摘要：目的观察补肾方治疗肝肾阴虚兼湿热未尽型慢性乙型肝炎的免疫调控作用机制。方法收集HBV DNA阳性、ALT异常的肝肾阴虚兼湿热未尽型慢性乙型肝炎患者35例,其中治疗组22例给予补肾方治疗,对照组13例给予α-2b干扰素,疗程6个月,分别于用药前后检测患者谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)和HBV DNA水平,用流式细胞法检测外周血自然杀伤细胞(NK)的免疫效应分子穿孔素(PF)、颗粒酶B(GrB)、颗粒溶素(GNLY)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达情况。结果两组治疗后ALT及AST均低于治疗前(P<0.05,P<0.01),治疗后组间比较差异无统计学意义。两组治疗后中医证候总积分都明显下降(P<0.01);治疗后治疗组总积分明显低于对照组(P<0.05)。治疗组治疗后的中医证候疗效总有效率明显高于对照组(P<0.05)。治疗组治疗后PF(%)34.86±31.60和GNLY(%)25.72±24.98均低于治疗前69.62±27.58,64.54±25.96(P<0.05),与对照组治疗后比较差异无统计学意义。结论补肾方治疗肝肾阴虚兼湿热未尽型慢性乙型肝炎的免疫调控作用机制在于降低NK细胞的相关免疫效应分子的表达,促进受损肝脏的痊愈。

摘要：目的研究慢性HBV感染者外周血自然杀伤细胞（NK细胞）免疫效应分子表达与感染状态的相关性。方法健康人作为对照组，慢性HBV感染者根据感染状态分为肝功正常高病毒复制组、肝功能正常低病毒复制组、肝功能异常高病毒复制组、肝功能异常低病毒复制组。应用流式细胞法检测外周血NK细胞的穿孔素（PF）、颗粒酶B（Gr B）、颗粒溶素（GNLY）、肿瘤坏死因子（TNF）α和干扰素（IFN）γ的表达，分析其与感染状态的相关性。组间比较用单因素方差分析；相关性分析采用直线相关Pearson分析。结果阳性细胞百分比同对照组（31．50％±27．64％）相比，肝功能正常高病毒复制组（59．74％±30．82％）和肝功能正常低病毒复制组（61．89％±33．30％）的GNLY表达增加有统计学意义；同对照组（57．38％±23．69％）相比，肝功正常高病毒复制组（39．89％±21．30％）、肝功能异常高病毒复制组（37．54％±18．79％）的IFNγ表达降低，P值均〈0．05，差异有统计学意义；肝功能正常高病毒复制组的PF、Gr B、GNLY（阳性细胞百分比分别为56．98％±38．34％、81．53％±19．58％、59．74％±30．82％）和肝功能正常低病毒复制组的PF、Gr B、GNLY（阳性细胞百分比分别为62．95％±31．98％、84．51％±14．57％、61．89％±33．30％）表达高于肝功能异常高病毒复制组（阳性细胞百分比分别为35．47％±29．64％，66．55％±22．92％，42．03±33．17％），P值均〈0．05，差异有统计学意义；除了TNFα和GNLY不具有相关性外，PF、Gr B、GNLY、TNF仅和IFNY之间呈两两正相关关系。结论高病毒复制水平的HBV感染者外周血NK细胞表达的IFNγ明显低于正常对照组；肝功能正常的HBV感染者外周血NK细胞表达的PF、Gr B、GNLY水平明显高于肝功能异常者。

摘要：胆汁酸是胆固醇在肝中降解的代谢产物,在肝内蓄积可引起肝脏疾病,可造成肝损伤以致肝纤维化。实验采用二甲基亚硝胺(DMN)大鼠肝纤维化模型,分为正常组、模型组和4个给药组。造模4周,给药组分别灌胃给药2周,模型组与正常组同时给予等量灭菌水。实验以血清胆汁酸为标识物,通过检测并观察肝功能指标和胆汁酸代谢的变化,辨识与肝损伤相关的胆汁酸类靶标,首次从胆汁酸代谢水平评价人工虫草菌丝及其组分对肝纤维化大鼠逆转作用并探讨其可能的机制。主要研究内容和结果如下:对牛磺氨酸结合型胆汁酸、甘氨酸结合型胆汁酸和游离型胆汁酸共17种内源性胆汁酸进行了定量分析,结合血清生化指标检测、病理组织切片检查对模型进行了肝损伤评价。造模后ALT,AST活性和TBil含量都显著性升高,Alb含量显著降低。病理组织切片检查HE染色显示模型组正常肝小叶结构破坏,肝细胞水肿,汇管区结缔组织增生,给药组不同程度病理变化减轻。虫草菌丝及其组分可能主要通过激活与HDCA,TCA,TCDCA,TLCA,TUDCA,UDCA,THDCA代谢有关的受体或阻断相关的信号通路而影响大鼠体内胆汁酸的代谢。

摘要：目的研究抑毒方治疗乙型肝炎核心相关抗原(hepatitis B e-antigen,HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者的疗效及对T细胞亚群的数量及功能变化的影响。方法 57例HBeAg阳性CHB患者,根据治疗方案,随机分为单用恩替卡韦组(对照组)和恩替卡韦联合抑毒方组(治疗组)。治疗6个月后观察治疗前后ALT、AST、HBV-DNA、HBV-M、肝功能复常率、HBV-DNA转阴率、HBeAg转阴率、中医证候积分变化;应用流式细胞术检测HBeAg阳性CHB患者外周血中自然杀伤(NK)T细胞的数量和分泌γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)的量,以及Th1、Th2、Tc1、Tc2细胞的数量。结果两组共有7例病例脱落。与对照组比较,治疗组能够明显降低ALT、AST、HBV-DNA水平及中医证候积分(P0.05)。对照组能够明显增加NKT细胞分泌IFN-γ,减少分泌IL-4,增加Tc1细胞的数量,导致Tc1/Tc2比值升高,而治疗组不但可以增加NKT细胞的数量,使IFN-γ分泌增加,IL-4分泌减少,而且能够明显增加Th1、Tc1细胞数量,降低Th2、Tc2细胞数量,导致Th1/Th2、Tc1/Tc2的比值升高(P<0.05)。结论抑毒方能够有效改善HBeAg阳性CHB患者的肝功能、抑制HBV-DNA复制、改善临床症状;抑毒方的作用机制可能是通过增加NKT细胞的数量,使NKT细胞分泌IFN-γ增加,分泌IL-4降低,调节Th1/Th2与Tc1/Tc2之间的平衡而发挥作用。

摘要：文章从影响生精功能相关基因的角度探讨雷公藤多甙抑制小鼠生殖功能的机理,将小鼠随机分为对照组、雷公藤多甙组,应用雷公藤多甙灌胃造成雄性小鼠生殖功能障碍,通过与雌鼠(1:2)合笼观察怀孕率和睾丸组织变化,并采用基因芯片技术观察小鼠睾丸组织的基因表达。结果发现雷公藤多甙组小鼠较对照组怀孕率明显下降,尤其是在8周后怀孕率为0。睾丸曲细精管管壁上生精细胞数量减少,曲细精管内生精细胞部分或全部脱落,阻塞于管腔内,并发现有1932条基因表达出现异常,与生殖相关基因354条,上调112条,下调242条。其中有已经公认的与生殖密切相关的基因Herc4、Ipo11和Mrto4等的表达异常。提示雷公藤多甙引起的小鼠生殖功能障碍与其致生精相关基因的表达异常有关。

摘要：目的探索肝纤维化形成过程中肝组织蛋白质组的变化，部分解析肝纤维化发生、发展的病理生理机制。方法采用四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝纤维化模型，应用双向凝胶电泳技术分离大鼠肝组织总蛋白质，经考马斯亮蓝染色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异蛋白质点。采用Westemblot、免疫组织化学方法对细胞角蛋白（CK）8、CK18进行蛋白质表达水平的验证。计量资料采用单因素方差分析中的LSD法或非参数检验中的H检验进行统计学分析。结果大鼠造模后，随时间的推移，肝纤维化评分逐渐增加（3周组〈6周组〈9周组），建立了正常大鼠和大鼠CCl4肝纤维化形成过程3、6、9周肝组织双向凝胶电泳图谱，质谱鉴定了44种差异蛋白质；采用Westemblot、免疫组织化学方法对CK8、CK18的验证结果与双向凝胶电泳结果基本一致。正常组及3、6、9周模型组CK8／CKl8蛋白相对表达量分别为：0．113士0．005／0．170±0．030、0．473±0．046／0．530±0．070、0．682±0．087／0．780±0．080、0．837±0．096／1．390±0．130，各组间差异均有统计学意义旷值分别为196．085／74．088、13．870／16．115、75．800／75．900，（P值均〈0．01）。结论CCl4大鼠肝纤维化形成与发展过程中差异表达蛋白质的功能主要涉及细胞生长、发育与分化，细胞增殖与凋亡，血管新生或重构，氧化应激，物质代谢及转运，信号转导等。

摘要：目的:探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法:本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组(5只)、模型组(18只)和扶正化瘀方组(14只)。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体(TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ)、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂(SB-431542)组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果:体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论:扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。

摘要：目的基于清热利湿与滋养肝肾不同功效古典方剂的干预效应,探讨二甲基亚硝胺(dimethylni-trosamine,DMN)诱导大鼠肝硬化的方证病理学基础。方法腹腔注射DMN4周制备大鼠肝硬化模型,造模2周末取6只模型大鼠作给药前观察,其余模型大鼠随机分为模型对照组、茵陈蒿汤(yinchenhao Decoc-tion,YCHD)组及一贯煎(yiguanjian,YGJ)组;各组于继续造模同时给予不同方剂的煎剂经口灌胃2周,正常大鼠与模型对照组给予同量等渗盐水,4周末处死大鼠,获取血清与肝组织样品,观测肝功能、肝组织病理学、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,检测肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性;免疫印迹检测肝组织α-SMA、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、血小板衍生生长因子(platelete-derived growth factor,PDGF)以及肝脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid bindingprotein,L-FABP)、转铁蛋白(transferrin,Tf)表达的变化。结果与模型对照组比较,YCHD组肝功能显著改善;肝组织Hyp含量与α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05),显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成,而YGJ无明显作用。肝组织TNF-α与PDGF表达在YCHD组显著减少,而YGJ组TNF-α进一步增加,PDGF无明显变化;YCHD组肝组织MDA含量与GST活性显著降低(P<0.01或P<0.05),GSH含量、L-FABP及Tf蛋白表达显著增加(P<0.05),而YGJ组仅见GSH显著增加(P<0.05)。结论茵陈蒿汤显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成;DMN大鼠肝硬化形成期的肝组织炎性病变及其过氧化损伤是茵陈蒿汤清热利湿效应的方证病理学基础。

摘要：目的:研究虫草菌丝治疗二甲基亚硝胺(DMN)模型大鼠肝纤维化有效组分及其作用机制。方法:大鼠ip 0.5%DMN 5 ***-1,每周连续3 d,共4周。造模结束后,模型大鼠随机分组,治疗组分别以虫草菌丝水煎液(CsB)及其组分(C12)以生药800 ***-1ig,每日1次,共2周;正常组及模型组以等量生理盐水ig。疗程结束后,分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST),血清白蛋白(Alb)及血清总胆红素(TBiL)含量,检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、观察肝组织病理及胶原沉积变化,Western印迹法检测肝细胞生长因子α(HGF-α)的表达,TUNEL染色检测大鼠肝细胞凋亡并计算凋亡数量。结果:与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠血清ALT,AST活性、TBil含量和大鼠肝组织Hyp含量显著降低,Alb含量显著升高(P<0.05)。与6周模型组比较,CsB及C12治疗组的坏死出血、炎性细胞浸润、胶原增生、纤维间隔形成有所改善。与模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝组织的蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝细胞凋亡数量显著降低(P<0.01)。结论:CsB及C12能够显著改善肝功能,有显著抗肝纤维化作用。CsB和C12能促进HGF-α表达,抑肝细胞凋亡,使肝细胞凋亡和增殖达到平衡状态,阻断和逆转肝纤维化。

摘要：目的筛选古典方剂黄芪汤抗肝纤维化的有效组分及配伍作用。方法 (1)4周内给大鼠腹腔注射二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)12次制备肝纤维化模型,于造模第3周首日开始给药干预至4周末。采用均匀设计对黄芪汤中4种组分(分别为黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、甘草酸、甘草总黄酮)以4因素8水平安排给药;以肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性为观测指标,采用逐步回归法分析其抗肝纤维化效应的最优组方。(2)组分复方的再验证:模型制备及给药方法同上,采用上述实验获得的组分复方,与原方对照,观测大鼠肝组织胶原染色、Hyp含量及血清肝功能等变化。结果通过均匀设计研究,确定最优组方为组分复方(黄芪总皂苷、甘草酸的配伍比例为164:48),并得到有效验证。与模型组比较,组分复方及黄芪汤均可显著改善肝纤维化病理组织学变化,显著降低肝组织Hyp含量、血清ALT、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0.05);组分复方在降低肝组织Hyp含量及降低血清ALT活性方面均优于其分别单用组(P<0.05),降低血清ALT活性的作用优于黄芪汤原方(P<0.05)。结论黄芪总皂苷和甘草酸是黄芪汤发挥抗DMN大鼠肝纤维化作用的有效组分;两个组分配伍在降低肝组织胶原沉积及降低血清ALT活性方面具有明显的协同效应。