摘要：目的　建立人eck基因外显子 3(exon 3)的克隆与鉴定方法 ,研究其在ZR 75 1细胞系中的突变情况。方法　设计一对eck基因exon 3特异性引物 ,提取人正常皮肤组织和乳腺癌细胞系ZR 75 1基因组DNA ,并以此作为模板 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增eck基因exon 3片段 ,克隆入中介载体pUCm T中构建重组质粒 ,转化JM10 9大肠杆菌 ,扩增后经酶切、PCR初步鉴定后 ,进行序列分析。结果　①从正常皮肤组织上皮细胞、ZR 75 1细胞系基因组DNA中 ,经PCR扩增 ,获得了人eck基因exon 3片段 ;②建立了正常皮肤组织、ZR 75 1细胞系eck基因exon 3片段的克隆 ;③ZR 75 1细胞系中eck基因exon 3片段存在突变。结论　从人组织与细胞系基因组DNA中 ,成功地构建了人类eck基因exon 3的克隆 ,并证实eck基因exon 3在ZR 75 1乳腺癌细胞系中有突变 ,为进一步研究eck基因exon

摘要：HPV16,18,58是陕西地区最为流行的三型高危人乳头瘤病毒(human papillomavirus HPV)株,拟建立针对流行高危HPV型别的快速筛查方法。根据Genebank提供的序列,设计并合成HPV16,18,58型特异型引物,优化PCR条件,以含有HPV16,18,58全基因组序列的质粒为阳性对照模板,并以预先确定HPV感染状态的宫颈癌组织标本验证所建立的方法。该方法可以成功地一次扩增HPV16,18,58三型DNA片断,并经琼脂糖凝胶电泳解析。应用预先确证HPV16,18,58多重感染的宫颈癌组织标本为模板,也成功地扩增出相应的HPV基因片断。建立的单次多重PCR方法简单、经济、节约时间,可望用于当地流行高危型HPV16,18,58的群体筛查。

摘要：目的研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响,为基因疫苗的设计提供参考。方法利用分子克隆技术,分别构建能表达不同细胞定位的EGFP-HPVl6L1融合蛋白和截短型EGFP-HPV16L1△NLS融合蛋白的重组pcDNA-EGFP-HPV16L1和pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS真核表达载体;通过转染CHO细胞,并在倒置荧光显微镜下观察表达产物的细胞定位;用重组pcDNA载体免疫BALB/c小鼠;EGFP作为抗原,ELISA法检测血清抗体吸光度。结果①重组pcDNA-EGFP-HPV16L1转染的CHO细胞核内可见到绿色荧光,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS真核表达载体转染的CHO细胞质内可见到绿色荧光:②两种不同的重组pcDNA载体均可诱导BALB/c小鼠体液免疫反应,但重组pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS真核表达载体免疫组小鼠IgG抗体A_(450)值显著高于重组pcDNAEGFP-HPV16L1真核表达载体免疫组小鼠IgG抗体A_(450)值(P<0.001)。结论表达产物的不同细胞定位可影响基因免疫诱发的体液免疫应答水平,定位于细胞质内的蛋白分子较定位于细胞核的蛋白分子能诱导机体更强的体液免疫反应,这为以增强体液免疫反应为目的的基因疫苗的设计提供了参考。