摘要：目的:使用骨钙素启动子构建骨组织特异性小发卡状RNA表达载体。方法:实验于2003-11/2004-09在解放军第四军医大学全军骨科研究所和全军整形外科中心完成。以HEK293细胞基因组为模板,利用聚合酶链反应扩增人骨钙素启动子。将骨钙素启动子、针对虫荧光素酶的小发卡状RNA编码序列和多腺苷酸信号依次克隆至pGL3-control载体的相应酶切位点,经双酶切鉴定和DNA测序证实后命名为pGL3-OCP-shLuc。将pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control分别共转染人胚胎肾细胞HEK293和人骨肉瘤细胞MG-63,48h后测定虫荧光素酶活性,计算相对活性。结果:使用特异性引物成功扩增出长度为830bp的人骨钙素启动子聚合酶链反应产物。DNA测序结果证实pGL3-OCP-shLuc中的小发卡状RNA表达框与设计完全一致。pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control共转染HEK293细胞后,虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异,而共转染MG-63细胞后虫荧光素酶相对活性显著降低,剔出效率约为69.8%。结论:成功使用人骨钙素启动子构建了小发卡状RNA表达载体,并实现了骨组织特异性RNA干扰,为将RNA干扰技术引入骨肉瘤基因治疗领域奠定了基础。

摘要：目的　为寻求保护皮瓣的有效药物 ,增加皮瓣的成活面积。方法　 2 4只豚鼠随机分成 2组 ,于背部设计 2cm× 8cm任意型皮瓣。实验组术毕即腹腔注射地塞米松 ( 5mg kg) ,术后 3d开始减量 ,7d停药 ,治疗组腹腔注射生理盐水。术后 10d计算皮瓣成活面积。结果　实验组 :皮瓣成活长度为 5 .3 5cm± 1.5 1cm ,对照组为 3 .0 5cm± 0 .74cm ,t检验示两组差异显著 (p <0 .0 1)。镜检显示 :实验组皮瓣白细胞显著减少 ,而对照组弥漫分布白细胞。结论　地塞米松可有效调理白细胞功能状态 ,是防治皮瓣坏死的功效。