摘要：从杂交瘤细胞或脾细胞中扩增抗体可变区,是构建单链抗体(Single-chainFvfragment,ScFv)、克隆单克隆抗体和研究抗原与抗体相互作用的关键一步。而抗体可变区(Variableregions,Fv)高度变异,扩增相对困难,至今仍是一个难点,有待解决。我们在构建ScFv过程中,发现2株杂交瘤细胞用普通方法难于扩增出抗体重链可变区(Heavy-chainvariableregion,VH)抗体。于是提出了一种多序列比对和简并引物设计算法,并加以实现,设计出通用的鼠源性抗体VH引物;应用上述引物,采用反向多聚酶链反应(Reversepolymerasechainreaction,reversePCR)方法——3'RACE和5'RACE法,准确地扩增出2株杂交瘤细胞的VH基因。该算法很好地解决了引物特异性和最小化问题,具有简单、实现容易的特点,可用于基因家族中未知基因克隆和文库构建中的引物设计。与反向PCR方法结合,提高了难扩增的未知基因的成功率。

摘要：目的:探讨焦虑和抑郁障碍(AD)对消化道肿瘤患者生活质量及免疫的影响. 方法: 连续选取2000 03 /2004 02消化道肿瘤患者283例,其中A组AD患者62例, B组单纯焦虑40例,C组单纯抑郁63例,D组无焦虑及抑郁的患者118例. 使用Hamilton焦虑量表(HAMA)、Hamilton抑郁量表(HAMD)、生活质量问卷(QLQ C30 )、社会支持评定量表(SSRS)、简易应对方式量表(SCSQ)及自行设计的社会学量表进行调查,同时测定外周血象、T细胞亚群和NK细胞(CD56). 结果: 消化道肿瘤患者AD发生率21. 9%. 与对照D组相比,A组主观支持分高,社会支持总分、客观支持及支持利用度均低,支持利用度的降低具有显著性意义(P<0. 05);积极应对总分低于对照D组,而消极应对总分偏高(P<0. 05);细胞免疫学指标A组外周血粒细胞数目增多,而淋巴细胞和单核细胞减少,淋巴细胞的降低具有显著性意义(P<0. 05);T淋巴细胞亚群中CD3,CD4,CD8和CD56细胞百分率下降;CD56的降低具有显著性意义(P<0. 05 ). 方差分析提示躯体功能、角色功能、乏力、失眠和便秘指标在组间有显著性变化,A组生活质量状况较差. AD与积极应对和生活质量呈负相关. 影响生活质量的重要因素为支持的利用度、CD56、积极应对、乏力、睡眠障碍和抑郁. 结论: 消化道肿瘤患者普遍存在AD.