摘要：背景:切应力可以直接介导内皮细胞表达一些编码与血管生成相关的细胞因子基因,血液的流体切应力对调节血管结构和功能具有重要的生物学作用。目的:观察流体层流切应力对人脑动静脉畸形血管内皮细胞增殖与原癌基因c-myc表达的影响。设计:随机对照的技术方法。单位:解放军沈阳军区总医院神经外科。对象:实验于2006-11/2007-02在解放军沈阳军区总医院全军神经医学研究所完成。选用2006解放军沈阳军区总医院神经外科SpetzlerⅡ-Ⅲ级20例脑动静脉畸形患者手术切除的人脑动静脉畸形新鲜标本,全部病例术前均经全脑血管造影证实。M199培养液(Gi1bco BRL),优质胎牛血清(HyClone),内皮细胞生长添加剂(ECGS;美国Sigma),CO2培养箱(美国Forma Scientific),细胞周期分析试剂盒(BD公司),流式细胞仪(FACS Calibur,BD公司),鼠抗人c-myc单克隆抗体(美国Santa Cruz公司),RT-PCR试剂盒(Promega)。方法:采用组织块贴壁法培养人脑动静脉畸形血管内皮细胞,按所受切应力大小将细胞分为4组:对照组、低切组、中切组和高切组。将培养的人脑动静脉畸形内皮细胞单层置于平板流动系统内,低切组、中切组和高切组细胞分别经低、中、高切应力作用8h,对照组切应力为0Pa。应用流式细胞术测定细胞增殖指数。检测c-myc蛋白表达。检测c-mycmRNA表达。主要观察指标:不同切应力作用下内皮细胞c-myc蛋白及mRNA表达和细胞增殖指数。结果:①细胞增殖指数:中切组和高切组内皮细胞增殖指数高于对照组(P<0.05,0.01)。②c-myc蛋白表达:c-myc免疫阳性表达随切应力增高而递增,各切应力组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05～0.01)。③c-mycmRNA表达:低切组和中切组内皮细胞增殖指数高于对照组(P<0.05)。结论:流体层流切应力能够在基因转录水平诱导c-myc表达,并可能通过激活c-myc基因表达而促进人脑动静脉畸形血管内皮细胞增殖。

摘要：背景:目前临床上应用的超声对比剂均是含有不同包膜材料和气体成分的微泡对比剂,微泡对比剂的出现使超声诊断技术得到了较大的发展。目的:探讨超声对比剂的材料学研究特点,及超声对比剂在临床疾病治疗中的应用。方法:超声对比剂是由气体微泡和外部包裹的膜物质组成,包膜材料主要分为白蛋白、大分子脂质体、多聚体和各种表面活性剂等。超声造影是通过增强背向散射信号来成像。超声对比剂研究的发展大致分为3个阶段,造影相关技术包括二次谐波、组织特异性显像、反相脉冲谐波成像、相干造影成像技术、对比脉冲序列、能量多普勒谐波成像、间歇谐波成像技术、编码谐波成像和超声造影三维成像。结果与结论:超声对比剂形式的不同主要是通过改变微泡包膜和气体的性质和设计来实现的。微气泡能够实现超声对比剂的显影作用,还可在药物传输上发挥功能。新型的微泡超声对比剂不仅可以提供血流灌注学信息,还可以通过靶向作用于病变组织,分析病变的发生机制,使微泡对比剂的诊断更准确。随着微泡对比剂材料学研究以及制备工艺完善,使超声对比剂具有良好的生物相容性。不仅可以用于各种状态下的特异性超声造影,还可以利用空化效应携带药物或治疗基因向目标组织转移释放。微泡造影技术具有治疗、诊断和超声成像的功能,是一种安全、高效、无创的诊断和靶向传输治疗手段。

摘要：背景:采取反义基因治疗技术控制血管内皮细胞生长因子基因表达,遏止血管生成,是脑血管外科中治疗人脑动静脉畸形的崭新课题。目的:观察血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸对人脑动静脉畸形血管内皮细胞增殖的抑制作用。设计:观察对比实验。单位:解放军沈阳军区总医院神经外科。材料:实验于2006-08/2006-12在解放军沈阳军区总医院的全军神经医学研究所完成。收集2006年解放军沈阳军区总医院神经外科18例脑动静脉畸形患者手术切除的完整人脑动静脉畸形新鲜标本。男12例,女6例;平均40岁。脑动静脉畸形按Spetzler分级:Ⅱ级10例,Ⅲ级8例。全部病例术前均经全脑血管造影证实。人脑动静脉畸形标本获取术前经患者或其家属知情并签同意书。内皮细胞生长添加剂(ECGS;美国Sigma),391型DNA自动合成仪(上海生工利用美国PE公司),厌氧培养箱(浙江产DY-1型),人血管内皮细胞生长因子酶联检测试剂盒购于北京TBD公司,进口分装,96E酶标仪(ERMA,INC)。细胞周期分析试剂盒(BD公司),流式细胞仪(FACSCalibur,BD公司)。方法:①实验过程:采用组织块贴壁法培养人脑动静脉畸形血管内皮细胞,实验用传至3代细胞,随机分成反义组、正义组和对照组,每组4瓶细胞。反义组、正义组分别采用人工合成血管内皮细胞生长因子正义、反义硫代脱氧寡核苷酸,经阳性脂质体包裹后转染体外培养的人脑动静脉畸形血管内皮细胞,对照组不予处理,将各组细胞置于37℃、体积分数0.95N2、0.05CO2厌氧培养箱分别孵育2,4和8h。②实验评估:测定细胞周期。测定细胞血管内皮细胞生长因子蛋白含量。检测细胞血管内皮细胞生长因子mRNA表达。主要观察指标:各组细胞缺氧不同时间点血管内皮细胞生长因子mRNA和蛋白表达及细胞增殖指数。结果:①血管内皮细胞生长因子mRNA表达:对照组细胞缺氧2,4,8h后血管内皮细胞生长因子mRNA水平高于缺氧前(P<0.05),反义组缺氧2,4,8h后血管内皮细胞生长因子mRNA水平低于对照组(P<0.05)。②血管内皮细胞生长因子蛋白含量:对照组缺氧2,4,8h后血管内皮细胞生长因子蛋白含量高于缺氧前(P<0.05),反义组缺氧2,4,8h后血管内皮细胞生长因子蛋白低于对照组(P<0.05)。③细胞增殖指数:对照组人脑动静脉畸形内皮细胞缺氧4,8h后细胞增殖指数(P<0.05)。反义组缺氧4,8h后低于对照组(P<0.05)。结论:缺氧可能在基因转录水平诱导血管内皮细胞生长因子表达,反义血管内皮细胞生长因子能够显著抑制缺氧诱导的人脑动静脉畸形内皮细胞血管内皮细胞生长因子基因表达和细胞增殖。