摘要：背景:葡聚糖结合蛋白B(gbpB)具有良好的免疫原性,但能否作为免疫防龋的候选基因疫苗有待研究。目的:观察gbpB真核表达质粒在哺乳动物细胞COS-7的表达情况。设计:设立对照的实验研究。地点和对象:实验在解放军第四军医大学口腔医学院牙体病科完成,对象为Pbs-gbpB质粒(本实验室构建)。干预:通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-gbpB,脂质体转染法将其转染至COS-7细胞。免疫组化SABC法检测,DAB显色。主要观察指标:转染后细胞胞浆、胞核着色情况。结果:pcDNA3.1(+)-gbpB质粒转染的细胞胞浆中呈棕黄色染色,胞核中无着色,pcDAN3.1(+)空载体转染的细胞胞浆及胞核无着色,空白对照组也无着色。结论:质粒pcDNA3.1(+)-gbpB转染COS-7后能够在细胞内翻译、表达,表达的蛋白质位于胞浆中,可与抗GbpB抗体特异性结合,具有抗原性,可作为基因疫苗。

摘要：目的通过对2个遗传性牙本质发育不全Ⅱ型家系的细胞外基质磷酸化糖蛋白(matrixextracellularphosphoglycoprotein,MEPE)、骨涎蛋白(BonesialoproteinⅡ,IBSP)进行突变检测,寻找Ⅱ型乳光牙致病基因,为临床诊断、基因治疗提供分子基础。方法在MEPE、IBSP基因内设计引物,经PCR和DNA测序对基因编码序列及其临近内含子进行突变检测。结果在MEPE基因发现c.1027G>A的碱基变化,该变化导致MEPE出现V330I的氨基酸变化,在IBSP发现c.797G>A的碱基变化,该变化导致IBSP出现G219R的氨基酸变化。两种变化在家系内与表型不存在一一对应关系。结论排除了MEPE、IBSP为两个DGI-Ⅱ型家系致病基因的可能,进一步缩小了候选基因范围,为最终的基因治疗提供基础。