摘要：一氧化碳(CO)是一种重要的内源性气体递质分子,参与调节生命体的多种生理和病理过程.因此,选择性识别和高灵敏检测生物体内源CO具有十分重要的生物学和医学意义.荧光探针法具有选择性好、灵敏度高、适于高通量筛选,尤其是对生物样品无侵入性损伤,以及可实现实时原位检测等优势,因此,利用荧光探针技术检测细胞、组织和活体内CO浓度的变化是近年来研究热点之一.综述了近十年来CO荧光探针的研究进展,概述了相关荧光探针的设计理念、检测机理及生物应用,探讨了探针的结构和性能之间的关系,展望了CO荧光探针的发展趋势和应用前景.

摘要：过氧化氢是一种重要的内源性信号分子,参与调控多种生理和病理过程.缺血再灌注会诱导产生大量内源性过氧化氢,对细胞和组织造成严重损伤.聚集诱导发光探针能够规避常规荧光团浓度过大所引起的聚集荧光淬灭的问题.以4-乙烯吡啶修饰的四苯乙烯为荧光基团,苯硼酸为过氧化氢识别基团,设计合成了一种具有聚集诱导发光性质的长波长过氧化氢荧光探针.光谱测试结果表明,探针对过氧化氢具有较好的选择性和较高的灵敏度,最低检测限为6.9×10^-8 mol/L.共聚焦成像结果表明,探针具有较好的细胞通透性,可用于糖氧剥夺再灌注诱导HeLa细胞和脂多糖诱导斑马鱼内源性过氧化氢生成研究.

摘要：发展新型高效的亲水作用色谱分离材料对于极性化合物的分离分析具有重要的意义。本文设计合成了一种新型咪唑嵌合的氨基亲水作用色谱固定相(Sil-IEASP),并分别采用傅里叶变换红外光谱仪、热重分析仪和元素分析仪对该固定相进行了表征,结果表明该固定相制备成功。以核苷和核酸碱基为样品,分别考察了流动相中的水含量、盐浓度和pH对其保留的影响,结果表明所发展的固定相具有良好的亲水作用特性;此外,缓冲盐浓度和pH几乎不影响上述物质的保留。进一步将该固定相应用于分离尿嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶、尿苷和3种位置异构体(邻三联苯、间三联苯和苯并菲),与常用的氨基固定相相比,本文所发展的固定相具有更好的分离效果,有望在亲水作用色谱分离领域发挥潜在的应用价值。

摘要：设计合成了一种基于香豆素衍生物的"关-开"型荧光探针CO-NBS,用于选择性识别生物硫醇,包括半胱氨酸(Cys)、高半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH).采用紫外-可见吸收光谱和荧光光谱对该探针的光学性能进行研究,实验结果表明,该探针能够实现对Cys、Hcy和GSH快速、高灵敏性和高选择性的检测,检测限分别为92、30、62 nmol/L.此外,该探针具有低细胞毒性和良好的生物相容性,能够成功应用于活细胞和斑马鱼中的生物硫醇的荧光成像.

摘要：目的本实验设计开发了新型的亲和小体(affibody)-DNA四面体纳米结构用以支载小分子核苷类药物,以此提高其治疗效果,降低全身毒性。笔者选用5-氟尿嘧啶脱氧核苷(FUdR)作为典型的核苷药物,并通过化学修饰获得其亚磷酰胺形式的化合物。方法通过DNA固相合成技术分别将10个FUdR分子连接到4条DNA单链的5'末端,该结构通过linker与靶向配体affibody偶联。4条DNA单链再根据碱基互补配对的原则自组装形成具有靶向作用的affibody-FUdR-DNA四面体纳米药物。结果该纳米药物尺寸为20 nm,载药FUdR的摩尔比例为19.6%,其在血浆中稳定性良好。体外细胞实验显示该纳米药物对HER2高表达乳腺癌细胞BT474表现出高选择性和高细胞抑制活性(81.2%),而对HER2低表达细胞MCF-7具有较低毒性。结论Affibody-DNA四面体纳米结构作为1种简单而有效的主动靶向纳米递送载体,为核苷类抗肿瘤药物的运输提供了新的途径。

摘要：本文设计合成了一种基于硫醇-色烯点击反应的荧光探针CHMPC-Ac,用于半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)的识别检测.这些生物硫醇因巯基的强亲核性而与探针的不饱和酮发生迈克尔加成反应,导致色烯分子开环等分子内级联反应,生成具有强荧光的香豆素衍生物,分别使荧光强度增强107、69和66倍.CHMPC-Ac具有灵敏度高(Cys:15 nM;Hcy:26 nM;GSH:22 nM)和响应快(Cys:20 s;Hcy:50 s;GSH:30 s)等优点,并已应用于HepG 2细胞和斑马鱼体内生物硫醇的识别检测.

摘要：利用以阳离子共轭聚合物为能量供体的荧光共振能量转移(FRET)策略和滚环扩增放大技术,建立了一种新型的microRNA(miRNA)检测方法。阳离子共轭聚合物采用聚[(9,9-双(6’-N,N,N-三乙基铵)己基)亚芴基亚苯基二溴化物](PFP)。PFP是一种由大量吸光单元共轭而成的阳离子聚合物,具有独特的光捕获和荧光增强性能,可以和带有负电荷的DNA通过静电作用相互结合。SG是一种能够结合于所有双链DNA双螺旋小沟区域的染料,其在游离状态下,荧光微弱,但一旦与双链DNA结合后,荧光会大大的增强。首先,设计了一条可与目标分子特异性杂交的锁式探针和与RCA产物序列互补的DNA链。当体系中存在miRNA时,在T4 DNA连接酶作用下,锁式探针连接成环;随后,在phi29 DNA聚合酶和dNTPs共同作用下,在miRNA的3’端滚环扩增出一条与锁式探针序列互补的长单链DNA,所得产物与互补DNA链杂交形成双链DNA(dsDNA)。此时SG作为FRET受体掺入其中,形成SG-dsDNA共同体。随后, SG-dsDNA与PFP因静电相互作用而紧密接近,由于PFP的发射光谱与SG的激发光谱有重叠,因此二者之间可以发生FRET现象。反之,当体系中不存在miRNA时,挂锁探针则无法连接成环,阻止了扩增反应的进行及其产物与互补DNA链的杂交反应。加入SG后,由于SG与单链DNA的结合能力很弱, SG则游离于溶液中,不会与PFP发生有效的FRET。因此目标分子的浓度与体系的FRET效率直接相关。以let 7a作为待测miRNA分子,在0.05~5 nmol·L-1的范围内, let 7a的浓度与从反应体系测得的FRET效率(I520/I423)成正比。同时以无PFP参加的检测方案作为对比实验,证明了PFP确实具有提高灵敏度的作用。另外,以四种同族miRNA分子及两种其他miRNA分子作为干扰物质对方法的特异性进行了考察,发现除了两种与目标分子序列高度相似的物质存在干扰外,其他物质几乎不产生信号。利用该方法对细胞总RNA提取液中let 7a的含量及其加标含量进行了检测,测量所得回收率基本令人满意。所建立的方案不需要荧光标记探针,有效降低了检测成本,简化了操作步骤,在与miRNA相关的疾病诊断领域具有一定的应用前景。

摘要：目的采用毛细管区带电泳法(CZE)测定不同虫草菌粉制剂中多糖的单糖组成。方法设计正交试验优化制剂中所提取多糖的全降解条件;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生试剂,采用CZE法测定其单糖组成;电泳条件:未涂层弹性石英毛细管柱(70 cm×50μm,有效长度61 cm);运行缓冲液为40 mmol/L硼砂缓冲液(pH 10.1);检测波长245nm;运行电压13 kV;重力进样(10 cm×8 s)。结果多糖全降解的最优条件为硫酸浓度1.0 mol/L,温度100℃,时间5 h;心肝宝胶囊、百令胶囊、至灵菌丝胶囊和金水宝胶囊的多糖中均含有木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖4种单糖,但含量各有差异;4种制剂中多糖的单糖组成与冬虫夏草多糖中的单糖组成基本一致,且检测出了冬虫夏草中未见报道的木糖、鼠李糖和葡萄糖醛酸等单糖。对所建立的CZE法进行方法学验证,结果显示各单糖在0.01～0.20mg/m L线性关系良好,检测限0.205～0.397μg/m L,定量限0.684～1.323μg/m L,精密度RSD为0.8%～3.6%,重复性RSD为2.7%～4.7%,稳定性RSD为2.8%～4.7%。葡萄糖和半乳糖的平均回收率分别为96.1%～99.8%和95.1%～99.6%,其RSD分别为1.0%～2.0%和1.5%～1.9%。结论该方法快速高效,为虫草菌粉制剂质量标准的完善和虫草菌粉替代冬虫夏草的深入研究提供参考。

摘要：目的:测定复方南板蓝根颗粒中多糖的含量及其单糖组成。方法:采用硫酸-苯酚法测定多糖含量;测定条件:5%苯酚溶液1 m L,硫酸5 m L,检测波长490 nm。设计正交试验对该制剂中多糖全降解条件进行优化;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生试剂,采用毛细管区带电泳法,分析其单糖组成;电泳条件:未涂层弹性石英毛细管柱(52 cm×50μm,有效长度43 cm),运行缓冲液40 mmol·L^(-1)硼砂缓冲液(pH 10.1),检测波长245 nm,运行电压12 k V,进样量8 cm×10 s。结果:测得该制剂中多糖含量为1.708%~1.828%;多糖全降解的最优条件为硫酸浓度0.75 mol·L^(-1),温度100℃,时间5 h;其单糖组成为木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸。对所建立的毛细管区带电泳法进行方法学验证,结果显示其精密度RSD≤3.8%,重复性RSD≤5.5%,并且稳定性满足要求,回收率结果显示:半乳糖和半乳糖醛酸的平均回收率分别为99.7%~106.9%和94.8%~102.5%,其RSD分别为2.4%~4.9%和1.7%~4.6%。结论:本文为复方南板蓝根颗粒中多糖的测定及其质量标准的完善提供参考。

摘要：随着纳米技术的发展及其在生物医学等交叉领域的不断深入,纳米医学进入了空前繁盛的时代.基于有机、无机以及杂化纳米颗粒的多样化发展,具有独特物理化学性质的纳米制剂在疾病的诊断、治疗、生物成像等多个方面具有广泛的应用.纳米药物的发展也已迈入了新的阶段.通过材料创新、表面修饰、结构设计、新型仿生材料研制、内源性纳米囊泡提取等多种技术手段,传统上作为单一药物载体的纳米颗粒被赋予了多种新功能的同时,其在机体内的作用活性也得到了改善.新一代的创新型纳米药物为癌症等重大疾病的诊断及治疗提供了新的契机.