摘要：背景:研究证明过氧化物酶体增殖物激活受体γ具有上调内皮祖细胞的功能。目的:验证过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂吡格列酮对体外培养自发性高血压大鼠骨髓来源内皮祖细胞数量及功能的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-05/08在解放军第四军医大学西京院心脏内科国家重点实验室完成。材料:选取清洁级自发性高血压大鼠及周龄、体质量相匹配的正常血压WKY大鼠各20只。方法:随机将自发性高血压大鼠及正常血压WKY大鼠各分为药物组和对照组,每组10只。分别给予吡格列酮(20mg/kg·d)或等量生理盐水预处理14d。于试验开始前1d和结束当天分别测各组大鼠尾动脉收缩压。以密度梯度离心法分离骨髓来源单个核细胞体外培养,差速贴壁法培养收集贴壁细胞。主要观察指标:鉴定内皮祖细胞;测定内皮祖细胞数量;采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活力及一氧化氮分泌功能。结果:吡格列酮治疗后,正常WKY大鼠内皮祖细胞数量、增殖及一氧化氮分泌功能无明显变化;自发性高血压大鼠内皮祖细胞数量增加,增殖能力增强,一氧化氮分泌增加,3项与对照组比较,差异均具有显著性意义(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。结论:吡格列酮预处理能上调其骨髓来源内皮祖细胞数量,并通过促进其增殖和一氧化氮分泌功能,对内皮祖细胞有保护作用。

摘要：背景:目前缺乏人工心肺机独立诱导心肌损伤直接的外科证据。目的:观察保持正常冠状动脉血流不依赖人工心肺机冠状动脉旁路移植和依赖人工心肺机不停跳冠状动脉旁路移植围术期心肌损伤和炎症因子的变化情况。设计、时间及地点:随机对照试验生化水平观察,于2007-07/2008-02在解放军沈阳军区总医院心血管外科进行。对象:选择40例具有正常射血分数值和3支血管病变的择期冠状动脉旁路移植患者,随机分成依赖人工心肺机不停跳组20例和不依赖人工心肺机组20例。方法:按常规方法建立体外循环;左乳内动脉-前降支是第一个吻合,顺次吻合大隐静脉-回旋支和大隐静脉-右冠状动脉。主要观察指标:移植前和前降支开放即刻,移植后4,24,48h中心静脉血中白细胞介素6、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α、肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白I水平。结果:40例患者均进入结果分析。依赖人工心肺机组患者移植后各时间点白细胞介素6、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α、肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白I明显高于移植前(P<0.05)。移植后早期,依赖人工心肺机不停跳组患者白细胞介素6,白细胞介素8和肿瘤坏死因子α水平高于不依赖人工心肺机组(P<0.05)。肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白I水平从左乳内动脉-前降支血流开放到移植后48h均保持有意义的增高(P<0.05)。结论:人工心肺机能独立诱导心肌损伤和炎症反应。

摘要：背景:因心脏结构高度复杂、心肌组织有很高的机械顺应性,心肌组织工程对材料的要求高。以往研究表明Ⅰ型胶原和胶原海绵材料均适宜心肌细胞生长及分化。目的:拟进一步对比观察胶原海绵和温敏型Ⅰ型胶原与骨髓间充质干细胞的相容性,为心肌组织工程选择更理想的载体材料。设计、时间及地点:在解放军第四军医大学西京医院心血管内科实验室2007-03/10完成对比观察设计的实验。材料:胶原海绵由上海其胜制剂有限公司提供;温敏型Ⅰ型胶原由第四军医大学组织工程中心提供。方法:将体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞分别复合于胶原海绵和温敏型Ⅰ型胶原材料,共同培养7d,分别于培养第1,3,5和7天取材。主要观察指标:扫描电镜和苏木精-伊红染色观察骨髓间充质干细胞细胞形态及附着情况;MTT检测骨髓间充质干细胞细胞增殖情况。结果:①扫描电镜检测显示温敏型Ⅰ型胶原材料中骨髓间充质干细胞细胞黏附优于胶原海绵材料,细胞在Ⅰ型胶原材料中生长连接成片,表面有大量分泌颗粒。②MTT检测表明在培养第1,3,5,7天温敏型Ⅰ型胶原材料中骨髓间充质干细胞细胞活性(吸光度值)及细胞分裂增殖速度均高于胶原海绵材料(P<0.01)。结论:温敏型Ⅰ型胶原体外与骨髓间充质干细胞的相容性优于胶原海绵。

摘要：背景:目前小肠移植成功率仍不高,简化血管重建的操作,减少供肠的热缺血时间和受体血管阻断时间是提高手术成功率的关键。目的:在大量前期的基础上,拟建立一种存活率高、手术时间短、稳定实用的大鼠小肠移植模型,同时设计一种灵活可靠的输液系统,用于移植后大鼠营养支持。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-08/2007-08在解放军第四军医大学第一附属医院中心实验室完成。材料:选用Wistar大鼠160只,共行小肠移植手术80例次。将80只受体大鼠按随机数字表法分为2组,即单纯小肠移植组和小肠移植加腔静脉置管组,每组40只。方法:简化的异位小肠移植术动脉吻合采用供者带肠系膜上动脉的腹主动脉段两端与受者的腹主动脉袖套吻合,静脉吻合采用供者的门静脉与受者的左肾静脉袖套吻合,即三袖套吻合法,移植小肠的近端结扎、远端造口。小肠移植加腔静脉置管组在小肠移植基础上加行腔静脉置管术,静脉输液系统采用腔静脉置管,用肝素帽、套管针、头皮针制作旋转部分。主要观察指标:记录两组大鼠小肠移植手术各阶段耗时及移植成功率,观察营养支持装置中留置管相关并发症发生情况。结果:①单纯小肠移植组手术耗时(135±24)min,其中动脉吻合用时(5±2)min,静脉吻合用时(2±1)min,移植成功率87.5%。②小肠移植加腔静脉置管组手术耗时(158±27)min,显著长于单纯小肠移植组(P<0.05)。移植成功率85%,未发生置管相关并发症。结论:三袖套血管吻合法可简化大鼠小肠移植手术,缩短手术时间。术中同时建立的营养支持模型应用简单,安全可靠,大鼠能够自由活动,不影响输液用药正常进行,长期应用具有良好的耐受性。

摘要：背景:近年研究表明,生长因子作为一种分子信号调控细胞的增殖、分化、迁移与代谢,其表达与调控在慢性创面愈合中起着很重要的作用。目的:观察血管内皮生长因子对创伤组织血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子mRNA表达的影响,分析其促进损伤组织修复的作用途径。设计:对照动物实验。单位:解放军第四军医大学西京医院整形科。材料:实验用新西兰白兔6只,兔龄48～60个月。纳米微囊包裹的重组质粒DNA真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-血管内皮生长因子165(VEGF165)由第四军医大学西京医院整形外科贾宁硕士惠赠。方法:实验于2004-10/2005-06在西京医院整形外科实验室完成。①以血管内皮生长因子165为目的基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-VEGF165,利用纳米微囊包裹制成纳米微囊-血管内皮生长因子165复合体。兔经麻醉后,在其耳腹侧制成直径为6mm的3个圆形创面,暴露软骨。以明胶海棉薄片蘸取纳米微囊-血管内皮生长因子165复合体100μL覆于每只兔一侧耳创面,外层覆盖无菌密封薄膜,作为血管内皮生长因子组;对侧每一创面以明胶海棉薄片蘸取100μL纳米微囊-空载质粒覆于创面作为对照组;在环切部位近端的兔耳皮肤作为正常皮肤组。②利用反转录聚合酶链反应方法观察术后14d损伤组织血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子mRNA的表达变化。③术后14d,以创面为中心,切取1cm×1cm正方形组织块(含兔耳全层),制成标本,苏木精-伊红染色,光镜下观察新生肉芽组织的生长情况。主要观察指标:创伤组织血管内皮生长因子受体、碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子表达。结果:①苏木精-伊红染色显示,血管内皮生长因子组创面肉芽生长及上皮爬行速度明显快于对照组。②反转录聚合酶链反应显示,血管内皮生长因子组损伤组织内血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05)及正常组(P<0.01)。结论:外源性血管内皮生长因子可以上调创伤组织中血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子的表达,血管内皮生长因子可能作用于其受体,通过与其他细胞因子的协同作用来实现其对伤口愈合的促进作用。

摘要：背景:血管去内皮化,血栓形成和内膜增生极大的限制了血管治疗方法的临床效果。目的:利用含血管内皮细胞生长因子的纤维蛋白胶作用于球囊损伤血管内膜来评估其对血管内皮化、细胞增殖和内膜增生的影响。设计:随机对照、重复测量设计。单位:解放军第四军医大学西京医院血管外科及神经外科研究所。材料:实验于2002-10/2004-06在解放军第四军医大学西京医院神经外科研究所完成。15只健康杂种犬(雌雄不限,体质量12.5～18.9kg)由西京医院动物实验外科提供。方法:损伤犬双侧颈动脉,一侧为纤维蛋白胶/血管内皮细胞生长因子/肝素处理组,另一侧为生理盐水对照组。损伤后10,30和90d观察对比内膜损伤和处理的结果。切片应用BioquantBQOS/2计算机形态测量仪测量血管内膜和中层厚度。5-溴脱氧尿苷掺入免疫组化切片用于计算细胞增殖率,40倍光镜下计算5-溴脱氧尿苷阳性细胞数。电镜检查血管腔内表面内皮细胞覆盖率。主要观察指标:内皮细胞覆盖情况、新生内膜和中层厚度及细胞增殖率。结果:所有犬均存活至标本收集时,无脱失值。①内皮细胞覆盖率:在10d和30d时,处理侧颈动脉的内皮细胞覆盖率明显高于对照侧[(66.73±30.78)%,(40.8±27.74)%,P=0.04;(96.67±10.29)%,(82.07±22.82)%,P=0.048]。②增殖率:10d时,血管各层细胞增殖达到高峰,90d恢复正常。和对照组相比,处理组在30d时新生内膜和血管中层内侧半中层及血管中层的细胞增殖率明显增强[(7.41±6.75)%,(3.56±2.72)%;(2.81±2.65)%,(0.83±0.59)%;(2.06±1.81)%,(0.62±0.31)%,P<0.05]。③新生内膜厚度:和对照组相比,处理组在30d和90d时双侧近端和中段的内膜厚度/中层厚度比值明显增加(0.18±0.22,0.10±0.06;0.21±0.23,0.14±0.14;0.12±0.08,0.09±0.08;0.29±0.40,0.12±0.12,P<0.05,P<0.01),但远端没有变化。结论:纤维蛋白胶能将细胞因子释放入动脉血管壁并保持生物学活性。纤维蛋白胶释放血管内皮细胞生长因子加肝素能有效加速损伤血管内皮化但伴有平滑肌细胞增殖和内膜增生。

摘要：背景:α-转化生长因子及表皮生长因子受体在不同病变中的表达和意义不尽相同。目的:观察α-转化生长因子及表皮生长因子受体在人类肝硬变组织中的表达。设计:非随机对照实验。材料:实验于2003-03/2004-05在解放军第四军医大学西京医院病理科完成。63份人类肝硬变组织选自解放军第四军医大学西京医院外科手术标本(患者知情同意),5份正常人类肝脏组织取自第四军医大学病理学教研室尸检组织(排除有肝脏疾病)。方法:运用免疫组织化学和原位杂交的方法对63份人类肝硬变组织及5份正常人类肝脏组织进行研究,计算α-转化生长因子及表皮生长因子受体阳性率并进行统计学处理。主要观察指标:免疫组织化学染色方法和原位杂交染色检测肝硬变组织中α-转化生长因子及表皮生长因子受体的表达。结果:免疫组织化学方法检测α-转化生长因子与表皮生长因子受体在63份肝硬变组织中的阳性率分别为84%(53/63)及52%(33/63),阳性产物为棕黄色颗粒,主要弥漫分布于肝细胞浆内,α-转化生长因子与表皮生长因子受体的表达在肝硬变组织中呈显著正相关(r=0.32,P0.05)。结论:在肝脏组织硬变形成过程中可能存在α-转化生长因子/表皮生长因子受体自分泌循环,而α-转化生长因子、表皮生长因子受体高水平表达是促使肝脏组织硬变形成的重要因素之一。

摘要：目的:使用骨钙素启动子构建骨组织特异性小发卡状RNA表达载体。方法:实验于2003-11/2004-09在解放军第四军医大学全军骨科研究所和全军整形外科中心完成。以HEK293细胞基因组为模板,利用聚合酶链反应扩增人骨钙素启动子。将骨钙素启动子、针对虫荧光素酶的小发卡状RNA编码序列和多腺苷酸信号依次克隆至pGL3-control载体的相应酶切位点,经双酶切鉴定和DNA测序证实后命名为pGL3-OCP-shLuc。将pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control分别共转染人胚胎肾细胞HEK293和人骨肉瘤细胞MG-63,48h后测定虫荧光素酶活性,计算相对活性。结果:使用特异性引物成功扩增出长度为830bp的人骨钙素启动子聚合酶链反应产物。DNA测序结果证实pGL3-OCP-shLuc中的小发卡状RNA表达框与设计完全一致。pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control共转染HEK293细胞后,虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异,而共转染MG-63细胞后虫荧光素酶相对活性显著降低,剔出效率约为69.8%。结论:成功使用人骨钙素启动子构建了小发卡状RNA表达载体,并实现了骨组织特异性RNA干扰,为将RNA干扰技术引入骨肉瘤基因治疗领域奠定了基础。

摘要：目的:为研制人工颈椎复合关节系统提供中下颈椎体、椎间盘解剖学数据。方法:志愿者76人,其中男性32人(21～44岁,平均年龄29.31岁),女性44人(19～45岁,平均年龄32.20岁),测量各椎体与椎间隙前缘、中份及后缘的高度,数据进行统计和分析。结果:椎体前缘、中份、后缘高度(mm),男性分别为:17.58～19.97,15.68～17.69,18.17～19.77;女性分别为:15.13～17.80,13.34～15.05,15.57～17.06。椎间隙前缘、中份、后缘高度(mm):男性分别为5.81～7.23,7.59～9.19,4.65～5.54;女性分别为;4.88～5.37,6.82～7.89,4.03～4.47。各测量结果在性别间有统计学意义(P<0.05)。结论:由此得到了中下颈椎体及椎间盘的解剖学参数,这可以为人工颈椎复合关节系统假体设计、制造和临床运用提供参考依据。

摘要：目的:常规应用植皮或单纯的皮瓣修复头面部皮肤软组织缺损从美学角度讲存在一定的缺点。总结皮肤软组织扩张器在头面部外伤性缺损早期修复中的应用情况。方法:①对象:选择2005-09/2007-10在解放军第四军医大学西京医院整形外科住院的部分外伤性头面部皮肤软组织缺损患者15例。其中男12例,女3例;年龄5～51岁。面部缺损4例,头皮缺损7例,面部并头皮缺损4例,缺损面积3cm×5cm～7cm×11cm。②方法:积极改善患者全身情况,加强局部创面处理,待全身情况稳定、创面肉芽组织新鲜的情况下,行清创、刃厚植皮术,覆盖除骨外露以外所有创面。同时或延期于缺损周围正常组织下埋置一至数枚容量不等(80～450mL)的扩张器。皮片成活并稳定后,开始扩张器注水,约两三个月注水完成后行扩张器二期术,切除骨外露周围不稳定的瘢痕组织(包括早期植皮部分),用设计的扩张皮瓣覆盖缺损,完成修复。结果:1例头皮扩张器在扩张后期出现了外露,及时进行二期手术修复缺损。所有患者头面部皮肤软组织缺损在短期内均得到了有效修复,2例患者在二期术后出现了轻度的器官移位,术后半年症状消失,所有病例无瘢痕性秃发发生。结论:皮肤扩张可用于头面部外伤性缺损的早期修复,合理的选择、正确的应用可以获得满意的效果。