摘要：目的结合微流控芯片环介导恒温扩增技术(LAMP),建立可同时检测粪便中8种肠道致病菌的微流控芯片LAMP检测方法,为感染性腹泻的临床诊断提供依据。方法根据8种肠道致病菌(志贺菌、沙门菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌、肠聚集性大肠埃希菌、肠侵袭性大肠埃希菌、肠致病性大肠埃希菌、肠产毒素大肠埃希菌)的特异目的基因分别设计微流控芯片LAMP引物,加入EvaGreen荧光染料,采用微流控芯片LAMP对8种肠道致病菌同时进行实时荧光监测;提取8种肠道致病菌的基因组DNA,对建立微流控芯片LAMP的特异度和灵敏度进行评价;制备模拟粪便样本对该技术的最低检出限进行评价。结果微流控芯片LAMP可实现8种肠道致病菌的特异性检测,对福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌、肠聚集性大肠埃希菌、肠侵袭性大肠埃希菌、肠致病性大肠埃希菌和肠产毒素大肠埃希菌的检测灵敏度可达100 CFU/mL;对模拟粪便样本中福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、副溶血性弧菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠产毒素大肠埃希菌的最低检出限均为100 CFU/mL;对空肠弯曲菌和肠聚集性大肠埃希菌的最低检出限为1000 CFU/mL。结论该实验建立的微流控芯片LAMP特异性好、灵敏度高、结果准确,可用于粪便中8种肠道致病菌的同步快速检测。

摘要：目的建立一种简单,快速的重组酶聚合酶核酸扩增技术检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法基于耶尔森氏菌的特异性序列设计引物及探针;通过对不同温度的检测来优化反应温度;通过对不同菌株的DNA模板进行检测评价该方法的特异性;通过对不同稀释浓度的样本DNA模板进行检测来确定灵敏性;通过模拟样品进行应用评价。结果基于鼠疫耶尔森菌的DNA腺嘌呤甲基化酶基因设计特异性引物和探针所建立的荧光重组酶聚合酶扩增方法,35℃反应20 min内可成功检出低至100个拷贝的鼠疫耶尔森菌基因,而且与其他菌无交叉反应,对模拟样品的检测准确性达到98.0%。结论重组酶聚合酶核酸扩增可广泛应用于简陋条件下鼠疫耶尔森菌的临床检测,促进鼠疫的防控。

摘要：目的对1例发育迟缓、智力低下伴头部发育异常的患儿进行染色体核型分析并验证异常染色体来源。方法5岁女性患儿于2014年因发育迟缓、智力低下来解放军总医院第一医学中心就诊。运用染色体核型分析技术、单核苷酸多态性微阵列技术检测异常核型,并设计特异性探针采用荧光原位杂交实验验证患儿的染色体核型。结果染色体核型分析结果为46,XX,del(18)(p11)[34]/46,XX,add(18)(p11)[16],短臂缺失的18号染色体与增加片段的18号染色体核型比例为34/16;SNP Array检测结果为arr 18p11.32p11.22(136,227-10,213,704)x1,显示该患儿18号染色体18p11.32-p11.22区段存在10 Mb片段的缺失,检测结果同时显示患者18p11.22-18qter有低比例的三体性嵌合;FISH检测结果为46,XX,.ishdel(18)(p11.2)(18pter-,18qter+,WCP18+)[166]/psudic(18)(p11.2)(18pter-,18qter++,WCP18+)[34],验证了染色体核型和SNP Array结果提示的异常染色体来源。结论患儿染色体核型为46,XX,del(18)(p11.2)[34]/46,XX,psudic(18)(p11.2)[16],为新生突变;患儿智力低下及发育异常可能是由2种异常核型共同作用所致,但并未表现出18p缺失综合征、18部分三体综合征临床症状中的严重缺陷,这可能是由嵌合性核型导致的;染色体核型分析结合SNP Array、FISH等技术能够更准确地鉴定异常染色体。