摘要：学术背景:尽管一些实验已提出细胞膜可能是电磁生物效应的靶细胞部位之一的证据,但揭示电磁辐射细胞膜的通透性以及认识电磁辐射细胞生物效应的报道仍较少。目的:探讨低功率毫米波辐射与人白血病HL60细胞膜通透性及细胞凋亡的关系。设计:辐射组4组与非辐射组对照实验。单位:实验于2006-11/2007-04在解放军广州军区广州总医院医学实验中心实验室完成。材料:人白血病HL60细胞株由解放军广州军区医学实验中心提供,HD-413.2HPSG100毫米波辐射装置由西安恒达微波技术开发公司研制。方法:应用频率为41.32GHz、平均功率密度为2mW/cm2的毫米波辐射HL60细胞,根据辐射时间分为辐射0,15,30,45,60min组。主要观察指标:镧示踪法观察各组细胞内外镧颗粒分布,评价细胞膜通透性变性的变化;透射电镜观察超微结构细胞形态特点;原位标记法行细胞凋亡阳性定量分析。结果:①毫米波辐射HL60细胞45min和60min可见少量镧颗粒进入细胞质内,超微结构观察显示线粒体肿胀,粗面内质网扩张,细胞凋亡易见。②TUNEL法染色显示辐射15,30,45,60min组凋亡率较0min组有增加的趋势,尤以45min和60min组细胞凋亡明显增加。结论:低功率毫米波辐射HL60细胞,导致细胞膜通透性增加是促进细胞凋亡及产生系列生物学效应的重要因素之一。

摘要：背景:人骨唾液蛋白基因在矿化组织以外的易发生骨转移的人乳腺癌中表达。临床观察显示骨转移处的乳腺癌细胞骨唾液蛋白的表达量要高于原发部位的乳腺癌细胞,因此骨唾液蛋白有可能与肿瘤特异性骨转移的关系密切。研究乳腺癌骨转移可为将来临床的预防和治疗提供新的药物靶点。目的:建立骨唾液蛋白的稳定表达乳腺癌细胞系,观察骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移的整个过程中的作用。设计:对照实验。单位:华南理工大学生物科学与工程学院,解放军广州军区广州总医院医学实验中心。材料:实验于2003-11/2004-03在解放军广州军区广州总医院医学实验室完成。质粒、菌种和细胞:pIRES2-EGFP载体质粒,***10、含有人骨唾液蛋白基因全长的克隆载体pB-hBSP和发生特异性骨转移以及脑转移的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO和MDA-MB-231BR。方法:将人骨唾液蛋白基因通过聚合酶链式反应的方法从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆出来,在其5’和3’端分别引入BglⅡ和PstⅠ限制性酶切位点,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建重组载体pIRES2-hBSP-EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性脑转移和骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BR和MDA-MB-231BO中。主要观察指标:pIRES2-hBSP-EGFP重组表达载体的构建。重组表达载体pIRES2-hBSP-EGFP转染乳腺癌细胞。结果:①成功构建人骨唾液蛋白和绿色荧光蛋白非融合表达的真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP。②成功转染特异骨转移和脑转移的乳腺癌细胞株,可在荧光显微镜下观察到荧光蛋白标记,人骨唾液蛋白得到相应表达。结论:真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP的构建及转染可为骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移中的作用的体内、外研究奠定一定的基础。

摘要：背景：骨髓间充质干细胞由于其具有多向分化潜能和高增殖潜能而在组织工程领域具有广泛的应用前景。目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞在向成骨细胞分化过程中细胞及生物活性变化。设计、时间和地点：随机对照实验,实验于2004-07/2006-06在解放军广州军区广州总医院医学实验科干细胞组织工程实验室完成。材料：成年清洁级SD大鼠20只,雌雄不拘用于取骨髓。方法：按随机数字表法将动物分为实验组和对照组,每组10只。通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,对照组以基础培养液（10%胎牛血清＋高糖DMEM＋100U/L青霉素＋100U/L链霉素＋2mmol/L谷氨酰胺）培养,实验组用条件培养液（基础培养液,10mmol/Lβ-甘油磷酸纳,10^-7mol/L地塞米松,50mg/L维生素C）进行诱导培养。一段时间后制备细胞爬片。主要观察指标：①用倒置显微镜和透射电子显微镜进行细胞形态学观察。②采用Gomori改良钙钴法进行碱性磷酸酶染色,应用免疫细胞化学染色方法测定骨钙素的表达。结果：骨髓间充质干细胞接种48h后,较多细胞贴壁,72h后增殖,生长良好;7-9d时细胞融合率可达到80%。透射电镜下骨髓间充质干细胞的细胞核较大,形态幼稚。经过体外成骨诱导的骨髓间充质干细胞表现出增殖、聚集、结节和矿化期的阶段性形态特征,诱导1周后表达碱性磷酸酶活性,2周后骨钙素表达呈阳性。结论：骨髓间充质干细胞经体外成骨定向诱导1周后进入成骨细胞的转化过程,并可以保持一定程度的增殖活性,可作为骨组织工程的种子细胞。