摘要：目的探讨MRDWI对大鼠肝纤维化早期诊断及其分期的价值。方法采用四氯化碳法建立大鼠肝纤维化模型，大鼠给药后第2周开始，采用完全随机设计随机数字表抽样方法每周抽取模型组大鼠5～6只、对照组大鼠1～2只进行DWI检查，至第16周结束，共对72只肝纤维化成模组及30只对照组大鼠进行了DWI检查，测算不同b值（分别为0、300、600、800和1000s／mm^-2）时DWI的信号强度、ADC值和指数表观扩散系数（EADC）值。行DWI后4h内处死大鼠，行病理检查，成模大鼠按肝纤维化病理分期结果进行分组。不同b值的肝脏信噪比（SNR）比较，以及对照组与模型组、模型组不同分期组间ADC值和EADC值的比较采用完全随机设计资料秩转换的方差分析及SNK法多重比较，SNR与b值的相关性，以及肝纤维化分期与ADC值、EADC值的相关性采用秩相关分析。结果（1）模型组大鼠随着肝纤维化分期的增加，DWI信号强度呈增加趋势。（2）随着b值的增大，SNR呈下降趋势。b值为600、800s／mm^-2时DWI效果较理想，SNR分别为31．2±11．6和24．8±6．8。（3）72只肝纤维化组大鼠中，肝纤维化病理分期1期17只、2期21只、3期19只、4期15只。对照组、肝纤维化1～4期大鼠的ADC值分别为（1．65±0．38）X10^-3、（1．34±0．32）X10、（1．04±0．20）×10^-3、（0．994±0．19）×10^-3和（0．62±0．21）×10^-3mm^-2／s，EADC值分另0为（0．31±0．08）×10^-3、（0．34±0．09）×10^-3、（0．41±0．08）×10^-3、（0．46±0．08）×10^-3和（0．59±0．11）×10^-3mm^-2／s，差异均有统计学意义（F值分别为40．97和25．04，P值均〈0．01）。各组ADC值两两比较，除肝纤维化2期与3期比较差异无统计学意义外（P〉0．05），其余各组差异均有统计学意义（P〈0．05）。EADC值两两比较，除对照组与肝纤维化1期比较，肝纤维化2期与3期比较，差异无统计学意义（P值分别均〉0．05），其余各组差异均有统计学意义（P〈0．05）。（4）肝纤维化分期与ADC值呈负相关（r=-0．77，P〈0．01），与EADC值呈正相关（r=0．72，P〈0．01）。结论（1）DWI信号强度随着肝纤维化分期的增加而增高。（2）b取600或800s／mm^-2时，为肝脏DWI较理想的b值取值。（3）ADC值和EADC值能对肝纤维化进行分期，均具有较好的相关性。

摘要：背景与目的:已有研究表明K-ras基因点突变及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor receptor type1,IGF-IR)过表达在胰腺癌的发生发展过程中起着重要作用,针对K-ras mRNA和IGF-IR mRNA的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)均可抑制胰腺癌细胞的增殖。本研究旨在探讨针对K-ras基因12密码子点突变的硫代反义寡核苷酸(K-ras ASODN)联合IGF-IR硫代反义寡核苷酸(IGF-IR ASODN)对人胰腺癌Patu8988细胞体内外增殖和凋亡的影响。方法:顺序特异引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction using special sequence primers,PCR-SSP)法和基因测序检测Patu8988细胞K-ras点突变形式,根据点突变形式设计并合成K-ras ASODN。K-ras ASODN和IGF-IR ASODN分别单独和联合作用Patu8988细胞后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验及透射电镜观察其对Patu8988细胞增殖及形态结构的影响;流式细胞术(FCM)检测K-ras和IGF-IR蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测K-ras和IGF-IR mRNA表达水平;以Patu8988细胞建立裸鼠人胰腺癌模型,观察K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用在体内的抗肿瘤效果。结果:PCR-SSP法和基因测序检测表明Patu8988细胞存在K-ras基因第12密码子点突变,其突变方式为GGT→GTT。2～32mg/L的K-ras ASODN和2～32mg/L的IGF-IR ASODN单独应用均能一定程度抑制Patu8988细胞增殖、诱导细胞凋亡,两者联合应用较单独应用抑制作用更为显著(P<0.01)。体内实验表明,K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用较单独应用能更有效地抑制BALB/c裸鼠胰腺癌的生长(P<0.01)。结论:K-ras ASODN和IGF-IF ASODN两种反义寡核苷酸对人胰腺癌Patu8988细胞增殖的抑制具有协同作用,其机制可能是联合下调K-ras、IGF-IR蛋白及K-ras、IGF-IR mRNA表达水平。

摘要：目的检测人胰腺癌 Patu 8988细胞 K-ras 基因点突变形式,并观察针对该点突变的硫代反义寡核苷酸在体内外对 Patu 8988细胞增殖和凋亡的影响。方法顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法和基因测序检测 Patu 8988细胞 K-ras 点突变形式,根据点突变形式设计并合成硫代反义寡核苷酸(K-ras mutation ASODN)作用 Patu 8988,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)检测 K-ras 蛋白表达和细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测K-ras mRNA 表达水平;以 Patu 8988细胞建立裸鼠胰腺癌模型观察 K-ras mutation ASODN 在体内的抗肿瘤效果。结果 PCR-SSP 法和基因测序检测表明 Patu 8988细胞存在 K-ras 基因第12密码子点突变,其突变方式为 GGT→GTT。体外实验表明 K-ras mutation ASODN 组较正义寡核苷酸(SODN)组、随机寡核苷酸(RODN)组和空白对照组可明显抑制 Patu 8988细胞生长(P<0.01),并呈时间-剂量效应关系;转染48 h 后,K-ras mutation ASODN 组的 K-ras 蛋白和 mRNA 表达程度较SODN 组、RODN 组和对照组均明显降低(P<0.01),而细胞凋亡明显增多(P<0.05)。体内实验表明 K-ras mutation ASODN 较 SODN 组、RODN 组和对照组能有效抑制 BALB/C 裸鼠人胰腺癌的生长(P<0.01)。结论针对 K-ras 基因第12密码子点突变的反义寡核苷酸可明显抑制人胰腺癌 Patu8988细胞生长,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调 K-ras 蛋白和 K-ras mRNA 表达而起作用。

摘要：目的利用AdMax腺病毒系统构建人VEGF-C-siRNA腺病毒载体并在293细胞中扩增制备重组病毒。方法选择针对人VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,将其克隆入pDC316-EG-FP-U6载体中构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达。结果经限制性内切酶、PCR检测和GFP表达证实成功地构建了携带VEGF-C-siRNA的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论成功地构建了携带VEGF-C-siRNA片段的重组腺病毒载体,为进一步抗肿瘤淋巴管生成的研究奠定了基础。

摘要：目的检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因点突变及其突变方式,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法针对K-ras基因第12位密码子点突变方式(CGT、GTT、GAT)设计顺序特异性引物(SSP),对人胰腺癌细胞株Patu 8988进行聚合酶链反应(PCR),扩增产物经12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后判断该细胞株有无K-ras基因点突变及其突变方式。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因,扩增产物直接进行基因序列测定。结果PCR-SSP法检测人胰腺癌细胞株Patu 8988存在K-ras基因点突变,突变方式为GGT→GTT,其结果与基因序列测定完全相符。结论明确了人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因第12位密码子点突变方式(GGT→GTT),为胰腺癌的下一步基因治疗研究打下了坚实的基础;PCR-SSP方法检测K-ras基因点突变简便、快速、经济且特异性高,有望在临床上成为早期诊断和鉴别诊断胰腺癌的实用检测方法。

摘要：目的:建立稳定可靠的兔胰头癌动物模型,选择最佳的模型制作方法。方法:48只兔采用随机区组方法分为两组,每组24只,分别采用瘤块悬液法、瘤块植入法将肿瘤细胞注射至胰头内制作兔胰腺癌动物模型,计量数据比较采用双因素完全随机设计方差分析,分别于1、2、3和4周处死大白兔行移植组织解剖和病理学检查,观察2种不同建模方式的肿瘤生长情况及生物学形态。结果:建模过程中,2种方法成瘤率均为100%。瘤块植入法术后1周肿瘤体积为(0.90±0.13)cm3,离散系数为0.14;第2周肿瘤体积为(3.44±0.41)cm3,离散系数为0.12;第3周肿瘤体积为(7.53±0.69)cm3,离散系数为0.09;第4周肿瘤体积为(36.75±5.93)cm3,离散系数为0.16。瘤块悬液法术后1周肿瘤体积为(1.15±0.21)cm3,离散系数为0.18;第2周肿瘤体积为(4.94±1.64)cm3,离散系数为0.33;第3周肿瘤体积为(9.47±4.26)cm3,离散系数为0.45;第4周肿瘤体积为(46.31±16.77)cm3,离散系数为0.36。对术后肿瘤体积进行比较:1)瘤块植入法离散系数较小,生长相对稳定;2)生长时间对肿瘤生长体积具有显著影响,F=78.569 4,P=0.002 4;而生长时间与建模方法的交互作用对肿瘤生长体积无显著影响,P>0.05。术后第1周两组动物均未发现转移,瘤块植入法第2周未见种植性转移,第3周5只大白兔(83.33%)大网膜出现转移,瘤块悬液法第2周1只大白兔(16.67%)出现结肠、肓肠及腹壁种植转移,第3周4只大白兔(66.67%)出现结肠、盲肠及腹壁种植转移,2只大白兔(33.33%)出现大网膜转移。微观病理显示,瘤块与种植前瘤块病理形态基本一致,大部分瘤块悬液法HE染色下图像可见中间有较多坏死组织。瘤块植入法较瘤块悬液法肿瘤生长更为稳定。结论:成功建立了兔胰头癌动物模型,瘤块植入法是建立兔胰头癌动物模型的较佳方法。

摘要：随着腹腔镜外科的发展与技术进步，手术种类不断增加，传统甲状腺手术颈部留有明显的手术瘢痕，为了使颈部没有切口达到美观效果，1995年国外学者开始探讨如何利用腔镜进行甲状腺手术，腔镜甲状腺手术颈部切口微小或切口设计在隐蔽处，使颈部几乎看不到瘢痕或没有瘢痕，美容效果好，这是开展腔镜甲状腺手术的主要意图。但因腔镜甲状腺手术胸骨前径路到达手术区径路较长，分离的范围较大，故其创伤并非很小。

摘要：目的 对腹腔灌洗治疗急性胰腺炎的研究进行Meta分析。方法检索1980年1月到2004年12月MEDLINE、EMBASE、中国生物医学文献数据库以及查阅其他回顾性文献引用的文献中的随机对照临床试验。按照入选标准，有10项随机对照临床试验纳入本研究。由2名相关人员各自独立地对入选研究中有关试验设计、研究对象的特征、研究结果等内容进行摘录，并用RevMan4．2软件进行统计分析。结果腹腔灌洗治疗急性胰腺炎与对照组相比并不能显著改善生存率（OR=0．77，95%可信区间为0．50～1．18，P=0．23）。腹腔灌洗治疗急性胰腺炎与对照组相比也不能减少并发症（胰腺坏死、胰周液体积聚、腹腔内脓肿、菌血症、多器官功能不全等）的发生（OR=0．74，9596可信区间为0．49-1．10,P=0．14）。结论对于腹腔灌洗治疗急性胰腺炎，现有随机对照资料尚不能说明其可以显著降低病死率和减少并发症的发生。

摘要：目的构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP，探讨人类结肠癌BALB／c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP抑制血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达、结肠癌生长以及结肠癌淋巴管生成的效果。方法选择针对人类VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列，设计合成其相应的双链DNA，利用BamHI、HindⅢ双酶切插入pDC316-EGFP-U6载体后构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6，再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞，同源重组，酶切鉴定，包装扩增后得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6。裸鼠皮下注射LoVo细胞构建人类结肠癌皮下移植瘤模型24只，随机分为4组（每组6只）：以腺病毒、空病毒、裸siRNA以及PBS分别进行瘤内原位注射干预，计算肿瘤体积变化并绘制生长曲线，使用抗LYVE-1单抗和抗CD34单抗分别染色瘤内的血管和淋巴管，检测瘤内淋巴管和血管生成情况，计算微血管密度（MVD），微淋巴管密度（LVD）。结果腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组，腺病毒组与PBS对照组LVD分别为8．47±2．1，17．35±4．7（P〈0．05），腺病毒组与PBS对照组MVD分别为22．65±6．04，23．19±7．63（P〉0．05）。结论实验设计并合成的腺病毒载体介导的VEGF-C siRNA，在人类结肠癌裸鼠移植瘤模型中，瘤内注射腺病毒载体能显著抑制移植瘤的生长和肿瘤淋巴管生成，而对肿瘤血管生长无显著影响。

摘要：目的应用硫化磷酸修饰的碱基特异性引物和高保真DNA聚合酶所构成的突变敏感性分子开关技术结合琼脂糖凝胶电泳，快速检测乳腺癌及乳腺纤维腺瘤中DBC2基因7776C〉T突变频率。方法设计2对分别与DBC2基因7776位点突变碱基（C）和野生碱基（T）配对的硫化磷酸修饰的引物，硫化磷酸修饰等位基因位点特异性引物与组织DNA样本完全配对时，能被高保真聚合酶延伸，而硫化磷酸修饰等位基因位点特异性引物与组织DNA样本不完全配对时，不能被高保真聚合酶延伸。用此突变敏感性分子开关技术对85例乳腺癌组织DNA样本及10例乳腺纤维腺瘤组织DNA样本进行PCR检测，并利用凝胶成像系统对PCR产物进行分析。结果利用分子开关技术在85例乳腺癌组织DNA样本中检测出DBC2基因7776C〉T突变率为2．4％（2／85），10例乳腺纤维腺瘤未发现该突变。结论该突变敏感性分子开关技术结合琼脂糖凝胶电泳可快速检测乳腺癌DBC2基因7776C〉T突变。突变敏感性分子开关技术可在单碱基水平对相关基因突变进行特异性检测，提示其在乳腺癌等基因突变检测中具有广阔的应用前景。