摘要：目的：探究一种小分子量类弹性蛋白标签（elastin-like protein tag,ELP tag）——ELP30-tag在原核表达系统中的蛋白纯化能力。方法：人工合成ELP30-tag基因并将其构建于pET-28a（＋）载体,结合2种内含肽（intein1和intein2）基因和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,eGFP）基因,构建4个含有不同元件序列的原核表达载体：pET-ELP30、pET-ELP30-eGFP、pET-ELP30-intein1-eGFP和pET-eGFP-intein2-ELP30;将表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导重组蛋白表达,并通过可逆相变循环（inverse transition cycling,ITC）纯化重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP、ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30,随后通过调节溶液pH值或添加二硫苏糖醇（DL-Dithiothreitol,DTT）分别诱导intein1和intein2断裂,最后再经ITC分离获得纯eGFP。结果：利用设计的ELP30-tag成功纯化获得了重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP和eGFP-intein2-ELP30;重组蛋白ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30中的内含肽可经诱导发生断裂而释放eGFP,但未能分离获得纯eGFP。由此为小分子量ELP-tag的运用和优化设计奠定了一定基础。

摘要：【目的】从健康桑树内生菌中分离获得对桑疫病病原菌(Pseudomonas syringae ***)具有显著拮抗作用的菌株,优化其产生抑菌活性物质的发酵条件,为其生防利用奠定基础。【方法】从严格表面消毒的桑树根茎中分离内生菌,采用平板划线法纯化内生菌,用抑菌圈法筛选拮抗菌;根据菌株的形态与培养特征、生理生化特性、16S rDNA序列分析对其进行鉴定。通过单因素试验和正交设计试验优化培养基组分及发酵条件。【结果】从健康桑树中分离获得内生菌77株,其中,编号为SWg2的菌株对桑疫病病原菌具有强而稳定的抑制作用。菌株SWg2的形态与培养特征、生理生化特性和泛菌属(Pantoea sp.)相符,而16S rDNA序列分析结果显示它与成团泛菌(***)的亲缘关系接近。研究表明其最佳发酵配方和培养条件为:甘油(2.00%)、硝酸铵(2.00%)、KH2PO4(0.10%)和MgSO4·7H2O(0.15%),起始pH为7.5,装瓶量20 mL/100 mL,最适培养温度为28℃,转速为170 r/min,种子液接种量为4%,摇瓶培养5 d。【结论】经鉴定,对桑疫病病原具拮抗作用的桑树内生菌SWg2为成团泛菌(***),命名为成团泛菌SWg2。对其发酵条件进行优化后对桑疫病病原菌显示出更强的拮抗作用。

摘要：【目的】油蚕oc突变体是家蚕Bombyx mori油蚕突变体的一种,经典遗传学连锁图谱已经将oc突变基因定位在5号染色体40.8 c M座位。本研究旨在对oc突变体候选基因进行精细定位并克隆,探究oc性状形成的分子机制。【方法】以油蚕oc突变品系和野生型家蚕品系大造(Dz)为亲本,其杂交产生的F1代雄性个体与oc突变的雌性个体进行回交得到的1 397头BC_1代个体为定位材料,以家蚕已经报道的基因组序列为参考设计markers,通过亲本及F1代个体筛选多态性markers,并利用多态性markers和BC_1代个体对oc突变基因进行精细定位。通过半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR(q PCR)筛选oc紧密连锁区间内的候选基因,确定目标候选基因,继而克隆和测序该基因,分析油蚕oc突变的原因。【结果】利用1 397头BC_1代个体和11对有效的多态性markers将oc突变基因定位在M10与M11两个markers之间,物理图谱距离大约为234 kb。通过家蚕基因组数据库对oc连锁区域内的基因进行检索发现该区域有5个预测基因。对这5个预测基因在10个家蚕品系中进行的表达分析发现,只有BGIBMGA003572基因在oc突变个体体壁的表达量明显比正常个体中的低。通过基因的同源分析发现该基因编码的蛋白和人类单羧酸转运蛋白9(可能的尿酸转运蛋白)是同源蛋白,推测其为oc突变的候选基因。对BGIBMGA003572进行的克隆和测序结果显示其编码序列有5个氨基酸在oc突变体中发生了突变。【结论】通过定位克隆,本研究将oc突变基因定位在了234 kb的紧密连锁区间,其中编码单羧酸转运蛋白9的BGIBMGA003572可能和oc突变体的表型有关。

摘要：蚕桑产物野尻霉素,全称1-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin,1-DNJ）,化学名称为3,4,5-三羟基-2-羟甲基四氢吡啶,是蚕桑产物中特有的天然活性成分;其主要存在于桑树的枝、叶和根部以及蚕的幼虫和蚕蛹等。野尻霉素作为抗生素首次发现于链霉菌中,而后日本学者又从桑树根中分离得到。野尻霉素是一种哌啶类多羟基生物碱,能够竞争性抑制肠道α-糖苷酶的活性,延缓糖的吸收,达到抑制糖尿病餐后血糖的升高的目的;基于其强有力的糖苷酶抑制活性,野尻霉素可用于治疗糖尿病及糖尿病并发症,肥胖症和相关的机能紊乱等,因而受到了国内外学者的广泛关注。由于现代科技不断发展,野尻霉素及其衍生物不仅被证实具有降血糖的作用,还被发现在抗病毒和抗肿瘤等多种功能。因此,该文将结合目前本实验室的研究,对1-脱氧野尻霉素的来源、制备、药物代谢动力学、生物学活性及其生物信息学垂钓靶点的研究进展进行了综述,旨在为今后的研究者提供一个阶段性的数据资料基础。

摘要：对西南大学家蚕基因资源库保存的一个锈色茧(rusty cocoon)品系进行遗传分析,并配制回交分离群体,提取个体基因组DNA,利用SSR分子标记对其锈色茧性状基因进行连锁检索。遗传分析表明该锈色茧性状由显性单基因控制,与文献记载锈色茧(Rc)性状的遗传规律一致;但该锈色茧性状基因与第6染色体上已知的S0606等3个SSR标记以及新设计引物筛选到的标记E1177均连锁,而与其余连锁群上的SSR标记均独立,表明该锈色茧性状基因属于家蚕第6染色体,与文献记载锈色茧(Rc)基因属于家蚕第2染色体的结论截然不同。将此锈色茧性状基因暂记为Rc1。研究结果为丰富家蚕锈色茧的遗传信息以及准确定位与克隆鉴定该基因奠定了基础。

摘要：多聚腺苷酸化是真核细胞内形成成熟mRNA的一个重要步骤,其位点的预测对基因组序列中编码基因的发掘具有重要的参考价值.本研究以缺乏有效基因预测方法的微孢子虫基因组为对象,根据该物种的基因表达偏好设计了一个算法,对其PolyA位点进行预测分析.首先,采用k阶核苷酸频率形式和位置权重矩阵形成初始的特征,然后用PCA降低特征空间的维数,得到的数据用机器学习方法进行分析,产生一个较好的分类结果.其中基于支持向量机的实验得到的敏感度(Sp)和ACC分别达到了87.33%和85.14%,这在微孢子虫的PolyA位点预测上取得了较为理想的效果,并为以后机器学习算法在微孢子虫基因预测领域做了很好的尝试.

摘要：整合素是一类广泛分布于细胞表面的黏附分子受体,是由α和β两个亚基组成的异源二聚体跨膜蛋白,其是细胞内外信号转导的中间桥梁。在鳞翅目昆虫细胞内,整合素主要表达于血细胞,参与昆虫细胞免疫反应进程。文中首先通过RACE技术等,克隆获得BmIntegrin β2基因cDNA全长序列2 434 bp;并对其蛋白结构域进行了预测,主要包括信号肽、一段较大的胞外域,单次跨膜结构和较短的胞内域;利用qRT-PCR技术检测了家蚕4龄3天和5龄3天的BmIntegrin β2各组织表达图谱,结果显示其主要在血细胞和造血器官中高表达;然后再经原核诱导表达、蛋白纯化及免疫动物后获得BmIntegrin β2抗体。通过对BmIntegrin β2蛋白功能作用的研究发现,BmIntegrin β2抗体可显著地减少浆细胞的数量,这从侧面说明BmIntegrin β2抗体可能抑制了浆细胞的延伸性和粘附能力。该结果不仅为BmIntegrin β2参与家蚕细胞的免疫反应奠定了基础,还提供了一个新的研究视野。