摘要：目的构建人C-erbB2干扰载体pGenesil-erbB2,并稳定转染入CerbB-2高表达的人结肠癌细胞株HT-29细胞,观察其对人结肠癌HT-29细胞从转录后水平对Her-2蛋白表达的影响。方法利用免疫组化方法筛选出CerbB-2高表达细胞株HT-29,以人C-erbB2cDNA基因为靶标设计RNA干扰片段和阴性对照片段,退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-erbB,进行鉴定及测序,并稳定转染至HT-29细胞。结果测序证明人C-erbB2siRNA表达载体质粒pGenesil-erbB构建成功,pGenesil-erbB稳定转染入人结肠癌HT-29细胞,采用Westernblot实验证明pGenesil-erbB可显著抑制Her-2蛋白的表达。结论成功构建了人CerbB2干扰载体质粒pGenesil-erbB,稳定转染至结肠癌HT-29细胞株,并能抑制HT-29细胞的Her-2蛋白的表达,为靶向CerbB2的siRNA对结肠癌的放射增敏研究奠定了基础。

摘要：目的探讨逆转录病毒介导的RNA（shRNA）干扰迁移诱导基因-7（Mig-7）联合重组人血管内皮抑素（ES）对人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长、转移的抑制作用。方法设计2条Mig-7-mRNA寡核苷酸序列（Mig-7-shRNA-1、Mig-7-shRNA-2）和1条作为负对照的无关序列（Mig-7-shRNA-N）。构建特异性M迫-7-shRNA逆转录病毒表达载体质粒，转染Mig-7高表达人肝癌细胞MHCC-97H。建立人肝细胞癌（HCC）裸鼠皮下移植瘤模型，根据转染情况和给药不同分为4组：pSIREN-M1组；pSIREN-MN组；ES组；pSIREN-Ml＋ES组。比较各组移植瘤体积、质量、转移情况；免疫组织化学观察各组移植瘤中血管生成拟态（VM）形成及肿瘤微血管密度（MVD）的差异；Westernblot检测各组Mig-7及血管内皮生长因子（VEGF）的表达。组间比较采用单因素方差分析，计量资料的组间比较采用Fisher精确概率法检验。结果PSIREN-M1组移植瘤体积、质量、转移率、Mig-7表达及VM形成明显低于PSIREN-MN组（尸〈0．05），VEGF表达及MVD明显高于PSIREN-MN组（P〈0．05）；ES组移植瘤体积、质量及转移率、VEGF表达及MVD明显低于PSIREN-MN组（P〈0．05），Mig-7表达及VM形成明显高于PSIREN-MN组（P〈0．05）；DSIREN-Ml＋ES组的移植瘤体积、质量及转移率、Mig-7表达与VM形成、VEGF表达与MVD明显低于PSIREN-M1组及ES组（P〈0．05）。结论Mig-7-shRNA重组逆转录病毒联合ES抑制HCC移植瘤生长及转移的效果明显优于两者单用。体内单用靶向肿瘤血管内皮细胞的“抗肿瘤血管生成治疗”效果有限的原因可能是其促进了VM的形成。