摘要：根据２，３二氨基萘（２，３ｄｉａｍｉｎｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ，ＤＡＮ）可与一氧化氮（·ＮＯ）反应生成荧光性２，３萘酚三唑（２，３ｎａｐｈｔｈｏｔｒｉａｚｏｌｅ，ＮＡＴ）和·ＮＯ的气体特性，设计了一个流动气体和荧光方法相结合的·ＮＯ直接测定方法．此法以惰性气体氮气为流动气体使样品中的待测·ＮＯ随流动气体进入测定溶液，溶液中的ＤＡＮ捕集流动气体中的·ＮＯ生成荧光性ＮＡＴ．实验结果表明测定溶液的荧光强度与·ＮＯ浓度呈正比，与酸化亚硝酸盐溶液的浓度亦呈良好线性关系．用此方法测得五份酸化正常人血浆的·ＮＯ浓度为（３１０４±４７０）ｎｍｏｌ／Ｌ。

摘要：目的通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者甘露糖结合凝集素(MBL)的血清水平及其基因变异情况,探讨MBL在SLE发病机制中的作用。方法以30名健康献血员为对照,以40例SLE患者为研究对象。通过固相ELISA方法检测MBL的血清水平。根据MBL2*LXPA(基因库X15422)单倍体序列设计了MBL外显子1区和启动子区的引物和荧光标记的寡核苷酸杂交探针,通过L ight Cyc ler实时PCR技术检测2组标本的基因变异情况。结果(1)SLE患者的MBL血清水平显著低于健康献血员(107.2μg/L对290.2μg/L,P<0.01)。(2)MBL基因外显子1区的突变以第54位密码子的突变为主,其突变率在SLE患者为37.1%(15/40),对照组为13.3%(5/30),两组比较χ2=3.914,P<0.05。(3)健康献血员和SLE患者在H/L位点均存在多态性,两组的L频率相当。(3)发生第54位密码子突变的SLE患者血清MBL水平显著下降,发生突变者与未发生突变者分别为141.7μg/L,49.8μg/L,两者比较P<0.01;两者的SLE活动指数(DAI)积分分别为12.87和7.44,P<0.01,且SLEDAI积分与MBL血清水平呈负相关(r=-0.48),启动子区H/L多态性与SLEDAI无关。结论发生MBL基因第54位密码子突变可能是SLE发病的易感因素;MBL的血清水平可能是SLE疾病活动性的潜在生物标记。

摘要：背景:连续高浓度吸氧可以提高大鼠抗氧化酶,同时对肺产生损伤作用。目的:观察间断、高浓度吸氧对大鼠抗氧化酶活性及肺组织的影响。设计:完全随机设计,对照实验。单位:解放军总医院老年心内科和生化科。材料:实验于2002-01/2002-05在海军总医院高压氧科和解放军总医院生化科内完成。选用健康Wister大鼠10只,体质量200～250g,雌雄不拘。随机将大鼠分为2组,每组5只。方法:对照组大鼠在室内环境喂养7d。高氧预适应组动物放入高压氧仓内,每日吸80%～85%的氧气(101.325kPa)6h,连续7d。实验结束后取大鼠肺称肺湿重。并取肺组织0.4g,在冰浴上制成匀浆,取上清液采用化学发光法分别测定超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性。将肺组织采用30g/L戊二醛固定,制成切片后电镜下观察肺脏超微结构。主要观察指标:①两组大鼠肺湿重及肺组织超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性比较。②肺组织超微结构改变。结果:大鼠10只均进入结果分析。①肺组织超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性:高氧预适应组均明显高于对照组[(185.10±1.92)%/g,(90.50±4.17)nkat/g,(4.38±0.18K/g;(95.15±1.43)%/g,(20.17±2.17)nkat/g,(1.10±0.19)K/g,t=-84.016,-33.488,-28.023,P0.05],说明高氧预适应组肺内液体没有增加。③肺组织超微结构:高氧预适应组肺组织基膜完整、厚度均匀一致,血管内皮细胞完整,Ι型上皮细胞无破坏。结论:间断、高浓度吸氧能提高大鼠肺内抗氧化酶活性,对大鼠肺无明显的损伤作用。

摘要：背景:葛根具有防治高血压、心脏病、糖尿病和血液病等多种生物学功效,其提取物对S180肉瘤及Lewis肺癌的增殖有一定抑制作用。目的:观察葛根总黄酮对嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞生长的影响和抗过氧化氢所致细胞氧化损伤的防护作用。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:解放军总医院生化科和老年病研究所。材料:葛根购自同仁堂药店,由本实验室用乙醇、乙酸乙酯按常规提取分离提纯葛根总黄酮,用理化方法和薄层色谱进行鉴定,定量测定提取物中葛根素含量为31.79%。四甲基偶氮唑盐(Sigma公司)。鲁米诺购自Sigma公司。抗氧化活性试剂用黄嘌呤氧化酶(Sigma公司)。PC12细胞为解放军总医院老年病研究所惠赠。方法:实验于2001-01/07在解放军总医院老年病研究所完成。①以20g/LDMEM细胞培养液(pH7.1～7.2)培养细胞。将培养细胞按随机抽签法分为2组:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤+葛根总黄酮组,其中每组又根据葛根总黄酮的浓度平行分为5个质量浓度进行观察(0,1.0mg/L,10,100mg/L,1.0g/L),每组平行培养8孔,每孔100mL培养液(细胞数为1×109L-1),葛根总黄酮组于37℃条件下,加入葛根总黄酮培养72h;过氧化氢+葛根总黄酮组:在37℃条件下,加入葛根总黄酮培养48h后,再加入500mmol/L过氧化氢,继续培养24h。②用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞活性;用Griess方法测定培养液中亚硝酸盐含量,用次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶测定培养液中的超氧化物歧化酶活性,以观察葛根总黄酮对PC12细胞生长活性的调控;并外源性加入过氧化氢,观察葛根总黄酮对过氧化氢所致培养PC12细胞氧化损伤的防护作用;结果以抑制率表示[(空白A值-测定A值)/空白A值×100%],抑制率越高,说明培养液中清除O2-的能力越强。③数据间差异比较采用单因素方差分析。主要观察指标:葛根总黄酮对PC12细胞培养液中亚硝酸盐含量、超氧化物歧化酶活性、及细胞活性的影响。结果:①葛根总黄酮对PC12细胞活力的影响:1～10mg/L的葛根总黄酮对PC12细胞的生长无明显影响,100mg/L葛根总黄酮可促进PC12细胞的生长(P<0.05),当葛根总黄酮在培养液中的浓度增加至1.0g/L时,则表现出明显地抑制细胞生长效能(P<0.01)。培养液中葛根总黄酮浓度在1～100mg/L内可有效提高过氧化氢损伤组细胞的活力(P<0.05)。②葛根总黄酮对PC12细胞培养液清除O2-的影响:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤+葛根总黄酮组清除O2-的能力均随着葛根总黄酮质量浓度的增加而逐渐升高(除外过氧化氢+葛根总黄酮组加入葛根总黄酮1mg/L时),具有明显量效关系。两组均在加入100mg/L和1g/L葛根总黄酮时PC12细胞培养液中超氧化物歧化酶活性明显高于未加入葛根总黄酮时(P<0.05～0.01)。③葛根总黄酮对PC12细胞亚硝酸盐的调控:低浓度(1～100mg/L)的葛根总黄酮使培养细胞亚硝酸盐生成减少,但培养液中葛根总黄酮浓度达1g/L时,亚硝酸盐生成量则增加。结论:①葛根总黄酮对培养的PC12细胞具有一定生长调控作用,低质量浓度(1～100mg/L)时促进细胞生长,高质量浓度(1g/L)时抑制细胞生长,但抗氧化能力最强。②在培养液中加入1～100mg/L的葛根总黄酮对过氧化氢所致PC12氧化损伤具有明显防护效能。

摘要：背景:脂代谢紊乱是多种疾病的根源,筛选安全有效的降脂组方具有重要的临床价值。目的:探讨葛根素和精氨酸组合物对大鼠脂代谢的影响。设计:分组对照的观察性实验。单位:解放军总医院动物实验中心和生化科。材料:实验于2004-05/08在解放军总医院动物实验中心和生化科完成。将80只Wister大鼠随机分为高、中、低剂量组和对照组,每组雌、雄各10只。方法:通过自由进食观察不同剂量(0、0.93,1.39和1.85g/kg)的葛根素和精氨酸组合物对大鼠的影响。主要观察指标:①血液学指标。②体质量变化和食物利用率。③主要脏器系数的变化。④组织病理学变化。结果:第2周开始两种性别的动物体质量明显低于对照组。0.93g/kg剂量雌性大鼠和对照组血液中胆固醇分别为(1.63±0.20),(1.29±0.23)mmol/L,雄性大鼠和对照组分别为(1.75±0.13)和(1.31±0.19)mmol/L,雌、雄性大鼠分别与对照组比较差异均有显著性意义(F=6.43,6.58,P<0.05)。3个剂量组脂肪系数与对照组比较则显著降低。结论:该组合物可显著降低实验大鼠的体质量、食物利用率、胆固醇和脏器脂肪比值,具有一定的降脂作用。

摘要：目的构建抗人红细胞与抗HIV-1p24抗原双特异性抗体分子基因并进行三维立体结构模拟,为双特异性抗体蛋白的表达奠定理论基础。方法采用RT-PCR法从特异性分泌抗HIV-1p24抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D7中克隆单抗的可变区基因,构建抗HIV-1p24抗原单链抗体基因ScFv3D7,并通过ANTHEPROT5.0软件进行物理和化学以及二级结构预测,利用SWISS-MODLE软件进行立体结构模拟。通过15、30、45、60、75肽模拟连接单链抗体基因ScFv3D7与ScFv2E8(抗人红细胞H抗原,已制备),构建双特异性抗体分子基因,并进行立体结构预测。结果由柔性肽(G4S)3连接的单链抗体基因ScFv3D7,大小为729bp,编码243个氨基酸,等电点为5.665,相对分子质量为26147.937。其二级结构分析显示了不同比例的螺旋、片层和转角结构,三维立体结构预测模型符合免疫球蛋白家族特征。采用不同长度的柔性肽模拟连接两个单链抗体基因,其中以75肽连接的双特异性抗体分子的三维立体模型形成了完整的蛋白分子。结论基于75肽连接的双特异性抗体分子基因所模拟的立体结构可以认为是适合蛋白表达的分子模型。

摘要：目的探讨四生汤对受辐射小鼠胸腺淋巴细胞抗氧化能力及细胞凋亡的影响及作用机制。方法建立60Co(辐射强度为3Gy)对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤模型。实验设计分为5组:对照组,60Co模型组,高、中、低剂量四生汤组。MTT法检测细胞活性;酶生化法测定各组小鼠胸腺细胞胞浆超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪测定小鼠胸腺淋巴细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测各组Bcl-2和Bax的表达。结果在强度为3Gy60Co辐射情况下,1%-4%浓度范围内四生汤能显著提高小鼠胸腺淋巴细胞的活性;显著提高细胞浆中SOD活性,降低MDA含量;各四生汤组淋巴细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.01);Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱。结论四生汤能提高体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞活性,抑制60Co辐射诱导的淋巴细胞凋亡,其作用机制与四生汤提高抗氧化酶SOD活性,抑制脂质过氧化水平及调节凋亡因子Bcl-2与Bax之间的平衡有关。

摘要：目的筛选浅低温体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)手术前后基因表达变化研究的内参基因。方法通过阅读文献选择基因表达研究中常用的11个管家基因(housekeeping genes,HKGs),采用Beacon Designer软件设计PCR引物;收集4例浅低温CPB辅助手术患者CPB前、体温最低点、CPB末以及术后1d、3d、7d的静脉血24份,提取总RNA,采用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR法检测各样品中11个HKGs的循环阈值;对所得循环阈值进行转换,采用geNorm程序对候选基因的表达稳定性和所需内参基因数量进行分析。结果11个HKGs稳定性排序为:UBC<RPLP0<PGK1<18S-rRNA<PPIA<GAPDH<ACTB<TBP<B2M<EEF1A1/HPRT1;该研究需要的最佳内参基因数量为3个,即EEF1A1、HPRT1和B2M。结论确定了浅低温CPB手术前后11个HKGs中表达稳定性高的EEF1A1、HPRT1和B2M等3个基因为该条件下基因表达研究的内参基因。

摘要：目的探讨糖皮质激素受体（GR）单核苷酸多态性与2型糖尿病（T2MD）易感性及人体体型的相关性。方法采用病例一对照研究设计，从解放军总医院健康体检中心的体检患者中，募集40例T2MD患者和127例对照。结合三种不同的SNP位点选择方法，采用上海天吴生物科技有限公司的iMLDRTM多重SNP分型技术对入选SNP位点进行基因分型。采用非条件Logistic回归，校正年龄、性别、吸烟、饮酒后，分析基因型与T2MD易感性的关系。得到的阳性位点，进一步采用协方差分析，校正年龄、性别、吸烟、饮酒后，评价其与体重指数（BMI）和腰臀比（WHR）的相关性。结果共选取14个SNP位点，其中rsl0052957突变型在病例组中频率为零，故未纳入统计分析。所有的13个SNP位点在病例和对照组中的基因分型均符合***平衡。rs9324924 TT基因型（OR[95％CI]=3．12[1．06～9．17]，P=0．039）和rs9324921AA基因型（OR[95％CI]=14．92[1．39～160．60]，P=0．026）发生T2DM的风险较野生型增高，且两基因型的BMI[P=0．023（rs9324924）；P=0．002（rs9324921）]、WHR[P=0．033（rs9324924）；P=0．003（rs9324921）]也较野生型明显增高。结论在本研究中，GR基因rs9324924、rs9324921与T2DM易感性和体型有关，其中纯和突变型T2DM发病风险明显增加，且更具有肥胖倾向。

摘要：目的将免疫性胰腺炎1-7肽段(SKDERRF)与幽门螺旋杆菌纤溶酶原结合蛋白肽段(AKEERRY)通过连接臂制成双表位多肽,接着偶联载体蛋白,以之作为抗原包被,优化并建立酶免体系,探索是否可用于快速鉴别胰腺癌与免疫性胰腺炎。方法募集免疫性胰腺炎患者、胰腺癌患者和健康人各24例,分离病人血清,制备双表位试剂盒进行检测。结果以OD值0.269为阳性判定标准,在免疫性胰腺炎患者中,阳性患者17例,阳性率为71%;在胰腺癌患者中,阳性患者0例;在匹配的健康人对照组中同样未检测出阳性。结论研究中设计采用的双表位多肽所对应的自身抗体,可以在大部分免疫性胰腺炎患者中检出,而胰腺癌患者与健康人中未显示阳性反应。经过进一步优化完善,该方法可望对快速鉴别免疫性胰腺炎和胰腺癌具有一定的辅助临床参考价值。