摘要：体外点突变是研究蛋白质结构-功能关系、基因表达、载体修饰等的重要技术之一。已报道的一些体外突变方法［1～4］，一般需以单链DNA为模板，并要求对突变基因进行亚克隆和对单链DNA拯救，技术上较复杂，多数需1周以上时间。Stratagen公司研制的Quickchange试剂盒，可以双链DNA质粒为模板，只需4步操作，在1～2 d内即可完成点突变过程［5］，但该试剂盒价格昂贵，使用次数有限。我们根据Pfu和DpnⅠ等酶的特性，自行设计了突变反应及方法，对6 kb、8 kb和14.6 kb的目的质粒分别进行了点突变，成功地在质粒上创造了相应的酶切位点。

摘要：将猪肌生成抑制素编码序列下游 883～ 1 1 2 6 bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化 ,将优化后序列双链分成 1 2个单链片段 (F1 、F2 、F3、R6 、R5、R4 、F4 、F5、F6 、R3、R2 、R1 ) ,采用化学合成方法合成 ,每对相邻互补片段之间有 2 0 bp序列交叉重叠。F1 长 38bp,R1 长 36 bp,其他片段均 4 0 bp长 ,F1 和 R1 片段两端分别加上限制性内切酶 Nco 和 Xho 的识别位点序列。经 PCR扩增出 2 5 4 bp片段 ,该片段与 p MD1 8- T载体连接 ,转化 JM1 0 9感受态细胞 ,所得阳性克隆进行测序分析 ,得到的克隆序列与设计的序列完全一致 ,表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体。从阳性细菌中提取质粒 ,经 Nco 和 Xho 酶切 ,回收 2 5 4 bp目的片段 ,定向克隆到 p ET2 8a中 ,转化 DH5α受体菌 ,提取质粒 ,再转化到 BL2 1 (DE3)中 ,成功筛选出阳性克隆。阳性菌经 IPTG诱导 ,通过 SDS- PAGE。

摘要：在比较国内外口蹄疫病毒 (FMDV)流行毒株序列的基础上 ,设计了检测 FMDV的 PCR引物及 O型 FMDV不同基因型即中国型 (Cathay)与乏亚株 (Pan Asia)的二联 PCR引物。在确定单项 RT- PCR反应条件的基础上 ,建立、优化了二联 RT- PCR反应体系和条件 ,并进行了相关病毒检测试验。结果表明 ,建立的检测 O型 FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联 RT- PCR,有效、特异且敏感 ,为 FMD的诊断。

摘要：为构建可用于同源重组或体外重组的犬腺病毒 (canim e adenovirus,CAV) E3区缺失性表达载体 ,在克隆的 E3区两末端设计并合成了 2对突变引物 ,在引物中分别引入 1个 Bgl 酶切位点 ,以 p BE3质粒为模板 ,经 2次点突变后 ,得到含有 2个 Bgl 位点的重组质粒 p BE3M。该质粒经 Bgl 酶切后自连得到 E3区缺失的质粒 p BE3Δ。在 p BE3Δ质粒的 Bgl 位点加入接头后 ,产生含多个酶切位点的质粒 p BE3L,经相应的酶切鉴定 ,证明突变、缺失和接头连接正确后 ,利用 p BE3L 分别构建了带有和不带有外源性启动子的绿色荧光蛋白基因的重组表达质粒 ,并分别进行转染以检测其表达。结果显示 ,p BE3L CGFP质粒在转染 DK细胞后 ,于 36 h即可观察到荧光 ,72～ 96 h无明显差别 ,传 3代后仍可见表达荧光的细胞 ;而 p BE3L GFP质粒转染 DK细胞后经检测无表达。结果表明 ,构建的 E3区缺失性载体不能利用 E3区自身的启动子进行目的基因的表达 ,外源性启动子的加入是必要的。

摘要：参考新城疫病毒 (NDV)相关毒株基因组核苷酸序列 ,设计了 3对特异性引物 ,应用 RT- PCR一次性扩增出NDV长春株 NP、P、M基因的氨基酸编码区 (ORF)。将 NP、P、M基因插入质粒 p Bluescript KS(- )后测序。序列分析表明 ,长春株 NP、P、M基因的 ORF长度分别为 1470、1188、10 95 bp,分别编码 490、396、36 5个氨基酸 ,与发表的13株 NDV毒株相关基因相比较 ,核苷酸序列同源性分别为 85 .7%～ 99.1%、82 .8%～ 96 .9%、84.3%～ 99.7% ,推导的氨基酸序列同源性分别为 92 .5 %～ 99.3%、84.3%～ 95 .9%、88.9%～ 99.1%。对 NP、P、M基因同源性比较和进化树分析结果表明 ,长春株与 L a Sota、B1等弱毒株之间具有很近的亲缘关系 。

摘要：为了在 1个基因序列内同时实现多个位点突变 ,本试验以犬 2型腺病毒 E3区为突变目的基因 ,建立了一种以多个引物多聚酶链式反应为基础的简单快速的多位点突变方法。首先根据需要在 E3区不同位置设计了与同一条链互补的 4条突变引物 ,在 4条引物 (PBGL、PNCO、PBST、PNOT)中分别引入了 Bgl 、Nco 、Bst B 和 Not 位点 ,与模板链核苷酸序列相比 ,每条引物内均包含了 2～ 3个突变的碱基 ;然后以含 CAV- 2 E3区基因的质粒为模板 ,利用高保真 DNA聚合酶、d NTPs和 5′末端磷酸化的 4条引物 ,在同一个 PCR反应管内进行突变 PCR反应 ,最后以 Dpn 消化反应管内模板链 ,取少许电激转化 *** DH10 B感受态细胞获得转化子。经上述 4种内切酶对转化子 DNA的酶切鉴定 ,证明获得了存在多种突变组合的突变基因 ,为进一步研究 E3区不同缺失对外源基因表达的影响奠定了基础 。

摘要：本试验运用牛油、豆油、鱼油三种脂肪酸组成不同的脂肪源设计日粮 ,因而其对肉仔鸡肝脏中FAS、ACC、HMG -COA还原酶基因的mRNA的表达量的影响也存在差异。结果表明富含PUFA的鱼油相对其它脂肪源对此三种基因表达的抑制作用最为明显。运用RT -PCR定量的三种基因的mRNA的量分别比牛油组下降了 5 0 .35 %、4 0 .35 %和81.4 9% ,差异显著 (P <0 .0 5 )。而豆油组中此三种基因的表达相对牛油组下降了 1.4 8%、2 0 .6 9%、2 4 .5 3% ,其抑制效果不如鱼油。

摘要：利用油用向日葵（Helianthus annuus L.)的5个不育系和6个恢复系，按NCⅡ交配设计配制30个杂交组合，分析了F1单株产量性状和皮壳率性状的配合力及其互补关系。结果表明：皮壳率主要是由基因加性效应控制的，非性效应很小；单株产量是由基因加性效应和非加性效应共同控制的。因此，可选用皮壳率一般配合力较低而产量特殊配合力较高的品种或自交系做亲本，即利用两种性状配合力类型的互补，以获得高产低皮壳率的杂交种。

摘要：本文从设计思想和前期准备 ,结构设计和制作 ,主要特点及作用等方面介绍了“军需仓库被装物资管理系统”多媒体课件的设计与制作 ,该课件主要用于“军需仓库被装物资管理系统”

摘要：为了寻求防治动物过敏性疾病的中药方剂 ,根据中兽医病因病理学理论 ,制定了养血润肺、疏风解表和散寒防湿的防治法则 ,借鉴传统中药方剂学理论与现代研究成果 ,设计了 3组抗动物过敏性疾病的中药配方 ,并进行了药效学比较观察。结果表明 ,所选中药配方提取液均可显著抑制多种变应原所致的炎性反应 ,其中方 1的效果最好 ,对大鼠 RPA足肿胀抑制率为 6 5 .0 2 %～ 72 .5 0 %;对大鼠角叉菜胶性足肿胀抑制率为4 3.6 4 %～ 5 7.2 9%;对豚鼠 RPA皮肤出血抑制率为 4 0 .1 6 %;对大鼠棉球植入所致的炎性肉芽肿形成抑制率为 4 2 .6 2 %;对小鼠二甲苯性耳肿胀抑制率为 5 3.82 %;对小鼠醋酸性腹腔毛细血管通透性增加的抑制率为 6 6 .6 7%。该方经进一步临床试验 。