摘要：目的探索基于中药复方配伍理论的抗肝纤维化有效组分复方的研究方法和意义。方法以抗肝纤维化中药"扶正化瘀胶囊"中4种已知的有效组分或成分(虫草多糖、丹酚酸B盐、苦杏仁甙、绞股蓝总皂甙)为研究对象,分别运用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)和四氯化碳(CCl_4)诱导的2种大鼠肝纤维化模型,采用均匀设计法"4因子8水平表"分组设计,治疗性给药;以大鼠肝组织胶原含量羟脯氨酸(Hyp)测定为筛选指标,并经均匀设计回归分析获得"最佳配方"。以上述2个不同模型研究获得的各自最佳配方为观察对象,以扶正化瘀胶囊以及四种有效组分合方(最佳配方加被筛除的有效组分)为对照,运用上述2种动物模型,通过观察肝组织Hyp含量和血清ALT活性检测和肝组织纤维化的变化,对所得配方的治疗效果再次进行比较和验证实验。结果(1)DMN模型试验筛选的A配方(虫草多糖60 mg、苦杏仁甙80 mg、绞股蓝总皂甙50 mg)和CCl_4模型试验筛选的B配方(虫草多糖20 mg、苦杏仁甙160 mg、绞股蓝总皂甙50 mg)皆提示由虫草多糖、苦杏仁甙、绞股蓝总皂甙3种有效组分配伍为最佳,但两者量比不同;(2)验证实验显示A配方和B配方均疗效显著,与扶正化瘀胶囊相当(P>0.05),而A配方和B配方添加被筛除的丹酚酸B盐后,显示疗效下降。结论(1)均匀设计在中药有效组分或成分配伍研究中有重要应用价值;(2)基于中药传统复方的有效组分的合理配伍可以达到"重现原复方效应"的目的;(3)有效组分或成分配伍,有内在的量变和质变规律,有"增效"也有"拮抗"现象,不能简单堆砌。

摘要：目的:探讨有显著抗酒精性肝损伤和肠道损伤作用的中药复方"健脾活血方"中改善肠道通透性作用的主效应中药,探索中药复方药理作用相应物质基础的分析方法。方法:采用Lieber-DeCarli酒精液体饲料(6周)诱导的大鼠酒精性肝损伤模型,根据均匀设计U_(17)(17^(16))表,对健脾活血方中8味中药分组实验,取材前3.5 h各组大鼠灌胃等量内毒素脂多糖,测定门静脉血浆内毒素含量作为肠通透性的考察指标。根据均匀设计法进行逐步回归分析,筛选出主效应中药或某种配伍组合。然后,对筛选出的主效应中药或组合再以该模型进行效应验证。结果:回归方程结果提示,健脾活血方中白芍、泽泻、五味子组合且生药剂量分别为1.33、0.50、0.17 g/kg时,抑制肠渗漏的效果最佳。验证实验显示,该"筛选"结果可靠。结论:白芍、泽泻、五味子是健脾活血方改善肠道通透性的主效应中药(组合);应用均匀设计法可有效揭示中药复方针对某一作用环节的主效应中药或组合。

摘要：目的:运用均匀设计方法,从"祛湿化瘀方"中的5个中药组分或成分中筛选出中药组分复方"BZL",并验证其对实验性脂肪肝大鼠的作用疗效。方法:采用高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝模型,将"祛湿化瘀方"中5种有效组分或单体(绿原酸、栀子苷、姜黄素、虎杖苷、白术多糖)作为研究对象,运用均匀设计方法进行分组设计,并且灌胃给药4周,筛选指标为肝组织甘油三酯(TG)含量,通过均匀设计和回归分析而筛选出中药组分复方"BZL"方。再以同样的脂肪肝动物模型,用母方"祛湿化瘀方"和罗格列酮作为对照,测定实验大鼠的肝组织TG含量和血清ALT活性变化,观察其肝组织病理变化(HE染色和油红O染色),并进行Ridit分析,以此来验证其作用疗效。结果:经过筛选,从而得到回归方程:Y=15.083X1+5.321X2-5.186X3-16.157X4+9.35X5+17.667X3X4-8.422X1X2-6.617X3X5+16.571(X1绿原酸、X2虎杖苷、X3白术多糖、X4栀子苷、X5姜黄素),根据此方程,当绿原酸、白术多糖、栀子苷取最大剂量时出现降TG最佳效应,表明对肝组织TG含量抑制作用最佳组分组合为白术多糖(X3)、栀子苷(X4)、绿原酸(X1)组合(即"BZL方");在相同的高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠模型中,筛选出的中药组分BZL均能可显著降低其肝组织TG含量和血清ALT活性(P<0.01),明显改善大鼠肝脏的脂肪变性。结论:通过均匀设计方法筛选出来的中药组分复方"BZL"方有显著防治高脂肪饮食诱导大鼠肝脂肪沉积和损伤的作用。

摘要：目的:以对实验性脂肪肝有显著防治作用的祛湿化瘀方为切入点,探索中药复方多途径、多环节药理作用的相应物质基础的研究方法。方法:采用CCl4复合高脂低蛋白饮食诱导的大鼠脂肪肝模型,运用"均匀设计法",根据复方中的5味中药(茵陈、栀子、虎杖、田基黄、姜黄),选用U11(1110)表进行组方设计所得10种组合进行干预,分别以肝甘油三酯(triglyceride,TG)、血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、丙二醛(malonyl-dialdehyde,MDA)为不同病理环节的考察指标,根据回归方程获得针对上述不同指标所提示的最佳效应中药或某种配伍组合,并根据其提示的效应中药或组合,重新分组实验进行验证。结果回归方程显示,降低肝脏TG的最佳效应组合是茵陈0.07g、田基黄0.05g、栀子0.17g、姜黄0.03g,降低ALT的最佳效应组合是茵陈0.33g、虎杖0.25g、田基黄0.25g、姜黄0.17g。而针对MDA未获得回归方程。验证实验证实了上述"筛选"结果的可靠性。结论:①均匀设计是可靠的剖析某一病理环节主效应中药或配伍组合的分析方法;②在整体实验水平,针对某一指标环节的最佳效应中药仍以中药配伍组合方式出现,也说明了中药配伍复方针对复杂病理变化的科学性。

摘要：目的评价慢性肝病量表（CLDQ）在乙型肝炎肝硬化中应用的信度和效度。方法将CLDQ用于297例乙型肝炎肝硬化患者的自评，同时评定患者肝功能Child分级，并以117例健康者为对照。通过条目分析、精密度分析、信度分析、探索性因子分析，以及反应度、区分度分析对量表进行总体评价。计数资料用疋。检验，计量资料两组间比较用两独立样本t检验，多组间比较用单因素方差分析，两两比较用Scheffe法。内部一致性以Cronbach＇s α系数、Gunman分半系数考察，相关性分析用Pearson相关系数，或Spearman相关系数以，方差分析考察区分度，结构效度检验用探索性因子分析的主成分法，并进行最大方差正交旋转。结果量表条目、量表整体及各维度无明显地板效应；条目的天花板效应大部分为30％～60％，腹部症状、活动和焦虑3个维度的天花板效应〈30％。总量表的内部一致性较好（Cronbach’s α=0．905），不同维度的内部一致性（Cronbach＇s α）为0．442～0．848；总量表与各维度相关系数均〉0．6（P值均〈0．01）。健康组量表总得分、各维度得分显著高于患者组垆值均〈0．01），患者组量表总得分和其中的4个维度得分在与不同肝功能分级之间呈现梯度变化，Child分级越重得分越低。探索性因子分析提取的7个公因子与原维度有中等的吻合度。结论CLDQ在乙型肝炎肝硬化中的应用具有较好的信度、内容效度、反应度和区分度，精密度和结构效度中等，可有效用于对乙型肝炎肝硬化患者的生活质量以及疗效的评价。

摘要：目的:探讨下瘀血汤对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的大鼠肝硬化形成过程中肝脏血管新生的影响。方法:采用50%CCl4-橄榄油溶液1mL/kg剂量腹腔注射,每周2次,共9周,制备大鼠肝硬化模型。造模3周和6周后,随机抽取正常及模型大鼠各6只,处死作动态观察,其余模型大鼠随机分为模型对照组(15只)和下瘀血汤组(11只),同龄正常大鼠6只设为正常对照。自第7周开始灌胃给予下瘀血汤干预治疗3周,于第9周末取材,苏木精和伊红染色及天狼星红染色观察肝组织病理学变化,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测肝组织中血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)、第Ⅷ因子相关抗原(von Willebrandfactor,v WF)的表达,蛋白质印迹法检测肝组织中血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGF receptor-2,VEGFR2)、补体衰变加速因子(complement decay-accelerating factor,DAF)和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth actin,α-SMA)的表达,明胶酶谱法检测肝组织中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的活性。结果:与正常组比较,模型大鼠肝组织受损,脂肪变性显著,胶原纤维沉积严重,随造模时间的推移,肝组织CD31、v WF、VEGF、VEGFR2、DAF和α-SMA蛋白表达逐渐升高,MMP-2、MMP-9活性显著增强(P<0.01)。与9周模型组比较,下瘀血汤显著改善肝组织损伤、脂肪变性及胶原纤维的沉积,降低肝组织CD31、v WF、VEGF、VEGFR2、DAF和α-SMA蛋白的表达及MMP-2、MMP-9的活性(P<0.01)。结论:下瘀血汤可有效地抑制CCl4诱导的大鼠肝硬化形成过程中的血管新生,其作用机制主要在于抑制肝星状细胞的活化,下调MMP-2、MMP-9的活性以及消解新生血管的完整性。

摘要：目的明确扶正化瘀复方抗肝纤维化的作用是否与其抑制自噬有关。方法C57小鼠随机分为正常组(N组)和造模组,造模组采用四氯化碳腹腔注射诱导小鼠肝纤维化模型,正常组注射等剂量橄榄油,1周后将造模组随机分为模型(M)组、雷帕霉素(Rapa)组、雷帕霉素加氯喹(Rapa+CQ)组、雷帕霉素加丹参酚酸B(Rapa+SalB)组、雷帕霉素加扶正化瘀方(Rapa+FZ)组,各药物组每日相应药物灌胃,N组、M组等剂量饮用水灌胃。5周后处死小鼠,HE和天狼猩红染色分别观察各组肝组织炎症和胶原沉积情况,碱水解法测定羟脯氨酸含量。蛋白质印迹法检测肝组织中自噬的表达变化和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3II/I)、p62、α-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白表达,冰冻切片免疫荧光染色观察各组肝组织ɑ-SMA及LC3B免疫荧光定位。两独立样本间的比较用t检验,多个样本均数比较采用LSD检验或DunnettT3检验。结果N组与M组小鼠体质量差异无统计学意义,各药物组小鼠体质量均明显下降(F=14.041,P<0.001)。M组和各药物组小鼠的肝质量/体质量比和脾质量/体质量比较N组均有明显增加(F值分别为26.992、6.589,P值均<0.001)。与M组比较,各用药组小鼠肝组织p62蛋白表达降低,其中Rapa组和Rapa+SalB组差异有统计学意义(F=3.085,P值分别为0.039、0.003),Rapa+SalB组则更低;与M组比较,Rapa组LC3BⅡ的表达显著升高(F=7.514,P=0.01)。免疫荧光染色显示N组小鼠肝脏内未见LC3B与α-SMA共染细胞,M组小鼠肝内见到共染细胞,各药物组小鼠肝内共染细胞明显多于M组,其中Rapa+FZ组的共染细胞较少。与N组相比,M组和各药物组胶原显著增加,各药物组胶原沉积较M组减少,各药物组间差异无统计学意义。与N组(值为77.75±48.79)相比,M组小鼠的肝组织羟脯氨酸明显升高(值为293.48±84.43)(F=3.015,P=0.005),各药物组小鼠肝组织羟脯氨酸含量均较M组减少,但差异无统计学意义(F=0.750,P=0.573)。与N组相比,M组α-SMA和I型胶原蛋白的表达均明显增加(F值分别为27.718、18.893,P值均<0.01)。Rapa组和Rapa+SalB组的α-SMA的表达与M组相似;而Rapa+CQ组和Rapa+FZ组较Rapa组和M组有显著降低(P值均<0.01)。Rapa+CQ组的I型胶原蛋白表达明显高于Rapa组(P=0.017),而Rapa+FZ组的I型胶原蛋白表达则明显低于M组(P=0.013)。结论四氯化碳诱导的肝纤维化模型中,观察到肝星状细胞的自噬;雷帕霉素能促进肝细胞和肝星状细胞的自噬;扶正化瘀方和丹参酚酸B均能对抗雷帕霉素促自噬的作用。

摘要：目的:在中医理论指导下,对先期所构建的乙型病毒性肝炎(以下简称"乙肝")后肝硬化患者报告结局评价量表(PHBC-PRO)预试表进行条目筛选及考核,为乙肝后肝硬化的中医临床疗效评价提供科学、客观、可量化的工具。方法:基于病证结合研究思路及前期临床流行病学调查结果,建立由64条条目组成的PHBC-PRO量表条目池及预调查表。通过对临床预调查的147例患者量表资料采用条目分布考察法、t检验法、离散趋势法、分辨力系数法、相关分析法、克朗巴赫系数法等方法的分析,对条目进行筛选与优化。结果:设定条目被所选方法中至少4种同时删除为筛选标准,最终形成由57个条目组成、涵盖3个领域(生理、心理及社会)的PHBC-PRO量表,经克朗巴赫系数法检验,提示信度较好(α=0.955)。结论:遵循国际PRO量表研制的原则和方法构建的中医PHBC-PRO量表,符合中医理论及量表规范、具较强的可操作性及适用性,可用于中医对乙肝后肝硬化患者临床证候及疗效的客观评价。

摘要：目的:以丹参酚酸B、红景天苷和青蒿琥酯3种具有抗肝纤维化作用且机制明确的中药单体成分组方,基于均匀设计方法筛选最佳配伍剂量,并进行验证。方法:雄性C57BL/6J小鼠,腹腔注射15%四氯化碳(CCl4)6周,诱导肝纤维化模型。①筛选实验:采用均匀设计法"三因素八水平"分组,共设8种配比组方。造模第2周起,各组小鼠灌胃给予相应剂量配比的组方溶液,连续5周。末次给药后,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平和肝脏羟脯胺酸(Hyp)含量,天狼猩红染色后光镜下观察肝组织形态学变化;以肝脏Hyp含量为主要指标,采用NOMEN法分析最优组方配比;综合ALT、Hyp和病理学变化,筛选药效最佳的配比组方。②验证实验:以扶正化瘀方为阳性对照药,验证筛选的成分组方。组方1为均匀设计分析得到的最优配比组方;组方2为课题组前期研究的经验配比组方,即丹参酚酸B(17.5 mg/kg)+红景天苷(610 mg/kg)+青蒿琥酯(79 mg/kg);组方3为筛选实验得到的药效最佳的配比组方。造模和干预方法同前。末次给药后,检测血清ALT、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝脏Hyp含量,HE染色和天狼猩红染色后光镜下观察肝组织形态学变化,比较各组肝纤维化程度。结果:①筛选实验:均匀设计筛选的最优组方配比为红景天苷(610 mg/kg)+青蒿琥酯(79 mg/kg);丹参酚酸B(14 mg/kg)+红景天苷(610 mg/kg)+青蒿琥酯(46 mg/kg)的配比组方抗肝纤维化效应最为显著,可显著降低血清ALT水平和肝脏Hyp含量(P<0.01),明显减轻胶原沉积。②验证实验:丹参酚酸B(14 mg/kg)+红景天苷(610 mg/kg)+青蒿琥酯(46 mg/kg)配比的组方3组血清ALT、AST水平及肝脏Hyp含量较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),肝细胞变性、坏死、出血、纤维增生、胶原沉积、炎症浸润等病理变化明显减轻,且胶原沉积程度分期显著改善,胶原阳性染色面积占比明显减少(P<0.01),其作用与扶正化瘀方相当。结论:丹参酚酸B(14 mg/kg)+红景天苷(610 mg/kg)+青蒿琥酯(46 mg/kg)的配比组方具有较好的抗肝纤维化作用,其药效与扶正化瘀方相当。

摘要：目的:从治疗非酒精性脂肪肝临床有效复方"祛湿化瘀方"已知的中药组分或成分中筛选防治脂肪肝的中药组分或成分复方,并运用相同动物模型验证其对实验性脂肪肝的疗效。方法:以"祛湿化瘀方"中5种已被认知的、能被分离提取或购买的有效组分或单体(绿原酸、栀子苷、姜黄素、虎杖苷、白术多糖)为研究对象,运用高脂饮食8周诱导大鼠脂肪肝模型,采用均匀设计"5因子10水平"分组设计。给药4周,以肝组织三酰甘油(TG)含量为筛选指标,并经均匀设计回归分析获得"中药组分或成分复方"。再次运用高脂饮食诱导的实验性脂肪肝动物模型,以祛湿化瘀方及西药罗格列酮为对照,通过检测实验大鼠肝组织TG、血清谷丙转氨酶(ALT)以及肝组织HE染色脂肪变性程度,对所得中药成分复方的抗脂肪肝疗效进行验证与对照。结果:①筛选试验获得回归方程为Y=71.966-19.798X4+18.687X1X4,提示栀子苷(X4)、绿原酸(X1)组合(命名为"ZL方")对肝组织TG抑制作用最佳;②验证实验结果显示,"ZL方"可显著降低高脂饮食诱导的脂肪肝模型大鼠肝组织TG含量,降低血清ALT活性(P<0.01)。结论:运用均匀设计筛选获得的ZL方对高脂饮食诱导的大鼠肝脏脂肪沉积及肝损伤具有显著的防治作用。