外均无抗菌活性,但都能不同程度的抑制agrA,RNAⅢ和hla的转录水平;相比较而言,PLNA34的抑制效果更佳,并能明显抑制α-溶血素的分泌表达。结论:agrA可作为抗MRSA感染的新靶点,为新型抗MRSA药物的研发提供了理论基础。

摘要：目的　建立耐异烟肼 (isoniazid ,INH )结核分枝杆菌多重聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (multiple polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphism ,multi PCR SSCP)方法 ,快速、特异地同时检出aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况 ,用于快速诊断结核分枝杆菌对INH的耐药性。方法　根据结核分枝杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列 ,分别设计出 3对特异性寡聚核苷酸引物 ,采用multi PCR及SSCP技术 ,同时检测对结核分枝杆菌耐INH起作用的这 3个基因的突变情况。结果　对H3 7Rv标准株、临床分离INH敏感株 (2 3株 )及INH耐药株 (3 5株 )分别采用常规PCR和multi PCR同时进行扩增 ,两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段 ,且结果符合率达10 0 % ;采用单基因PCR SSCP ,aphC启动子序列突变检出率 17% (6/3 5)、inhA序列突变检出率 2 0 % (7/3 5)、katG序列突变检出率 66% (2 3 /3 5) ;multi PCR SSCP突变检出率 83 % (2 9/3 5)。结论　耐药基因检测指导治疗是一种新探索 ,multi PCR SSCP方法敏感、特异 ,能同时快速有效地检测结核分枝杆菌aphC启动子、inhA、katG 3个INH耐药基因的突变 ,提高检验效率 ,有望成为临床指导用药的好方法。

摘要：指出研究生教育是精英教育,认为研究生要承载社会责任、履行历史使命、彰显时代风采、推动人类进步,必须走好"精英之路"。独创性地设计绘制了军事医学精英"成长路线图"。

摘要：目的用HPLC-MS测定健康受试者口服马来酸依那普利制剂后的血药浓度,估算受试制剂和参比制剂的药动学参数,评价两种制剂的生物等效性和相对生物利用度。方法采用随机二交叉设计试验,20例男性健康志愿受试者,单剂量口服受试制剂和参比制剂的马来酸依那普利片。以高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中依那普利和依那普利拉的浓度。采用SPSS及BAPP2.2软件处理计算主要药动学参数。结果受试制剂和参比制剂血浆中马来酸依那普利的t1/2分别为(1.33±0.22)和(1.25±0.37)h;ρmax分别为(238.59±55.40)和(230.61±78.29)μg.L-1,tmax分别为(0.70±0.20)和(0.80±0.20)h,AUC0-8h分别为(339.03±70.66)和(373.23±108.83)μg.h.L-1,AUC0-∞分别为(343.51±71.15)和(378.36±107.35)μg.h.L-1。依那普利拉的t1/2分别为(6.26±0.63)和(5.72±0.54)h;ρmax分别为(83.75±25.91)和(99.13±29.61)μg.L-1,tmax分别为(3.80±0.60)和(3.40±0.70)h,AUC0-36h分别为(812.02±181.88)和(803.35±199.50)μg.h.L-1,AUC0-∞分别为(832.99±180.85)和(817.36±201.78)μg.h.L-1,以依那普利和依那普利拉计算的人体相对生物利用度分别为(90.84±39.6)%和(102.8±31.3)%。结论两种制剂在健康人体内具有生物等效性。

摘要：提出一种以计算机辅助设计(CAD)和光固化快速成形为基础,精确设计和控制支架内部微观结构,实现支架外形与内部可控微结构一体化制造的方法。根据实际CT数据,应用三维CAD软件重构骨骼外形;依据利于细胞生长和促进成骨的原则,设计不同结构的支架内部微管道,控制微管道的尺寸、形状、走向、分支以及相互连通性。利用光固化快速成形技术构造相应的树脂模具,在模具中填充生物材料,待其固化后,通过热分解去除树脂模具,形成具有可控微结构的支架。光学显微镜下观察支架内部微管道结构,其结果与设计相符合。与传统支架构造方法相比,该方法在对支架外形重构和内部微结构制造的控制方面得到了改善。

摘要：目的 评价低浓度对比剂冠状动脉双源CT成像中联合应用低kV和迭代重建技术对于血管强化程度、图像质量和辐射剂量的影响.方法 连续收集第四军医大学西京医院放射科2012年1月至2013年1月120例行冠状动脉成像的患者,按先后顺序依照完全随机设计法编号,根据随机表随机分成2组：A组使用碘普罗胺370 mgI/ml,以常规kV扫描,重建图像采用滤过反投影（FBP）法;B组使用碘克沙醇270 mgI/ml,以低kV扫描,重建图像采用正弦确认迭代重建算法（SAFIRE）.测量2组冠状动脉主干近段及主动脉、肺动脉、室间隔和左心室的CT值,并比较两组图像的噪声、主观图像质量评分和有效辐射剂量.结果 2组亚组在各相同解剖部位的强化CT值差异均无统计学意义,图像噪声和主观图像质量评分差异也无统计学意义.低浓度组亚组的有效辐射剂量较高浓度组亚组分别降低了53.2％[（0.44±0.25）比（0.94±0.42） mSv,BMI＜23 kg/m2,P ＜0.01]和50.6％[（1.17±0.30）比（2.37 ±0.66） mSv,P＜0.01],差异有统计学意义.结论 当联合应用低kV和SAFIRE时,使用低浓度对比剂（270 mgI/ml）进行冠状动脉CT成像,依然可以提高血管的对比强化效果且不降低图像质量,还能极大降低有效辐射剂量.

摘要：目的通过动物实验观察椎弓根螺钉置入对腰椎形态发育的影响。方法取16只2月龄幼犬，随机分为三组。A组为空白对照组（3只），自L1-7做后路切开显露，暴露目标椎的椎板部分，仅造成对目标椎椎板的软组织剥离损伤。B组为对照组（5只），暴露目标椎椎板后，将螺钉穿过椎弓根，造成对目标椎椎弓根及神经弓中心软骨的隧道破坏后再将螺钉取出，螺钉不留置。C组为实验组（8只），暴露目标椎椎板后，将螺钉穿过椎弓根，造成对目标椎椎弓根及神经弓中心软骨的隧道破坏后不取出，螺钉留置于目标椎椎弓根内。实验的目标椎设计为L2、L4、L6，目标椎的上下两个相邻椎体的相应测量指标的平均值设计为其自身对照。CT测量术后当日及术后3个月的腰椎形态学指标，通过配对t检验比较各组目标椎在不同时期的形态学指标测量值与其自身对照值的差异情况，从而判断椎弓根螺钉的置入对脊椎形态发育的影响效果。结果C组目标椎的椎管面积、横径、纵径、椎弓根长度与相邻脊椎平均值比较差异有统计学意义（P〈0．05），而A组、B组与相邻脊椎平均值比较差异无统计学意义（P〉0．05）。各组椎体横径、纵径、高度与相邻脊椎平均值比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论椎弓根螺钉固定可影响幼犬腰椎椎管及椎弓的发育，可能导致医原性椎管狭窄而对于椎体发育无明确影响。仅破坏神经弓中心软骨联合而不留置螺钉对腰椎发育无明显的影响。