摘要：甲型和乙型流感病毒(Influenza A and B viruses, IAV, IBV)作为季节性流感的主要病原体,在人和动物中流行可造成较高的发病率和死亡率。目前,接种疫苗仍然是预防和控制流感最有效的方法。流感疫苗接种主要是诱导产生病毒中和抗体来抵抗流行毒株对机体的侵染。随着对流感病毒与机体免疫系统研究的不断深入,特异性T细胞免疫反应在预防流感病毒侵染机体过程中发挥的作用越来越被学者所关注。因此,明确机体特异性CD4^(+)和CD8^(+)T细胞抗流感病毒侵染的作用机制,并了解对其作用有影响的各种因素,这将有助于科研人员在流感疫苗设计过程中更加兼顾新型疫苗在激活特异性T细胞反应性能上的提升,为设计出可诱导强大、广谱而持久免疫活性的新型流感疫苗提供依据。

摘要：为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。

摘要：疫苗接种被认为是控制病原体和预防人类以及动物疾病最有效的方法之一.近年来由于病毒性疾病来势汹汹,传统疫苗如灭活或减毒活疫苗的局限性及潜在问题日益突显,而基因工程技术的进步使得疫苗设计和研发得以改进,由此衍生的病毒类基因工程疫苗作为下一代疫苗越来越受到研究者的高度关注.通过病毒类基因工程疫苗的类型,重点介绍不同疫苗的开发原理、特点及用途,探讨其应用前景和发展趋势,旨在为新发病毒类疾病疫苗的研发提供参考.

摘要：流感病毒的复制会同时受到宿主细胞因子的协助与拮抗。宿主细胞因子在应对流感病毒所表现出来“顺从与反抗”的两面性是未来针对宿主而非病毒本身的抗病毒药物设计的理论基础。这一概念也被称为宿主导向疗法(host-directed therapeutics, HDTs)。利用基因筛查技术已经筛选出能够调节流感病毒感染的宿主因子,这些因子可作为宿主导向抗病毒策略的候选靶点。然而,尽管在了解宿主靶点方面取得了进展,但是目前还没有可用于临床中针对流感病毒的宿主导向干预措施。就上述存在的问题,本篇综述将系统阐述基于基因敲除/敲低以及过表达筛选中发现的一些宿主因子的生物学特性,并且讨论分析这些因子用于宿主导向的抗流感策略中的潜在价值。

摘要：研究乳酸菌、乳酸菌与酵母菌混合菌剂以及黑曲霉对藜麦秸秆发酵饲料品质的影响,为藜麦秸秆在饲用方面的开发利用提供参考。利用微生物发酵以期改善藜麦秸秆的营养价值。乳酸菌单一发酵时,设定发酵时间、含水量和菌剂添加量3个试验因子,乳酸菌与酵母菌混合菌剂发酵藜麦秸秆试验中设定发酵时间、含水量和混合比例3个试验因子,均采用L_(9)(3^(4))正交原理设计试验,对粗纤维、粗蛋白、粗脂肪和可溶性糖4个营养指标做响应面法处理。同时做了黑曲霉对藜麦秸秆发酵饲料的对比试验。1)相同发酵条件下,混合制剂降解纤维素的作用比单一发酵剂明显;2)发酵处理后的藜麦秸秆饲料较未发酵的藜麦秸秆粗蛋白平均含量提高了约2.70%;3)发酵过程中粗脂肪含量变化较小,在0.24%~0.31%;4)发酵处理后,藜麦秸秆可溶性糖含量提高了约3%;5)黑曲霉具有明显的降解纤维素和提高可溶性糖含量的作用,但黑曲霉发酵的饲料感官品质较差。微生物发酵对藜麦秸秆饲料品质具有一定的提升作用,一定条件下,混合菌协同发酵优于单一菌株发酵。

摘要：三基序蛋白21(TRIM21)与癌症、肿瘤及固有免疫等密切相关。为了快速检测TRIM21基因的表达,根据Genbank中公布的TRIM21基因序列设计引物,通过常规PCR扩增该基因后克隆至pMD-18T载体上,测序并鉴定正确后制备重组质粒,以pMD-18T-TRIM21重组质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。采用重复性、特异性及灵敏性等试验,成功建立了检测TRIM21基因的荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法灵敏度高,最低检测下限为37.7 copies·μL^-1,比普通PCR高出10倍。在3次独立的试验中,组内和组间变异系数较小,具有较高的可重复性,同时,还能检出不同细胞中TRIM21的表达。因此,该荧光定量方法可为TRIM21的检测及临床研究提供技术支持。

摘要：当前贵德黑裘皮羊品种资源形势较为严峻。试验研究利用所设计的一对引物对5个贵德黑裘皮羊样本线粒体DNA的COI基因片段进行PCR扩增并对产物进行直接测序,基于mtDNA COI基因探究贵德黑裘皮羊种群遗传现状。结果显示,贵德黑裘皮羊与国际上乌珠穆沁羊、滩羊、青海藏羊等18个绵羊品种有较近的亲缘关系,存在基因流。研究表明,对贵德黑裘皮羊种质资源进行保护,应该要避免其与其他绵羊品种之间的基因流。

摘要：目的:建立一种干扰素诱导跨膜蛋白2(IFITM2)基因SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,以期为IFITM2基因的动态监测提供有效的检测技术.方法:根据GenBank中公布的IFITM2基因序列设计特异性引物,以质粒pMD18-T-IFITM2为模板进行条件优化,绘制标准曲线,建立IFITM2基因SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对建立的方法进行条件优化与评价,用建立的方法对脑心肌炎病毒感染后细胞中IFITM2基因转录水平进行检测.结果:建立的20μL检测体系中IFITM2基因最佳引物浓度为10μM,最佳退火温度为59℃;标准质粒在2.62×105~2.62×1010 copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好线性关系,线性方程y=-3.495 log x+43.12,R 2=0.998,且灵敏性、特异性和重复性均较高.应用建立的方法对EMCV感染细胞中IFITM2基因转录水平进行检测,结果显示,在感染早期IFITM2转录水平不变,感染后期转录水平逐渐升高.EMCV感染引起宿主IFITM2基因转录水平的变化,可能与EMCV逃逸宿主相关免疫应答有关.结论:成功建立了一种快速、准确检测IFITM2基因的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法.该方法的建立,为进一步研究IFITM2在EMCV感染过程中的作用奠定了基础.