摘要：背景:软骨损伤后难以自身修复,以活性软骨进行修复效果较好,但活性软骨的可靠来源尚未根本解决。目的:以3种不同方法体外保存成人鼻中隔软骨块的活性比较。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-06/2008-03在解放军第四军医大学唐都医院耳鼻喉科实验室及西京医院全军耳鼻咽喉-头颈外科中心实验室完成。材料:材料为临床常规手术中切除的成人正常鼻中隔软骨20块,按国务院2006年《医疗机构管理条例》规定,已与患者签订知情同意书。方法:将所取软骨,块剪成大小约15mm×10mm×2mm软骨块,分别置于4,-20,-80℃冷冻及RPMI-1640液于37℃培养保存,于保存24h,7,14,21d和30d时取样品。主要观察指标:以苏木精-伊红、AB/PAS及Masson三色染色和锥虫蓝排斥试验检测软骨活性。结果:用RPMI-1640培养液保存的成人鼻中隔软骨,在整个保存期中均能保持较好活性,软骨细胞活性率保持在80%左右。以-80℃冷冻保存7d及-20℃保存14d时,软骨基本失去活性,当4℃保存在21d时,软骨可保持较好活性,保存30d时,软骨活性明显降低。结论:与低温保存方法相比,用组织培养法保存成人软骨块能较好地保持其活性,有望为临床治疗提供一种取材方便、新型有效的软骨修复材料。

摘要：摘要背景:目前喉癌的治疗方法对于晚期复发和远隔转移病例难以获得满意效果,自杀基因联合免疫基因疗法可能能够长期提高肿瘤患者的生存率及生活质量。目的:构建含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)、重组人白介素2(rhIL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(rhTNF-α)不同组合融合基因的反转录病毒表达载体,寻找一个更有利于患者生存期内不易复发、根治效果良好、有利于社会、心理、生活质量基因治疗的理论基础。设计:前瞻性实验研究。地点和对象:实验在第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所完成,对象为HSV-tk、白介素2(IL-2)、TNF-α融合基因。干预:以RT-PCR制备人IL-2cDNA,分别以PCR方法扩增3目的基因,扩增产物纯化、测序后以定向克隆方法依次将各片段正向插入至pLXSN表达载体的多克隆位点间,以构建含不同融合基因的真核表达载体。主要观察指标:各目的基因PCR扩增结果,目的载体的酶切鉴定,PCR鉴定目的载体。结果:pL(TIT)SN经EcoRI,BamHI双酶切得到大小约2.07kb融合基因片段,pL(TI)SN经EcoRI,XhoI酶切得到大小约1.58kb融合基因片段,pL(TT)SN经EcoRI,BamHI双酶切得到大小约1.59kb融合基因片段,pL(TK)SN经EcoRI,BamHI双酶切得到大小约1.13kb片段。经限制性酶切分析及PCR方法鉴定,各插入基因及融合基因大小、?