摘要：背景:颞叶癫痫的发病与海马神经元丢失死亡有关,但其海马神经元丢失的具体方式和详尽机制还不清楚,难以确定海马神经元癫痫样放电与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteine-containingASPartate-specificprotease,Caspase-3)激活及神经元凋亡的必然联系。目的:观察体外培养大鼠海马神经元癫痫模型中神经元凋亡及Caspase-3基因的表达情况。设计:开放性实验。单位:解放军第二军医大学长海医院神经外科,解放军第二军医大学长征医院神经外科。材料:实验于2002-06/2003-06在解放军第二军医大学神经外科实验室完成。选取出生24h内的SD大鼠10只,雌雄不拘。Caspase-3流式检测试剂盒购自美国BD公司,PCR引物由上海皓嘉公司合成。方法:①将24h内新生SD大鼠断头取脑,解剖出双侧海马,制备海马神经元癫痫样放电细胞模型。通过全细胞膜片钳对细胞模型放电情况进行检测。以培养8d并经无镁处理的神经元细胞作为癫痫样放电模型组,以培养8d但未经无镁处理的神经元细胞作为空白对照组,记录电位变化。②采用反转录-聚合酶链法克隆大鼠全长caspase-3cDNA,并加以标记;采用原位杂交和流式细胞术检测caspase-3基因表达和神经元凋亡情况。主要观察指标:①Caspase-3基因cDNA的克隆结果。②Caspase-3原位杂交检测结果。③细胞凋亡检测结果。结果:①反转录-聚合酶链反应扩增的产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳显示约800bpDNA片段区带,与预期值一致。DNA序列测定显示所得克隆的开放阅读框架长843bp。②杂交显示空白对照组海马阳性染色神经元少于10%,神经元突起饱满,形成广泛的突触联系。癫痫样放电模型组无镁处理3h后,染色阳性细胞明显增多;无镁处理12h后,有较多强阳性染色神经元,基本保持有神经元突起,但突起变得菲薄。③流式细胞分析显示,无镁处理6h后凋亡细胞开始明显增加,单位时间内凋亡细胞数不尽一致。结论:癫痫样放电可以启动caspase-3表达,继而介导神经元凋亡。

摘要：目的:探讨自体游离骨及组织工程技术在颅骨缺损修补中的应用。资料来源:应用计算机检索Pubmed1985-01/2006-02和ProQuest1995-01/2006-02期间的相关文章,检索词“cranialbonegraft,autologousboneflap,calvarialbonegraft,autogenousbonegraft,autograft,autotransplant,boneautograft,tissue-engineeredbonerepair,autologousbone,craniotomydefectrepair,cranioplasty。”限定语言种类为English。资料选择:筛除以上资料中非颅骨缺损的、非自体骨移植的、非自体骨组织修复的研究,剩余结果通过手工及光盘检索全文。资料提炼:共检索到88篇文献,内容涉及颅骨成型术、颅骨缺损、自体游离骨瓣、颅骨重建、颅骨修补、骨移植材料、组织工程等。删除重复文献55篇,纳入33篇。资料综合:修补材料与方法的选择是颅骨缺损修补手术成败的关键。自体骨移植材料修补颅骨缺损已在临床广泛应用,并随着组织工程技术与基因工程技术的发展,使颅骨骨移植向一体化骨整复方向发展。自体骨移植材料的应用进展:①常用自体游离骨瓣:包括胫骨、颅盖骨、肋软骨和肋骨、肩胛骨和胸骨和髂骨。②自体骨移植材料的选择:自体颅骨瓣为首选的修补材料,必要时可联合应用肋骨、髂骨修补缺损。③组织工程技术在颅骨修补术中的应用:大体可分为3个步骤:采集供体组织和分离成骨细胞;利用CT扫描资料构建基于图像分析设计组织工程支架;在预制的聚合体支架上种植细胞并移植于缺损区。结论:自体骨移植因无免疫反应,易于与受区骨整合,是颅骨重建的优先选择材料之一。组织工程技术在颅骨修补中的应用,有待于进一步深入研究。

摘要：背景:胶质原纤维酸性蛋白在神经损伤的发生发展过程中具有重要作用。目的:对胶质纤维酸性蛋白进行基因克隆,构建原核表达质粒并加以鉴定。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-09/11在上海市长征医院神经外科实验室完成。材料:中间载体pGEM-TEasy质粒购于Promega公司,原核表达质粒pGEX-4T-2由上海市长征医院神经外科实验室保存。方法:从人脑胶质瘤组织提取mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法扩增胶质纤维酸性蛋白序列并表达,然后与载体pGEX-4T-2连接,转化宿主菌BL21构建重组质粒,诱导表达后纯化,Western-blot鉴定。主要观察指标:总RNA鉴定结果,聚合酶链反应扩增产物分子质量的鉴定,重组表达载体的酶切鉴定,Western-blot鉴定。结果:抽提肿瘤组织总RNA后,电泳清晰可见rRNA28S、18S、5S3条带。且总RNA的A260nm/A280nm值为1.903。聚合酶链反应结果显示,在约1300bp左右有一条特异性条带,与预期的胶质原纤维酸性蛋白基因大小一致。重组表达载体的酶切鉴定及测序结果与GenBank的胶质原纤维酸性蛋白序列一致,经Western-blot验证为目的蛋白。结论:用双酶切、DNA测序与Western-blot的方法证实原核表达载体构建成功。

摘要：背景:越来越多恶性脑胶质瘤存在的基因缺陷被发现,恶性脑胶质瘤的基因治疗逐渐成为热点,胶质瘤的治疗可以靶向于脑胶质瘤的基因缺陷。目的:研究中国人脑星形胶质细胞瘤中表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)的表达,并探讨其临床意义。设计:以金标准为依据的诊断性试验的病例观察性研究。地点、对象和干预:人脑星形胶质细胞瘤新鲜手术标本37例,其中男22例,女15例,年龄11～69岁,平均37岁,均来自于1998/2000长征医院手术病例。样本包含术中所切除肿瘤组织及配对瘤周组织,按照Kernohan病理分级,分为低级别组(Ⅰ～Ⅱ级,12例)和高级别组(Ⅲ～Ⅳ级,25例)。人脑胶质瘤细胞株U87MG,U251MG,大鼠脑胶质瘤细胞株C6。应用免疫组化方法(Evision-HRP法)检测人脑星形胶质瘤标本(含配对瘤周组织)和体外培养的多株人和大鼠胶质瘤细胞系的EGFR表达。主要观察指标:EGFR在人星形细胞瘤、脑胶质瘤细胞株中的表达;EGFR表达与肿瘤病理分极的相关性。结果:人脑星形胶质瘤组织EGFR阳性率为70%(26/37),明显高于瘤周组织(32%,12/37),差异有显著性意义(χ2=10.602,P<0.01)。Ⅲ～Ⅳ级肿瘤EGFR阳性率为84%(21/25),Ⅰ～Ⅱ级为42%(5/12),高级别组肿瘤EGFR表达水平显著低于低级别组,差异有显著性意义。(χ2=6.955,P<0.