摘要：根据GenBank报道的犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)序列,设计两对联合PCR引物,其中一对为CAV-1和CAV-2通用引物,另一对为CPV引物。在建立单项PCR基础上,通过优化Mg2+离子浓度和循环参数等反应条件建立联合PCR,确定联合PCR条件为:96℃180s,96℃30s,56℃30s,72℃80s,30个循环。联合PCR结果显示:CAV-1扩增片段大小为497bp,CAV-2为1019bp,CPV为719bp;细胞和其它相关病毒对照均无扩增带。上述PCR产物经用限制性内切酶酶切和克隆测序,结果均与相应病毒的应有条带和序列相同。敏感性比较试验结果表明,联合PCR比用细胞培养分离病毒敏感。将联合PCR应用于15份CAV和CPV细胞培养物,5份CAV-1、1份CAV-2和3份CPV人工感染犬病料以及30份临床病料检测,并与电镜负染、HA/HI及病毒分离等方法的结果进行比较,结果显示,联合PCR的检出率和病毒分离结果一致,高于电镜负染和HA/HI试验。以上结果说明:CAV-1/CAV-2和CPV联合PCR不仅具有很好的特异性和敏感性,而且可以在短时间内(2 5h～3h)同时鉴定出上述三种病毒,因此具有良好的实验室诊断和临床应用价值。

摘要：狂犬病病毒SRV9株是经克隆获得的中等蚀斑口服弱毒疫苗候选株,具有安全和免疫原性较好等优点。本试验根据狂犬病病毒糖蛋白核苷酸5’末端和3’末端序列设计了一对引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增了 SRV9及其母源株SAD B19糖蛋白的全长cDNA。测序结果表明,SRV9和SAD B19糖蛋白cDNA读框长1575bp,编码524氨基酸残基的多肽。通过和其母源株SAD B19核苷酸序列比较发现,SRV9的158、575、931位碱基分别出现了G→A、A→G和A→G的转换,相应地导致第53位、192位、311位氨基酸出现了Gly→Glu、His→Arg、Thr→Ala突变;和我国现行的犬用疫苗株ERA的核苷酸和氨基酸比较,有10个碱基不同.7个氨基酸发生改变。经Jameson-Wolf抗原表位优势图分析发现,SRV9在192位氨基酸的改变,导致该部位产生了一个新的潜在抗原位点。由于狂犬病病毒糖蛋白是诱导机体产生中和抗体唯一抗原,因此,上述氨基酸的改变可能与其特殊的蚀斑特性和其安全性提高有关。保持对毒株的氨基酸序列分析也是监测其特性的重要手段之一。

摘要：将猪肌生成抑制素编码序列下游883～1126 bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化,将优化后序列双链分成12个单链片段,F_1、F_2、F_3、R_6、R_5、R_4、F_4、F_5、F_6、R_3、R_2和R_1,采用化学合成方法合成,每对相邻互补片段之间有20bp序列交叉重叠。F_1长38bp,R_1长36bp,其他片段均40bp长,F_1和R_1片段两端分别加上限制性内切酶NcoⅠ和XhoⅠ的识别位点序列。经PCR扩增出254bp片段。该片段与pMDI8-T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行测序分析,得到的克隆序列与设计的序列完全一致。表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体。

摘要：实验以木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶As1.398、碱性蛋白酶As27094种酶复合水解酪蛋白,生产酪蛋白磷酸肽。设计了木瓜蛋白酶+中性蛋白酶As1.398、木瓜蛋白酶+碱性蛋白酶As2709,胰蛋白酶+中性蛋白酶As1.398、胰蛋白酶+碱性蛋白酶As2709、木瓜蛋白酶+胰蛋白酶+中性蛋白酶As1.398和木瓜蛋白酶+胰蛋白酶+碱性蛋白酶As2709六种试验方案。通过比较水解度、酶促水解速率(酶活力)、得率和N/P比等工艺参数,探索合适的实验工艺条件。我们发现胰蛋白酶+中性蛋白酶As1.398这组的产品综合结果最佳。

摘要：以面粉为主要原料,探究压缩饼干最佳基础配方,在单因素试验明确棕榈油添加量、全麦粉添加量、全脂奶粉添加量对压缩饼干感官评分影响的基础上,按Box-Behnken设计试验,采用响应面分析法建立二阶多项式非线性回归方程和数值模型,并优化压缩化饼干基础配方。结果表明,压缩饼干的最佳配方为:面粉(全麦粉35%小麦粉65%)100%,棕榈油20%,全脂奶粉9%,白砂糖6%,食用盐1%,小苏打1%,水16%,姜粉0.35%(此配方以面粉为基准),感官评分最高,优化后验证试验的感官评分为85,与理论预测值较为接近,偏差为0.74%,说明模型的拟合程度较好,具有实用价值。此配方下的压缩饼干口感疏松舒适,风味纯正,品质优良。

摘要：针对北方寒冷地区的气候特点,充分利用猪自身产热和太阳光能,建筑的养猪种菜一体舍,既保证了猪群正常生长,又使蔬菜大棚在无采暖的情况下生产蔬菜。

摘要：在传统的PCR加酶切检测猪的RYR1基因基础上,设计能特异地扩增突变和正常序列的4条引物,根据扩增片段大小和条带多少可直接鉴别不同的RYR1基因型,从而建立了简单、廉价、准确地PCR一步检测猪应激综合征的新方法。

摘要：目的　克隆人乙酰胆碱酯酶 (AchE)cDNA并构建真核表达载体。方法　根据GeneBank中hAchE核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增hAchE的引物 ,从 18周龄引产的胎儿大脑组织中提取RNA为模板 ,利用RT PCR技术扩增出hAchEcDNA片段 ,并与pGEM T载体连接 ,转化大肠杆菌DH5α中 ,经IPTG X gal诱导培养 ,筛选白斑提取重组载体 ,经酶切和PCR鉴定及序列测定与分析 ,并构建hAchE真核表达载体pcDNA3 .1(+) hAchE。结果　已克隆的hAchEcDNA片段全长约 1.9kb ,其测序结果与基因文库中的人乙酰胆碱酯酶cDNA序列相符。结论　在国内首次利用RT PCR成功地克隆了hAchEcDNA全长 ,并构建了hAchE真核表达载体pcDNA3 .1(+) hAchE ,为进行hAchE的结构与相关功能研究和基因工程生产奠定了基础。

摘要：为提高学员对变深度发射相关知识的理解和掌握,提出了一种导弹水下变深度发射能量调节半实物仿真系统的设计方案。通过分析某导弹水下变深度发射能量调节机理,明确功能要求,基于Matlab对水下发射内弹道进行建模与仿真;利用SolidWorks软件搭建半实物仿真系统机械模型进行,实现系统的动画演示功能。通过LabVIEW软件搭建系统可视化操作显示界面,实现对发射内弹道参数信号的采集、调用和机构调节状态显示等功能。通过模块设计及软件联合编程,实现系统的集成设计,形成以装备的机械模型、虚拟仪器界面和仿真计算三者有机结合的变深度发射能量调节半实物仿真系统。该系统功能完备、人机交互友好,能为某导弹水下变深度发射相关理论实践及研究工作提供有力支撑。

摘要：研究了从病鱼体内分离的嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物耐药性的分子机理。以 4株对诺氟沙星等氟喹诺酮类药物耐药菌株及 2株敏感菌株为模板 ,参照杀鲑气单胞菌gyrA基因序列 ,设计了 1对引物 ,进行 gyrA基因氟喹诺酮抗性决定区PCR扩增 ,将扩增产物克隆入pMD1 8 T载体 ,转化入大肠埃希氏菌DH5α中 ,小提质粒 ,酶切鉴定 ,测序并分析比较耐药菌和敏感菌的氨基酸残基序列 ,发现耐药菌有 5个氨基酸突变位点 ,分别是 83位点的Ser→Ile,92位点的Leu→Met,1 74位点的Ile→Phe,2 0 2位点的Asn→Asp ,2 0 3位点的Leu→Arg ,耐药菌突变后的氨基酸残基均比敏感菌正常的相对应氨基酸残基分子量大。 83位点的突变与大肠埃希氏菌的耐药性突变一致 ,1 2 2位点具有保守的Try。