摘要：目的构建并筛选靶向信号转导和转录激活因子3(Stat3mRNA)的微小RNA(MicroRNA)表达质粒。观察其在肝癌细胞系HepG2中对Stat3表达的影响。方法针对人Stat3mRNA设计3条MicroRNA序列,经退火成互补双链,将双链DNA插入线性质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒中,分别构建重组表达质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1、2、3等3组质粒,并测序鉴定。脂质体法转染重组质粒至人肝癌HepG2细胞中,观察转染效果。RT-PCR和Western blot分别检测Stat3mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖能力。结果成功构建靶向Stat3的MicroRNA重组质粒,经测序证实插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致,转染人肝癌HepG2细胞后,荧光显微镜下可观察到带有绿色荧光的HepG2细胞。流式细胞仪检测3组质粒的转染效率分别为:76%、73%和63%。RT-PCR分析pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1、2、3的抑制率分别为:73.5%、47.2%和39.6%,下调Stat3蛋白的比例分别为:89.1%、71.6%、67.3%。其中pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1的下调效应最明显。MiR-1质粒转染组的细胞凋亡率升高,增殖受抑制,与阴性对照质粒组和未转染组比较,差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。结论成功构建了靶向Stat3的MicroRNA表达质粒,其对肝癌HepG2细胞Stat3的表达及增殖有显著抑制。

摘要：我们设计了针对VEGF的发卡状核酶,观察其对肝癌细胞生物学特性的影响. 　　一、材料和方法 　　1.主要试剂和细胞系:Lipofectamine、G418购自Gibco公司;UNIQ柱式总RNA抽提试剂盒购自上海Sangon生物技术有限公司;人VEGF ELISA检测试剂盒购自晶美公司;人肝癌细胞系SMMC-7721由本室保存;引物由上海Sangon生物技术有限公司合成。