摘要：根据文献报道的脊椎动物催乳素基因 c DNA序列的保守区 ,设计 1对引物。提取绦虫总 RNA,采用 RT- PCR扩增绦虫催乳素基因 ,琼脂糖凝胶电泳分析 PCR产物 ,将回收产物连接到 p MD- 18T克隆载体 ,对待选克隆进行 PCR和酶切鉴定。阳性克隆进行序列测定 ,获得全长 893bp的 c DNA序列 ,共编码 2 2 2个氨基酸 ,其中前 2 2个氨基酸为信号肽 ,成熟蛋白共编码 2 0 0个氨基酸。将测序结果与 Gen Bank中已知序列比较 ,推导氨基酸序列并进行活性位点分析 ,所得序列与脊椎动物催乳素同源性最高 ,含有催乳素的 2个活性区域 ,证明所得到的序列就是催乳素序列。

摘要：设计并合成了两对寡核苷酸引物 ,P1和P2 用于扩增新城疫病毒 (NDV)全长F基因 ,P3 和P4 用于扩增NDV部分F基因。通过RT_PCR一次性扩增了NDV四平株和长春株的全长F基因和青岛株、昌黎株的部分F基因。将这些基因分别克隆后 ,进行了序列测定和同源率、致病性、疏水性、抗原性和系统发育等比较分析。结果表明 ,四平株和长春株F基因同为176 2bp ,编码 5 5 3个氨基酸。两种F基因推导的氨基酸序列的疏水性相似 ,都具有 3个强疏水区 ,但亲水性有差异 ,抗原表位也有明显的不同 ,说明四平株和长春株F蛋白的抗原性不同。 4株NDVF基因序列 (1～ 813bp)和推导的氨基酸序列 (2 6 1aa)与我国台湾和国外有代表性的NDVF基因相同区域进行了比较和系统发育分析。总体上 ,核苷酸序列同源率在 82 .9%～ 97.5 %之间 ,推导的氨基酸序列同源率在 85 .8%～ 97.7之间 ,长春株与LaSota、TexasGB、Beaudette在同一亚群 ,四平株、昌黎株在同一亚群 ,青岛株为另一亚群。四平株、青岛株和昌黎株F蛋白裂解位点区 (112～ 117aa)的氨基酸序列与强毒株在这一区域的序列相符 ,证明这 3个NDV毒株是强毒株 ,长春株F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与弱毒株的序列相符 。

摘要：从长春地区鸭的粪便中分离纯化了火鸡隐孢子虫 (Cryptosporidiummeleagridis )卵囊 ,根据隐孢子虫 18SrDNA基因序列设计合成引物 ,用PCR扩增了卵囊基因组DNA大小 5 86bp的片段 ,PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化 ,纯化后PCR产物直接测序。将测得的序列用Dnastar软件分析并与国外已发表的相应序列进行了同源性比较 ,并绘制了系统发育进化树。结果初步建立了火鸡隐孢子虫的PCR检测方法 ,序列分析显示长春鸭源火鸡隐孢子虫与国外 9株隐孢子虫相应序列同源性在 82 7%～ 99.8%之间 ,其中与国外火鸡源火鸡隐孢子虫相应序列同源性为 85 .3% ;与C .felis同源性最低 ,与C .muris同源性最高。

摘要：根据大肠杆菌 O15 7Z4182基因设计 1对引物 ,并在其 5′端分别加入 Nco 、Xho 酶切位点 ,用聚合酶链反应(PCR)从本试验用的大肠杆菌 O15 7及 1株产志贺毒素大肠杆菌 (STEC) O8、1株肠道聚集粘附大肠杆菌 (EAgg EC)和 1株产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)菌株中也扩增出了 80 3bp的 DNA片段。以大肠杆菌 O15 7菌株 94H的 DNA为模板 ,用上述引物做 PCR,将其产物连接到载体质粒 p ET2 8a(+) ,然后转化到宿主菌大肠杆菌 L E392 ,从该菌中提取重组质粒 ,再将其转化到表达宿主大肠杆菌 BL2 1(DE3) ,用 PCR、限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定 ,表明 Z4182基因定向克隆到了载体质粒 p ET2 8a(+)。将转化子培养并经 IPTG诱导后 ,做SDS- PAGE电泳 ,表明该菌株可以表达 Z4182基因。本试验为阐明大肠杆菌 O15 7Z4182基因的分布及探讨该基因产物的功能和致病作用奠定了基础。

摘要：从大肠杆菌 Acr A的编码序列中设计引物 ,以大肠杆菌基因组为模板 ,扩增出 Acr A基因中约 6 91 bp的 c DNA片段 ,将所得片段与 p MD- 1 8T载体连接 ,转化到 DH5α大肠杆菌中 ,成功地筛选到阳性克隆 ,其质粒测序结果与文献报道一致。从阳性克隆中提取质粒 ,经 Hind 和 Bam H 酶解 ,回收 6 91 bp的目的片段 ,定向克隆到 p ET- 2 8a表达载体中 ,提取质粒 ,再次转化到 BL2 1 (DE3)中 ,成功地筛选出阳性克隆。经 IPTG诱导阳性菌 ,通过 SDS- PAGE检测出Acr

摘要：在克隆AcrA、AcrB部分基因片段并进行基因及编码蛋白的同源性分析的基础上,设计合成构建AcrA、AcrB的内标准DNA所需引物,经过3次(12个)PCR成功地合成了AcrA、AcrB的内标准DNA。合成法构建定量RT-PCR内标准DNA快捷、成功率高。

摘要：根据国外已发表的番鸭细小病毒 (MPV) FM株基因组核苷酸序列 ,设计了 1对引物 ,分别对国内 2株番鸭细小病毒分离株 MPV扬州 (YZ)株和 MPV佛山 (FS)株主要结构蛋白 (VP2和 VP3)基因进行 PCR扩增 ,并克隆到p CR3.1T载体 ,经酶切鉴定筛选出阳性克隆质粒并进行核苷酸序列分析比较。结果表明 ,MPV YZ和 MPV FS的VP2 - VP3基因大小均为 176 4bp,编码 5 88个氨基酸。 MPV YZ、MPV FS与 MPV FM核苷酸序列同源性分别为98.5 %和 98.6 % ,氨基酸序列同源性为 97.1%和 97.8% ;MPV YZ与 MPV FS核苷酸序列的同源性为 99.5 % ,氨基酸序列同源性为 98.8%。

摘要：根据巴氏杆菌磺胺耐药基因 Sul 序列设计引物 ,以临床分离的禽源巴氏杆菌磺胺耐药菌株为模板 ,扩增出禽源巴氏杆菌 Sul 的全长基因序列。经 T载体克隆和核苷酸序列测定 ,克隆的 Sul 基因与文献报道的同源性为98.9% ,有 9个碱基的差异 ,但所编码的氨基酸没有改变。将 Sul 基因按正向的阅读框架与表达载体 p ET- 2 8c(+)连接 ,重组质粒经酶切鉴定正确后 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检测 ,融合蛋白的表达产物占菌体总蛋白的 11% 。

摘要：根据巴氏杆菌链霉素耐药基因 Str A序列 ,设计合成 1对引物 ,以临床分离的禽源巴氏杆菌链霉素耐药菌株质粒DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出禽源巴氏杆菌的 Str A基因片段。将长约 80 4 bp的 Str A目的基因克隆到 p GEM-T载体上 ,通过核苷酸序列测定 ,结果表明 ,克隆的 Str A基因长约 80 4 bp,与文献报道 (NC- 0 0 1774 )的同源性为99.8% ,只有 1个碱基不同 (6 9位 T→ C) ,但所编码的氨基酸没有改变。将 Str A基因按正确的阅读框架定向克隆到原核表达载体 p ET- 2 8c(+)中 ,重组质粒酶切鉴定正确后 ,将构建好的原核表达质粒 p ET- 2 8c(+) - Str A转化到受体菌BL- 2 1(DE3)中 ,经 IPTG诱导后 ,进行 SDS- PAGE电泳 ,经检测 ,Str A外源基因的表达产物占菌体总蛋白的 12 %。

摘要：根据伪狂犬病病毒 Rise毒株 g E基因序列 ,设计合成 1对引物 ,采用 PCR方法 ,从伪狂犬病病毒闽 A株 DNA扩增出 5 5 8bp片段。将该片段克隆到 p UC19质粒中 ,测序正确后再将其克隆到表达质粒 p ET- 2 8a中 ,以 BL 2 1(DE3)为宿主菌 ,在 IPTG诱导下获得了高效表达。经 SDS- PAGE及 Western- blotting鉴定分析 ,表达蛋白大小约 2 30 0 0 ,蛋白薄层扫描分析表明 ,该蛋白约占菌体总蛋白的 30 %。