摘要：目的研制简单、快捷、使用方便的组织芯片仪,验证其性能。方法根据组织芯片制备原理设计HT-1型组织芯片仪,该组织芯片仪由阵列孔受体蜡块成型器、组织挖取器、负压包埋仪和操作支架组成。采用一次成型技术,仅一次操作即可快速制备所需的阵列孔受体蜡块;采用负压包埋技术,既可将组织样本精确定位并固定于同一水平面,又可迅速抽除组织样本与受体蜡块阵列孔间残留气泡。结果使用HT-1型组织芯片仪,可在数秒之内制备高质量阵列孔受体蜡块,构建一个容量为56例组织样本的TMAs蜡块仅需不到20min,且组织样本排列规则,无漂浮、倒伏和移位现象,也无气泡残留。经HE及免疫组织化学染色证实,组织芯片中组织样本排列规则、结构完整、背景清晰,脱片率低(<1.0%±1.1%)。结论HT-1型组织芯片仪是一款结构简单、使用方便、易于操作的高性价比组织芯片仪。

摘要：目的研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响,为基因疫苗的设计提供参考。方法利用分子克隆技术,分别构建能表达不同细胞定位的EGFP-HPVl6L1融合蛋白和截短型EGFP-HPV16L1△NLS融合蛋白的重组pcDNA-EGFP-HPV16L1和pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS真核表达载体;通过转染CHO细胞,并在倒置荧光显微镜下观察表达产物的细胞定位;用重组pcDNA载体免疫BALB/c小鼠;EGFP作为抗原,ELISA法检测血清抗体吸光度。结果①重组pcDNA-EGFP-HPV16L1转染的CHO细胞核内可见到绿色荧光,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS真核表达载体转染的CHO细胞质内可见到绿色荧光:②两种不同的重组pcDNA载体均可诱导BALB/c小鼠体液免疫反应,但重组pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS真核表达载体免疫组小鼠IgG抗体A_(450)值显著高于重组pcDNAEGFP-HPV16L1真核表达载体免疫组小鼠IgG抗体A_(450)值(P<0.001)。结论表达产物的不同细胞定位可影响基因免疫诱发的体液免疫应答水平,定位于细胞质内的蛋白分子较定位于细胞核的蛋白分子能诱导机体更强的体液免疫反应,这为以增强体液免疫反应为目的的基因疫苗的设计提供了参考。

摘要：目的:建立一种基于荧光偏振技术的宫颈癌组织标本中EGFR启动子甲基化检测的新方法。方法:设计通用引物,在封闭管中同时扩增EGFR启动子甲基化与非甲基化等位基因片段,再同时用序列特异的FAM或TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交反应的荧光偏振值,确定EGFR启动子甲基化状态。应用荧光偏振法检测63例宫颈癌组织样本,并与直接测序法进行对比验证。结果:本方法检测EGFR启动子甲基化结果与直接测序法结果无统计学差异,且最低检测浓度为50拷贝/μl,最低检测含量可达10%,敏感度高。结论:本方法检测EGFR启动子甲基化灵敏度与准确度较高,为临床宫颈癌个体化治疗相关检测提供了新技术。