摘要：为了深入研究铜绿微囊藻生物钟调控的分子机制,根据蓝藻钟基因的同源序列设计合成了简并引物,通过PCR和染色体步行的方法获得了铜绿微藻Microcystis aeruginosa PCC7820的生物钟基因簇kaiABC。kaiA基因全长873bp,编码一个由290aa组成,分子量大小为33.3kDa的蛋白;kaiB基因全长315bp,编码分子量大小为11.8kDa的蛋白;kaiC基因全长1563 bp,编码蛋白分子量大小为58.3kDa。Kai蛋白间的相互作用是昼夜节律计时产生的重要过程,利用酵母双杂交系统检测了三种Kai蛋白间的相互作用,结果表明KaiA、KaiB和KaiC蛋白自身及KaiA与KaiC、KaiB与KaiC之间都能发生明显的相互作用,而KaiB和KaiA之间没有检测到相互作用。

摘要：从核糖体DNA的转录间隔区ITS和18S rRNA的基因序列中设计特异性荧光核酸分子探针,采用全细胞杂交方法(即荧光原位杂交法)对锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea(Stein)Loeblich Ⅲ)、赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo(Hada)Hada)和球状棕囊藻(Phaeocystis globosa Scherffel)三种单胞微藻进行了分子鉴定,用荧光显微镜和流式细胞仪对杂交结果进行了观察.结果表明,实验所设计的特异性分子探针结合全细胞杂交方法和流式细胞仪检测手段能够有效地实现对上述三种赤潮微藻的检测.由于该三种藻细胞的细胞外被物存在差别,荧光显微镜检测效果存在差异,即在荧光显微镜下,赤潮异弯藻和球状棕囊藻的杂交细胞的荧光强度比锥状斯式藻杂交细胞的荧光强度弱,在一定程度上影响了观察效果.同时,用该方法还成功地从模拟自然海区混合样品中检测出球状棕囊藻.因此,该研究方法适用于对实验室和自然海区样品的赤潮微藻的检测.

摘要：参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究。结果表明 ,克隆获得一长为 114 9bp的基因。经蛋白质保守区域研究 ,初步判别该基因为mtlD结构基因。将该基因与pBV2 2 0质粒构建成高效表达原核重组载体pBH。SDS PAGE电泳表明 ,含pBH的转化子产生特异的、分子量约为 4 1kD的蛋白带 ,表达量约占菌体可溶性蛋白 6 7%。转化子的耐盐水平比对照提高了约 1/5。在含 0 9mol/LNaCl的液体培养基中 ,转化子培养 2 4h后其生物量约是对照的 10 2倍 ,甘露醇含量约是对照的 4 1倍。可见 ,假单胞菌的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因是一个重要的耐盐相关基因 ,该基因已在GenBank登记 ,代号为AY112 6 96。

摘要：从海洋木栖真菌HLY-2分离得到的真菌环氧二烯(Mycoepoxydiene)是新发现的高抗肿瘤活性化合物。通过正交设计,改良普通半海水PD培养基的配方,比较固体和液体两种发酵方法,得到了使该化合物产量大幅提高的最佳培养条件:在固体发酵条件下土豆250g/L,海水300mL/L,葡萄糖30g/L,乳糖50g/L,磷酸二氢钾0·65mmol/L,硫酸铵1g/L,产量高达543mg/L,比普通的PD培养基提高了43倍,也比液体发酵的最高产量提高了近15倍。同时还对固体发酵和液体发酵造成的产量差异进行了分析。并检验了发酵产物的抗肿瘤活性。

摘要：秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种重要的模式生物,目前在***中发现的许多基因在序列和功能上与哺乳动物的基因有很高的同源性,对其基因功能的研究有助于阐明哺乳动物的基因功能。为检测细菌介导的通过发夹结构表达双链RNA(dsRNA)的RNA干扰(RNAi)在***中的作用效果,我们设计并构建了可以转录表达母源极性基因par-1的发夹dsRNA的RNAi载体,并转入*** HT115中,经过IPTG诱导后浓缩。浓缩菌液在25℃下喂食***48h后,观察***胚胎发育情况,同时以含有空载体的菌液作为对照,并与par-1突变体及野生型比较。结果显示:发夹结构表达的dsRNA对par-1基因进行RNAi后,虫体内par-1 mRNA几乎消失,***早期胚胎分裂不对称性丧失,par-1(RNAi)干扰率在95%以上。

摘要：目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构建到原核表达载体pET-His中,氨苄青霉素平板筛选及PCR、酶切鉴定,挑选出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS分析鉴定,采用透析法重折叠复性,亲和层析分离纯化得到分子量为12700的带有组氨酸标签的重组CV-N融合蛋白。用亲和层析分离纯化后的CV-N融合蛋白作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫昆明小鼠,经过31天的免疫,获得抗CV-N的多克隆抗体。结果:成功地获得了CV-N基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,表达量高达42.0%。用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测得抗体效价超过1∶8000,Westernblot检测结果显示,该抗体能特异性地与CV-N抗原产生明显免疫亲和反应。结论:建立原核高效稳定表达CV-N系统,获得具有生物学活性的CV-N蛋白,所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性,为进一步研究其功能奠定基础。

摘要：株高是水稻重要的农艺形状之一,植株过高将导致倒伏和减产,目前,很多新的技术究被用来鉴定,图位克隆与水稻株高相关的基因及机理的研究,本实验选择优质早籼稻佳禾早占种植苗和经过组培获得的矮化突变水稻为材料,为研究比较它们间的遗传物质上差异,根据康耐尔大学的资料设计了311对SSR引物对佳禾早占种植材料和组培材料进行分析,对两种材料进行PCR多态性扩增,结果发现两者间存在多态性的引物有88对,多态性比例达到30.3%。在矮杆材料中不但验证了已报道的11个与调控株高性状基因相连锁的标记连锁群,同时在第3号染色体和第9号染色体上还获得了两个以前基本未有报道的标记集中分布区域。结果说明,该培养基培育出的佳禾早占水稻后代所表现出的矮杆性状与亲本在遗传物质上确有明显差别。该结果有助于挖掘和定位新的矮杆基因,并有利于今后在水稻育种中进行水稻株高性状的控制,同时也为开展矮化性状机理的研究提供有利的实验材料。

摘要：霍乱弧菌CTB蛋白具有免疫佐剂活性。根据已发表CTB基因的序列设计一对引物，从一株霍乱弧菌中扩增出CTB基因，测序后发现该基因全长375bp，与国内分离的六株CTB基因的同源性达96．0％-99．2％。将该基因与pTWIN1连接构建了原核表达载体pTWIN1-CTB，重组表达载体转化BL21（DE3）表达菌株，0．8mmol／LIPTG诱导4h后，收获的细菌总蛋白SDS—PAGE电泳显示CTB在原核表达系统中得到表达，融合蛋白大小与理论值符合，蛋白产量占细菌总蛋白的20％左右，主要以包涵体形式存在，Western杂交和GM1-ELISA结果表明重组蛋白具有免疫原性和粘膜佐剂活性。

摘要：用高等植物钙调蛋白的保守序列设计两端引物 ,以红树植物海桑属无瓣海桑Sonneratiaapertala总DNA为模板 ,扩增出无瓣海桑钙调蛋白基因 ,并以之构建重组质粒pT ACaM .经测序分析比对 ,发现无瓣海桑钙调蛋白基因全长 1418bp ,其中第 1外显子 76bp ,第 2外显子 371bp ,中间为一 946bp的内含子所隔开 .编码 148氨基酸的蛋白质 ,其编码区序列与已知的其他高等植物的钙调蛋白基因核苷酸序列同源性高达 85 %以上 .而蛋白质序列同源性达95

摘要：胸腺素α原(ProTα)作为一种免疫增强剂,对各种免疫缺陷疾病、病毒感染以及肿瘤都具有一定的作用.此外ProTα可以作为核蛋白参与细胞增殖,在肿瘤的预测、诊断及治疗中有一定应用.根据人胸腺素α原已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(P1/P2),应用RT-PCR法从中国人外周血中克隆到ProTα基因,将扩增产物连接到pMD18-T载体中并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组质粒进行序列测定;同时用EcoRI和BamHI双酶切PCR产物,将该基因片断插入经同样双酶切的质粒pGEX 6P-1中,转化大肠杆菌BL21中进行表达.结果表明,克隆到的ProTα基因与参考的氨基酸同源性为99.70%;原核表达产物经过SDS-PAGE电泳分析,融合蛋白分子量为37 ku,主要以可溶形式存在.