摘要：目的 :检测RhoC在胃癌细胞系中的表达 ,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体。方法 :以Westernblot方法检测RhoC在多株胃癌细胞系中的表达。利用计算机辅助设计RhoC特异性siRNA ,体外合成siRNA基因并将其定向克隆入真核表达载体mU6pro。以脂质体法转染RhoC siRNA载体至高转移的人胃癌细胞系AGS中 ,以Westernblot方法鉴定RhoC siRNA对RhoC表达的作用。结果 :RhoC蛋白在具有高转移潜能的胃癌细胞系中表达增强。利用BbsⅠ和XbaⅠ双酶切法鉴定重组载体后 ,DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆入mU6pro载体。RhoC siRNA载体可特异性抑制AGS细胞中RhoC的表达。结论 :RhoC特异性siRNA表达载体成功构建 。

摘要：目的： 拟获得编码ＩＰ１０ （ＩＦＮγｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ１０） 和Ｃｒｇ２ （ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｇｅｎｅ２） 的ｃＤＮＡ 序列。方法： 针对ＩＰ１０ 和Ｃｒｇ２ 的ｃＤＮＡ序列设计相应引物， 通过反转录ＰＣＲ技术， 分别从用ＩＦＮγ及ＴＮＦα处理的人成纤维细胞及Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠肝脏中， 扩增出编码ＩＰ１０ 和Ｃｒｇ２ 的全基因序列， 并将其克隆入载体ｐＵＣ１９及ｐＧＥＭ３Ｚｆ （＋ ） 中， 通过酶切及序列测定鉴定重组载体。结果： 经序列测定证实， 重组载体含有正确地分别编码ＩＰ１０ 及Ｃｒｇ２ 的ｃＤＮＡ序列。结论： 获得的阳性克隆分别含有３０６ｂｐ 和３１４ｂｐ 的重组片段， 为进一步对其生物学活性和配体进行研究奠定了基础。

摘要：目的　研究西安地区人乳头瘤病毒 (HPV)的感染与胃癌的关系 .方法　运用 PCR方法 ,同时设计 HPV共同引物和 HPV16型和 HPV18型巢式引物 ,对胃癌组织 (n=40 )、癌旁组织和非肿瘤组织 (n=10 )进行 HPV DNA的检测 .结果　胃癌 40例组织中 HPV 检出 15例 ,总检出率为37.5 % ;癌旁组织和非肿瘤组织未检出 .HPV的检出以HPV16型为主 ,占检出阳性的 80 .0 % ,且与癌组织的分化程度密切相关 .结论　 HPV的感染 ,主要为高危型

摘要：目的　构建以胃癌 MG7- Ag模拟表位为基础的DNA疫苗 .方法　将 H ind 酶切位点、MG7- Ag模拟表位和通用性辅助性 T细胞 (Th细胞 )表位编码序列的反向互补序列顺次设计于下游引物中 ,通过 2次聚合酶链式反应将 2种表位连接于一段载体基因 ,H ind 酶切位点位于载体片段与表位基因之间 .将目的基因插入 p UCm - T载体 ,酶切鉴定和序列测定证实后 ,利用 p UCm- T载体和 pc DNA3.1(+)载体共有的 Kpn 和 Xba 酶切位点 ,将目的基因亚克隆入真核表达载体 pc DNA3.1(+)载体 .酶切鉴定后 ,利用目的基因和pc DNA3.1(+)载体上的 H ind 酶切位点 ,H ind 酶切去除载体基因片段 ,得到胃癌 MG7- Ag模拟表位和通用性 Th细胞表位的真核表达载体 .结果　经序列测定证实 :PCR产物为载体基因、H ind 酶切位点、MG7- Ag模拟表位及通用性Th细胞表位的融合片段 ;最终得到的重组 pc DNA3.1(+)质粒含有正确编码以上 2种表位的基因片段 .结论　以胃癌MG7- Ag模拟表位为基础的 DNA疫苗构建成功 。

摘要：目的探讨体表检测小肠电的方法和肠易激综合征（ＩＢＳ）患者体表小肠电的主频有无变化。方法应用自适应滤波方法通过自行设计的生物电检测分析系统检测正常对照组２４例及ＩＢＳ组２６例受检者的小肠体表电活动。结果体表检测小肠电活动波形清晰；经功率谱计算对照组和ＩＢＳ组小肠体表电的主频分别为１０．８８±０．７０周次／分（ｃｐｍ）和１１．０３±０．８４ｃｐｍ，范围均为９－１２ｃｐｍ，两组比较ｐ＝０．１０６。结论本实验方法可在体表清晰地记录小肠电活动，ＩＢＳ患者空腹状态下体表小肠电主频可能与正常人一致。

摘要：目的:构建用于RNAi的shRNA(small hairpinRNA)表达载体及检测其对低氧诱导因子-1(Hypoxia-inducibleFactor-1,HIF1)基因的沉默效果。方法:从人血基因组中PCR扩增出H1基因启动子,克隆入酶切处理后的pEGFP-C1载体片段中,此载体命名为pWH1。以人HIF1cDNA基因为靶标设计引物,退火后克隆入pWH1。新的载体转染SGC7901细胞,然后用RT-PCR和Western blot检测HIF1基因的表达改变。结果:构建的pWH1载体能很好地表达针对HIF1基因的shRNA,RT-PCR和Western blot的结果显示HIF1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。结论:成功构建了shRNA表达载体pWH1,这对于基因的功能研究具有重要的意义。

摘要：目的　扩增人核糖体蛋白 L 2 3(RPL 2 3)编码基因序列 ,构建其正、反义真核表达载体 ,分别转染胃癌细胞SGC790 1及胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR,以进一步研究 RPL2 3基因与胃癌多药耐药的关系 .方法　按文献报道的 RPL 2 3核苷酸序列设计合成 PCR引物 ,利用总 RNA抽取试剂盒从人胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR中提取细胞总 RNA,反转录合成 c DNA,再用 PCR方法扩增目的基因序列 .PCR产物经 DNA序列测定证实后 ,通过双酶切 ,将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体 pc DNA3.1 (+)中 ,酶切电泳鉴定 .采用脂质体介导的方法将 pc DNA3.1 (+) - RPL 2 3转染 SGC790 1细胞 ,pc DNA3.1(+) - an RPL2 3转染 SGC790 1 /VCR细胞 ,经 G41 8筛选后 ,随机挑选细胞克隆 .通过斑点杂交检测正、反义转染后 RPL2 3m RNA表达水平的变化 .结果　应用 RT- PCR反应扩增获得大小约 0 .5 kb的特异性片段 .经 DNA序列分析 ,证实与文献报道的人 RPL2 3编码区序列一致 .重组正义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ;重组反义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - an RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ,均与预期结果相符 .转染细胞经筛选后 ,随机挑选 。

摘要：目的:构建TRF2小干扰RNA载体,观察其在胃癌细胞中的表达．方法:根据pSilencer3．1-H1载体要求设计两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点．经双酶切及测序鉴定后分别转染多药耐药衍生胃癌细胞SGC7901／ADR和SGC7901/VCR． G418选择培养液培养2 mo选取转染组及对照组细胞克隆．MTT法检测转染对细胞生长增殖速度的影响．细胞用阿霉素和足叶乙甙处理 6h后Western blot法检测TRF2表达．结果:成功构建TRF2小干扰RNA载体,建立稳定转染细胞株,转染后TRF2表达明显降低,对细胞的生长增殖速度无明显影响(P>0．05)．结论:成功构建TRF2小干扰RNA载体及稳定转染细胞株．