摘要：分子生物学是一门实践性很强的学科,其研究方法与技术是21世纪生命科学和医学生物学研究的重要基础和支撑,在创新型生物学专业人才培养中的作用倍受重视。作为分子生物学课程体系的重要组成部分,分子生物学实验教学的实际效果不容忽视。作者对多年分子生物学实验教学实践进行总结与思考,认为在实验教学中切实发挥实验指导教师的指导作用、强化学生基本功训练、在实验操作的间隔时段引入相关问题的探讨以帮助多数学生通过实验课讨论,加深对相关基础理论的理解,培养学生勤于思考、善于思考,逐步提高学生运用所学理论分析实际问题、发现新问题和设计实验的综合素质,是保证分子生物学实验教学效果的根本途径。

摘要：为开发以绿色荧光蛋白(GFP)为基因的原核表达载体,根据NCBI基因序列设计引物,通过PCR扩增获得GFP编码基因,经限制性核酸内切酶消化后将GFP定向克隆至原核表达载体pMAL-c2X中malE基因下游的EcoRⅠ与HindⅢ位点之间,与malE基因融合为一个表达框。重组产物转化*** TB1感受态细胞,在添加有50 mg/mLAMP、10μmol/L IPTG的LB平板上于37℃培养12～16 h后放置于25～30℃的培养箱中继续培养4～6 h,365 nmUV照射下挑取转化克隆,经扩大培养后用IPTG诱导GFP的表达并用SDS-PAGE检测表达效率。结果表明,融合在麦芽糖结合蛋白下游的GFP编码基因可以在宿主细胞中有效表达,在365 nm UV照射下,可以直接从加有50 mg/mLAMP、10μmol/L IPTG的LB平板上挑取发绿色荧光的重组克隆,SDS-PAGE分析结果显示其扩大培养物经IPTG诱导后可高效表达GFP。该结果为进一步构建以GFP为标记基因取代抗生素筛选标记的原核表达载体提供了切实的试验依据。