摘要：目的探讨乌司他丁对重度烧冲复合伤大鼠急性肺损伤及凝血参数时相性变化的影响。方法将192只SD大鼠按随机数字表法分为单纯烧冲复合伤组、乌司他丁＋烧冲复合伤组、假伤组，每组64只。将2组烧冲复合伤大鼠采用自制新型爆炸装置致中度冲击伤后，将致伤大鼠背部浸人94℃热水中12s，造成25％体表总面积Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）；假伤组大鼠仅背部浸入37℃温水中12s模拟致伤。3组大鼠伤后即刻腹腔注射乳酸林格液40mL／kg；乌司他丁＋烧冲复合伤组大鼠另腹腔注射乌司他丁4×10^4U／kg，每隔12小时注射1次，持续至伤后72h。伤前和伤后3、6、12、24、48、72h及7d，每组取8只大鼠取腹主动脉血检测血浆活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）及纤维蛋白原、D-二聚体、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、α2-抗纤溶酶（α2-AP）水平。伤后24h，各组取3只经取血检测凝血指标后的大鼠，处死后观察肺部大体损伤情况；伤后72h，同前取3只大鼠处死后行肺组织病理学观察。对数据行析因设计方差分析和LSD检验。结果（1）与假伤组比较，单纯烧冲复合伤组大鼠APTT伤后72h、7d明显延长（P〈0．05或P〈0．01），PT伤后3、72h明显延长而伤后6h明显缩短（P〈0．05或P〈0．01），纤维蛋白原水平伤后12h～7d明显升高（P〈0．01），AT—Ⅲ水平伤后6、12h明显降低（P〈0．01），仪***水平伤后6h明显降低而伤后24～72h明显升高（P〈0．01）。与单纯烧冲复合伤组比较，乌司他丁＋烧冲复合伤组大鼠APTT伤后3、6h明显延长（P〈0．01），PT伤后3、12、72h明显缩短（P〈0．05或P〈0．01），纤维蛋白原水平伤后6、12h明显降低而伤后72h明显升高（P〈0．05或P〈0．01），AT-Ⅲ水平伤后3、12、48、72h明显升高（P〈0．05或P〈0．01）；α2-AP水平伤后12～72h明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。假伤组、单纯烧冲复合伤组、乌司他丁＋烧冲复合伤组大鼠伤前和伤后3、6、12、24、48、72h及7dD-二聚体水平分别为（0．084±0．013）、（0．115±0．015）、（0．158±0．022）、（0．099±0．011）、（0．099±0．012）、（0．089±0．011）、（0．124±0．014）、（0．116±0．018）μg／mL，（0．064±0．033）、（0．114±0．016）、（0．135±0．009）、（0．060±0．008）、（0．104±0．010）、（0．124±0．020）、（0．180±0．036）、（0．201±0．032）μg／mL，（0．074±0．013）、（0．084±0．035）、（0．101±0．050）、（0．091±0．046）、（0．096±0．034）、（0．044±0．019）、（0．106±0．049）、（0．118±0．047）μg／mL。与假伤组比较，单纯烧冲复合伤组大鼠D-二聚体水平伤后6、12h明显降低而伤后48h～7d明显升高（P〈0．05或P〈0．01）；与单纯烧冲复合伤组比较，乌司他丁＋烧冲复合伤组大鼠D-二聚体水平伤后3、48、72h及7d明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。（2）伤后24h，单纯烧冲复合伤组大鼠胸腔有大量淡红色积液，双侧肺叶均充血、水肿明显，左侧肺中、下叶有少量血凝块；乌司他丁＋烧冲复合伤组大鼠胸腔有少量淡黄色积液，双侧肺叶充血、水肿较单纯烧冲复合伤组明显减轻，左侧肺叶无血凝块；假伤组大鼠胸腔无积液，未见充血、水肿或出血。（3）伤后72h，单纯烧冲复合伤组大鼠肺泡结构紊乱，肺泡腔萎陷，肺间质水肿、增厚，有大量炎性细胞浸润，肺泡间隔明显断裂，并可见透明血栓形成；乌司他丁＋烧冲复合伤组大鼠肺泡结构较单纯烧冲复合伤组明显改善，肺泡腔萎陷明显减少，肺间质水肿有所减轻，炎性细胞浸润明显减少，肺泡间隔无断裂，无血栓形成；假伤组大鼠肺泡腔充盈良好，未见肺间质水肿或炎性细胞浸润，无血栓形成。结论乌司他丁对重度烧冲复合伤大鼠急性肺损伤有积极的治疗作用，对烧冲复合伤造成的凝血、纤溶功能紊乱具有很好的调节作用。

摘要：目的观察腺病毒介导的人EGF（Ad-hEGF）基因转染人表皮细胞的合适条件及转染对该细胞生物学特性的影响。方法取包皮环切术后弃用的新鲜人体包皮组织，通过酶消化法分离人表皮细胞，传代培养，采用第3代细胞进行以下实验。（1）按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为未转染组及5、20、50、100、150、200倍转染组，每组3孔。未转染组不转染Ad-hEGF基因，后6组分别按感染复数（MOI）5、20、50、100、150、200转染Ad-hEGF基因。转染24、48、72h，倒置相差显做镜下观察细胞形态，倒置荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达。（2）另取3个批次细胞，分别同前分组处理，分别于转染24、48、72h，流式细胞仪检测Ad-hEGF基因转染率（样本数为3），ELISA法检测收集的细胞培养上清液中EGF质量浓度（样本数为6），细胞计数试剂盒8（CCK8）及酶标仪检测细胞增殖活性（样本数为6）。（3）另取细胞分为未转染组和转染组，每组6孔。未转染组用未转染细胞的细胞培养上清液孵育，转染组用以最佳MOI（50）转染Ad-hEGF基因细胞的细胞培养上清液孵育，分别于孵育1、3、5d，CCK8及酶标仪检测细胞分泌的EGF生物活性。（4）另取细胞分为未转染组和转染组，每组12孔。未转染组不转染Ad-hEGF基因，转染组以最佳MOI（50）转染Ad-hEGF基因。转染24h，免疫荧光染色法检测细胞角蛋白14（CK14）、CK19表达。（5）另取细胞，同（4）分组（每组6孔）处理，于划痕后0（即刻）、12、24、48h，倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、LSD检验。结果（1）转染24、48h，各转染组细胞形态与未转染组比较，无明显改变；转染72h，200倍转染组的细胞碎片较未转染组明显增多。转染24、48、72h，未转染组细胞未见绿色荧光蛋白表达，各转染组绿色荧光蛋白阳性细胞数随转染时间延长逐渐增多。（2）各转染组细胞***基因转染率随转染时间延长逐渐增高。转染72h，50～200倍转染组细胞Ad-hEGF基因转染率均大于90％；未转染组及5、20倍转染组细胞Ad-hEGF基因转染率则分别为（0．51±0．20）％、（62．44±6．23）％、（75．00±5．43）％，明显低于50倍转染组的（93．12±2．55）％，P值均小于0．01。随着转染时间的延长，各转染组细胞培养上清液中EGF质量浓度逐渐增高；转染72h，50倍转染组细胞培养上清液中EGF质量浓度明显高于其余各组（P值均小于0．01）。转染24、48h，各组细胞增殖活性相近（P值均大于0．05）；转染72h，200倍转染组细胞增殖活性明显低于其余各组（P值均小于0．05）。（3）孵育1d，2组细胞分泌的EGF生物活性相近（P〉0．05）；孵育3、5d，转染组细胞分泌的EGF生物活性明显高于未转染组（P值均小于0．01）。（4）转染24h，转染组细胞CK14、CK19表达较未转染组增强。（5）划痕后0h，2组细胞划痕宽度基本一致。划痕后12～48h，转染组细胞迁移距离明显长于未转染组（P值均小于0．01）。结论Ad-hEGF基因转染人表皮细胞的合适MOI为50～150，以50为最佳，以此MOI转染既能高效表达目的基因，又可保持细胞良好的增殖、分化和迁移能力。

摘要：目的观察乌司他丁对严重烧伤大鼠脾脏CD4＋T淋巴细胞和CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞（Treg）免疫功能及外周血高迁移率族蛋白B1（HMGB1）含量的影响，并分析其可能机制。方法将96只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假伤组、单纯烧伤组和乌司他丁组，每组32只。假伤组大鼠背部浸入37℃温水中12S模拟致伤；单纯烧伤组、乌司他丁组大鼠背部浸入94℃热水中12S，造成30％TBSA Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）。各组大鼠伤后即刻起腹腔注射生理盐水40mL／kg，乌司他丁组大鼠同时腹腔注射乌司他丁4×104U／kg，每隔12小时注射1次，持续至伤后72h。于伤后1、3、5、7d，每组各取8只大鼠采集腹主动脉血，采用ELISA法检测血清HMGB1含量，随即处死大鼠取脾脏组织，分选CD4＋CD25＋Treg和CD4＋T淋巴细胞。采用流式细胞仪检测CD4＋CD25＋Treg中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）、叉头翼状螺旋转录因子p3（Foxp3）阳性表达率，采用ELISA法检测CD4＋CD25＋Treg培养上清液中IL-10含量；采用ELISA法检测CD4＋T淋巴细胞培养上清液中IL-2、IL-4和γ干扰素含量，采用酶标仪测定CD4＋T淋巴细胞增殖活性，各组各时相点样本数为8。对数据行析因设计方差分析和LSD检验。结果（1）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7d血清HMGB1含量明显增加（P值均小于0．01）。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7d血清HMGB1含量明显减少（P值均小于0．01）。（2）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7d CD4＋CD25＋Treg中CTLA4、Foxp3阳性表达率及细胞培养上清液中IL-10含量明显升高或增加（P值均小于0．01），于伤后3d达最大值，分别为（65±10）％、（76±10）％、（28．2±4．4）pg／mL，此时假伤组大鼠该3项指标分别为（45±7）％、（46±7）％、（11．2±2．3）pg／mL。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7d CD4＋ CD25＋Treg中CTLA4、Foxp3阳性表达率及细胞培养上清液中IL-10含量明显降低或减少（P〈0．05或P〈0．01），分别于伤后7、1、7d达最低值[（43±6）％、（50±8）％、（12．4±3．4）pg／mL]，此时单纯烧伤组大鼠该3项指标分别为（58±8）％、（71±9）％、（19．7±2．8）pg／mL。（3）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7d CD4＋T淋巴细胞培养上清液中IL-2和γ干扰素含量明显减少、IL4含量明显增加（P值均小于0．01）。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7dCD4＋T淋巴细胞培养上清液中IL-2和1干扰索含量明显增加、IL-4含量明显减少（P〈0．05或P〈0．01）。（4）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7dCD4＋T淋巴细胞增殖活性明显减弱（P值均小于0．01）。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7dCD4＋T淋巴细胞增殖活性明显增强（P值均小于0．01）。结论乌司他丁可减弱严重烧伤大鼠脾脏CD4＋CD25＋Treg介导的免疫抑制功能，改善脾脏CD4＋T淋巴细胞的分泌和增殖功能，原因可能为其抑制了体内HMGB1的大量释放。

摘要：目的观察严重烫伤大鼠胰岛B细胞的结构和功能变化，探讨与糖代谢障碍之间的关系。方法将72只Wistar大鼠按随机数字表法分为烫伤组和假伤组，每组36只。将烫伤组大鼠背部浸于94℃热水12s、腹部6S，造成50％TBSAⅢ度烫伤；假伤组大鼠背部、腹部浸于37℃温水模拟烫伤。伤后6h及3、7d，各组分别取12只大鼠行腹腔葡萄糖耐量试验（IPGTT），检测血糖水平并计算血糖曲线下面积（AUC）。IPGTT结束后，分离大鼠胰腺组织行胰岛素免疫荧光和细胞核染色，观测胰岛内胰岛素阳性表达面积比、13细胞面积和数量（简称“胰岛内3项指标”）。对数据行重复测量方差分析及析因设计方差分析，两两比较采用LSD法。结果（1）伤后6h和3d，烫伤组大鼠葡萄糖注射前后血糖水平总体及各时相点血糖水平均显著高于假伤组（处理因素主效应，值分别为79．372、32．962，P值均小于0．001；两两比较，P〈0．05或P〈0．01）。伤后7d，2组大鼠葡萄糖注射前后血糖水平总体及各时相点血糖水平均相近（P值均大于0．05）。（2）烫伤组大鼠血糖AUC总体明显高于假伤组（处理因素主效应，F：337．87，P〈0．01）。伤后6h及3d，与假伤组[（1019±32）、（1003±72）mmol·min·L-1]比较，烫伤组大鼠血糖AUC均有显著升高[（1501±163）、（1132±67）mmol·min·L-1，P值均小于0．001]。伤后7d，2组大鼠的血糖AUC相近（P〉0．05）。烫伤组大鼠伤后3、7d血糖AUC均显著低于伤后6h（P值均小于0．001）。（3）烫伤组大鼠胰岛内3项指标水平总体均明显低于假伤组（处理因素主效应，值分别为135．17、24．75和39．35，P值均小于0．01）。2组大鼠伤后6h胰岛内3项指标水平无明显差异（P值均大于0．05），而烫伤组大鼠伤后3、7d胰岛内3项指标水平[0．47±0．05、0．51±0。07，（0．032±0．008）、（0．037±0．008）mm2，（303±64）、（341±58）个]显著低于假伤组[0。63±0．05、0．64±0．06，（0．043±0．011）、（0．044±0．012）mm2，（398±112）、（387±90）个，P〈0．05或P〈0．01]。烫伤组大鼠伤后3、7d胰岛内3项指标水平均显著低于伤后6h（P〈0．05或P〈0．01）。结论大鼠严重烫伤后，胰岛B细胞数量减少、胰岛素分泌功能下降，可能是以高血糖为主要表现的糖代谢障碍发生的重要原因之一。

摘要：目的研究重度烧伤小鼠脾脏凝溶胶蛋白（GSN）含量和mRNA表达及T淋巴细胞增殖活性的变化，选择GSN的最佳干预时间。方法取80只雄性BALB/c小鼠，按随机数字表法分为假伤组和烧伤组，每组40只。烧伤组小鼠造成背部15%TBSAⅢ度烫伤（下称烧伤），伤后即刻皮下注射生理盐水1 mL，背部涂适量碘伏防治感染，每日1次。假伤组小鼠致假伤，伤后不补液、不外涂碘伏。分别于伤后0（即刻）、8、24、48、72 h，每组各取8只小鼠，无菌留取脾脏，噻唑蓝比色法检测脾脏T淋巴细胞增殖活性，ELISA法检测脾脏组织中GSN含量，实时荧光定量RT－PCR法检测脾脏组织中GSN mRNA表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果（1）2组小鼠伤后0 h的脾脏T淋巴细胞增殖活性无明显差异（P〉0.05），假伤组小鼠伤后8、24、48、72 h脾脏T淋巴细胞增殖活性显著高于烧伤组（P值均小于0.05）。假伤组小鼠伤后各时相点脾脏T淋巴细胞增殖活性无明显差异（F＝0.756，P〉0.05）；烧伤组小鼠伤后8 h脾脏T淋巴细胞增殖活性为0.12±0.04，显著低于组内伤后0、24、48、72 h的0.73±0.07、0.56±0.07、0.51±0.09、0.59±0.07（P值均小于0.05）。（2）2组小鼠伤后0 h脾脏组织中GSN含量无明显差异（P〉0.05），假伤组小鼠伤后8、24、48、72 h脾脏组织中GSN含量显著高于烧伤组（P值均小于0.05）。假伤组小鼠伤后各时相点脾脏组织中GSN含量无明显差异（F＝1.083，P〉0.05）；烧伤组小鼠伤后8 h脾脏组织中GSN含量为（11.9±2.6）pg/mg，显著低于组内伤后0、24、48、72 h的（37.7±2.9）、（19.9±4.0）、（24.1±4.1）、（24.6±4.0）pg/mg（P值均小于0.05）。（3）2组小鼠伤后0 h脾脏组织中GSN mRNA表达量无明显差异（P〉0.05），假伤组小鼠伤后8、24、48、72 h脾脏组织中GSN mRNA表达量显著高于烧伤组（P值均小于0.05）。假伤组小鼠伤后各时相点脾脏组织中GSN mRNA表达量无明显差异（F＝0.413，P〉0.05）；烧伤组小鼠伤后8 h脾脏组织中GSN mRNA表达量为0.307±0.064，显著低于组内伤后0、24、48、72 h的0.944±0.023、0.625±0.091、0.744±0.104、0.821±0.072（P值均小于0.05）。结论重度烧伤可导致小鼠脾脏GSN含量及mRNA表达、T淋巴细胞增殖活性显著下降，且三者均是在伤后8 h降至最低，可选择伤后8 h之前作为重度烧伤后GSN的最佳干预时间。

摘要：目的:利用RNA干扰(RNAi)技术在体外干扰小鼠B16黑素瘤细胞Foxp3基因表达,探讨RNA干扰用于黑素瘤治疗的可行性。方法:针对Foxp3基因设计小干扰RNA(siR-NA),构建起短发夹状RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并转染小鼠B16细胞,在体外诱导RNA干扰。分别采用Westernblot和RT-PCR检测Foxp3基因的表达情况;ELISA检测TGF-β1、TGF-β2和IL-10等细胞因子的变化;将干扰后的小鼠B16细胞与CD4+CD25-T淋巴细胞共培养,CCK8法检测CD4+CD25-T淋巴细胞增殖能力。结果:通过Foxp3 shRNA的转染,可实现对B16细胞Foxp3表达的沉默,可下调肿瘤细胞对CD4+CD25-T淋巴细胞增殖抑制的能力,并且下调TGF-β1、TGF-β2和IL-10等细胞因子的表达,尤其是TGF-β2的表达。结论:RNA干扰可抑制小鼠黑素瘤细胞靶基因Foxp3的表达及细胞增殖,并对CD4+CD25-T淋巴细胞增殖抑制的能力减弱,同时减弱抑制性细胞因子的分泌,为黑素瘤的基因治疗提供了新思路。

摘要：目的 观察应用股二头肌长头肌瓣联合半V形股后筋膜皮瓣修复坐骨结节压疮的临床疗效. 方法 选择2004年4月-2010年6月2家笔者单位收治的坐骨结节深度压疮患者8例共10处创面,压疮范围2cm×2 cm～6 cm ×4cm.设计股二头肌长头肌瓣和半V形股后筋膜皮瓣进行修复,其中股后筋膜皮瓣大小为10 cm ×6 cm ～13 cm×8 cm.统计术后皮瓣成活情况,并进行远期随访. 结果 术后皮瓣全部成活,其中9处压疮切口术后顺利愈合；1处因皮瓣下积液引流部位形成窦道,经换药治疗于术后25 d愈合.随访7～34个月,7例患者的皮瓣质地柔软,外形良好,无破溃；1例患者术后9个月压疮复发,再次利用该皮瓣修复得以愈合. 结论 该联合皮瓣手术操作简单、损伤小、抗压效果好、可重复利用,是修复坐骨结节压疮的一种新方法.

摘要：目的大面积深度烧伤治疗的半数致死面积(LA50)已达98%,但由于伤面切除植皮后无汗液分泌,使患者的生活质量显著下降。目前,由于烧伤治疗技术已趋成熟,存活者日益增多,因而汗腺再生的问题必须解决,而通过干细胞移植诱导再生汗腺是其中的重要方法之一。方法分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)和人汗腺细胞(SGCs)并进行鉴定。通过共培养方式促进骨髓间充质干细胞向汗腺细胞分化。将具有汗腺表型的干细胞局部移植于裸鼠烫伤脚掌,观察汗腺组织再生修复情况,结合碘-淀粉发汗试验检测汗腺功能以判定治疗效果。在动物实验初步证明转化的汗腺细胞能发挥修复汗腺功能后,选择2例烧伤自愿患者。1例患者双上臂背侧均有相似的烧伤后遗留的瘢痕,经发汗腺试验证明无汗液分泌。抽取其骨髓并切取小块正常皮肤分离培养骨髓间充质干细胞和汗腺细胞进行共培养,诱导骨髓间充质干细胞获得汗腺细胞表型,通过自行设计的方案将该细胞种植于右侧切除瘢痕处。创面愈合后治疗侧行发汗试验、汗液成分分析以及组织学检查。另1例为颏颈挛缩、瘢痕切除解除挛缩的患者,在其1/3的创面上种植诱导的汗腺细胞,2个月后进行发汗试验。结果通过共培养方式培养的骨髓间充质干细胞表达汗腺细胞特异性标志,可获得汗腺细胞表型。发汗试验和形态学观察证实将具有汗腺细胞表型的干细胞移植于裸鼠脚掌的创面后,能显著促进受损汗腺的修复与再生。人体移植试验表明,种植诱导的汗腺细胞后患者创面愈合部位呈现出汗功能,对照部位发汗试验阴性,形态学检测显示移植汗腺的真皮浅层有大量癌胚抗原(CEA)阳性细胞,结构类似正常汗腺组织。汗液成分分析结果显示移植处收集的汗液与正常皮肤处收集的汗液具有类似的pH值、渗透压和化学组分。第2例创面移植汗腺细胞后发汗试验也呈阳性。结论干细胞能够在体外成功诱导为汗腺细胞,移植后在创面能形成具有功能的汗腺。但在大面积烧伤患者早期切除焦痂后进行汗腺修复能否获此功效,尚待进一步研究。

摘要：目的通过检索《中华烧伤杂志》2000-2004年刊登的所有动物实验论文,以了解烧伤科医师科研设计的方法学现状。方法对《中华烧伤杂志》2000-2004年刊登的有关药物或对某种疾病治疗方法的动物实验论文进行逐页手检,并从样本大小、随机化方法、样本的选择、对照措施、组间基线可比性、评价指标、统计学处理等方面进行分析和评价。结果2000-2004年《中华烧伤杂志》共刊登论文1116篇,其中有关治疗方法的动物实验论文81篇(占文章总数的7．3％)。81篇中随机对照实验69篇(占动物实验论文的85．2％),在样本量估算、随机化方法的应用、统计学处理等方面尚存在某些不足。结论动物实验论文采用随机对照实验的较为普遍,但部分文章科研设计不够严谨。今后应进一步加强实验设计的科学性。

摘要：目的了解我国烧伤专业临床试验研究的现状,进一步提高论文的学术水平。方法按照循证医学(EBM)的标准,对《中华烧伤杂志》2000-2004年刊登的临床试验论文进行回顾性检索及综合分析,以评价其质量。结果临床试验论文共计89篇,其中随机对照试验(RCT)4]篇占 48．3％,临床对照试验(CCT)46篇占51．7％,RCT论文呈逐年增多趋势,而CCT论文波动较大。采用盲法试验的论文5篇,占5．6％;有明确纳入、排除标准的论文53篇,占59．6％;64篇论文未提供分组的基线资料比较情况,占71．9％;10篇论文在统计分析时仅给出了P值,未说明采取何种统计学方法,占11．2％;仅有2篇论文提及随访、失访情况,占2．2％,但未详细报道结果;10篇论文对不良反应进行了报道,占11．2％;对混杂干扰因素进行分析说明的论文有5篇,占5．6％;无一篇论文对样本含量的估计以及随机化方法进行说明。结论我国烧伤领域部分论文在科研设计、伦理学思考方面尚存在不足,有待进一步改进和提高。