摘要：目的构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果。方法根据GenBank提供的bcl-2cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以酶切和DNA测序鉴定。脂质体介导重组质粒转染Raji细胞,采用RT-PCR法观察重组质粒对bcl-2mRNA表达的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果酶切及测序鉴定表明,成功构建bcl-2shRNA的质粒表达载体pGenesil-1-bcl-2-544和pGenesil-1-bcl-2-1009。转染Raji细胞48h后,RT-PCR结果显示Raji细胞中bcl-2mRNA表达分别下调了(31.95±3.02)%和(47.57±2.88)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Raji细胞凋亡率分别为(14.25±0.84)%和(11.96±0.79)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,它能有效沉默bcl-2基因在B细胞淋巴瘤中的表达并促进B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡。