摘要：目的传统的检测CMVpp65抗原的方法是间接免疫荧光,操作麻烦,步骤较多,整个实验需要6个多小时,而且只能定性。需要寻找一种简便的可以定量的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。因此我们设计了流式的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。方法我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行了流式标记移植病人外周血中的WBC,操作步骤明显简便了,只需不到2 h就可完成检测,而且可以定量检测CMVpp65抗原阳性细胞。同时我们用荧光定量PCR检测病人尿中的CMV基因的拷贝数。结果流式检测阳性率高的标本,用间接免疫荧光方法检测也为阳性,同时流式检测强阳性的病人尿用荧光定量PCR检测到CMV基因,表明病人处于CMV病毒血症。结论我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行流式标记,成功检测了移植病人的CMVpp65抗原阳性细胞的百分比,新方法可以定量,与荧光定量PCR方法检测病人尿中的CMV基因的结果符合率较高,可以推广应用。

摘要：背景:四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型常用于抗肝纤维化药物的筛选和评价,但目前很少有四氯化碳诱导兔肝纤维化模型的报道。目的:建立家兔肝纤维化动物模型,并观察造模过程中动物的肝脏功能和组织病理学变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-12/2008-04在解放军成都军区昆明总医院实验动物中心完成。材料:40只普通级日本大耳家兔,雌雄各半,体质量1.75～2.25kg,用于建立家兔肝纤维化动物模型。方法:40只家兔采用随机数字表法分为实验组(n=30)和对照组(n=10)。实验组腹腔注射40g/L四氯化碳橄榄油溶液,对照组腹腔注射等量生理盐水。1～3周四氯化碳剂量为0.1～0.2mL/kg,根据动物的情况每周注射2次;3～6周四氯化碳剂量调整为0.3～0.4mL/kg;6～8周为0.4～0.5mL/kg。于注药后4,8,12周分别留取肝组织和血清标本,进行苏木精-伊红染色病理观察和生化检测。主要观察指标:实验家兔肝脏大体及病理学改变,静脉血生化指标的变化。结果:纳入日本大耳家兔40只,造模20d时,实验组家兔死亡4只,原因主要为急性肝坏死及对药物的耐受性差。40d时死亡1只;50d腹腔注射因药物误入血管死亡1只。①对照组家兔肝脏外观呈暗红色,病理切片示:肝小叶结构完整,肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。实验组8周时,肝脏呈暗紫色,表面有轻微粟粒样改变,病理切片示:肝细胞点状及点灶状坏死,汇管区炎症细胞浸润,呈早期纤维化症状。12周时,肝脏呈灰褐色,有较明显粟粒样改变。病理切片示:肝小叶结构破坏,肝索排列紊乱,肝细胞脂肪变性,间质纤维组织增生,有炎性细胞浸润,为明显肝纤维化症状。③家兔血生化指标随着注药时间的延长,白蛋白含量及白球蛋白比值逐渐下降,球蛋白、间接胆红素、直接胆红素逐渐升高,谷丙转氨酶、谷草转氨酶前期明显升高后期又有所下降。结论:长期给予四氯化碳可导致家兔的肝纤维化形成,并有较明显的阶段性变化。

摘要：背景:单侧肾切除联合阿霉素诱导的大鼠肾小球硬化模型常用于抗肾小球硬化药物的筛选和评价,但目前很少有此方法诱导兔肾小球硬化模型的报道。目的:建立家兔肾小球硬化动物模型,并观察造模过程中动物的肾脏功能和组织病理学变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-12/2009-05在解放军成都军区昆明总医院实验动物中心完成。材料:日本大耳家兔25只,雌雄各半,体质量1.75～2.25kg,用于建立家兔肾小球硬化动物模型,并随机分为正常组10只和模型组15只。方法:模型组30g/L戊巴比妥钠生理盐水溶液(1mL/kg)麻醉,开腹摘除左肾。正常组行假手术,不摘除肾脏,余与上同。手术1周后,模型组注射阿霉素5mg/kg,2周后注射阿霉素3mg/kg。正常组同步注射生理盐水。主要观察指标:于实验前、造模后4,6,8周对两组兔进行肾功能相关血液生化指标检测,并留尿液测24h尿蛋白量。于第2次注药后8周分别两组随机各取1只兔肾组织,进行病理观察。结果:①模型组肾脏略白,质地略韧,表面尚光滑。②模型组光镜下可见细胞外基质增生明显,系膜区扩张,肾球囊壁与肾小球毛细血管拌粘连,小管上皮变性甚至萎缩出现肾间质纤维化,间质炎细胞浸润,呈现弥漫性节段性肾小球硬化等病理特征。③与正常组家兔比较,模型组家兔总蛋白及白蛋白明显下降,三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、尿素氮、肌酐均显著升高,模型组家兔尿蛋白含量于实验第4周开始明显升高,在实验期间明显高于对照组,但在第8周逐渐趋向平台。④SPECT示:正常组肾小球总滤过率为92.6mL/min,模型组为33mL/min;可见模型组右侧肾脏肾小球滤过率明显下降。结论:单侧肾切除联合阿霉素导致家兔的肾小球硬化形成,并且肾功能及24h尿蛋白定量有较明显的阶段性变化。

摘要：背景:研究符合天然椎间盘生物学结构与功能的组织工程移植物,对退变椎间盘进行生物学功能重建,已逐步成为治疗椎间盘退变性疾病较理想的解决方案。目的:设计构建一种新型的组织工程纤维环支架材料。方法:以魔芋葡甘聚糖、纳米羟基磷灰石和胶原为原料,依次应用湿法纺丝、化学交联、冷冻干燥等技术构建一种全新的组织工程化纤维环支架,采用X射线衍射分析和傅里叶变换红外光谱仪对其进行定性成分分析,同时对其理化性能、生物力学性能及细胞相容性进行分析。结果与结论:魔芋葡甘聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原组织工程椎间盘纤维环支架呈三维立体多孔结构,孔径(425.8±47.3)μm,孔隙率为(73.4±5.6)%,吸水率为(718.6±24.3)%,具有与天然纤维环相似的抗压强度,具有良好的生物相容性,无细胞毒性。结果表明魔芋葡甘聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原组织工程椎间盘纤维环支架具有适宜的三维多孔结构、生物相容性、孔隙率、吸水率和生物力学强度。