摘要：背景：诱导因子及软骨微环境是影响骨髓基质干细胞成软骨分化及软骨形成的主要因素。目的：利用少量软骨细胞以共培养方式诱导骨髓基质干细胞体内成软骨。设计、时间及地点：2004-09/2005-03在解放军第四军医大学口腔医院病理教研室完成的随机对照动物实验。材料：选择清洁级新西兰兔15只用于细胞支架复合物的种植,随机分为混合细胞组、软骨细胞组、骨髓基质干细胞组,5只/组。取新生1-3d龄新西兰兔5只用于骨髓基质干细胞、软骨细胞的分离培养。聚羟基乙酸无纺网支架为上海易括公司产品,材料直径15μm,平均间距150-200μm,孔隙率97%,厚2mm。方法：混合细胞组将骨髓基质干细胞与软骨细胞按3：1混匀,调整细胞密度为6.0×10^10·L^-1,接种于经培养液预湿的塑形聚羟基乙酸5mm×5mm的支架上,然后在复合物周围滴加含胎牛血清的DMEM液培养1周。软骨细胞组、骨髓基质干细胞组的细胞密度调整为6.0×10^10·L^-1后同法接种于支架上。各组兔麻醉后于背部一侧皮下组织植入对应的细胞-支架复合物。主要观察指标：植入后第8周行新生软骨大体观察和苏木精-伊红、Masson三色染色。结果：各组细胞与聚羟基乙酸支架黏附情况良好。植入8周后,混和培养组和软骨细胞组均形成了成熟的软骨样组织,并基本保持复合物初始的大小和形状,两组新生软骨外观及组织学特征较接近。骨髓基质干细胞组在体内培养过程中未形成软骨组织,而是形成了纤维结缔组织。结论：骨髓基质干细胞与软骨细胞按3：1混合形成的微环境,能有效诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化,并促进骨髓基质干细胞的体内成软骨。

摘要：背景:前期实验已获得了最优的环孢素聚乳酸微球制备工艺,且证实微球具有明显的缓释性能,无明显毒、副作用。目的:观察同种异体原位气管移植后,局部置入环孢素聚乳酸微球对免疫排斥的抑制作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-02/04在解放军第二五二医院医院动物实验中心完成。材料:选取SD大鼠60只,按体质量配对后行同种异体气管原位移植。移植后按随机数字表法分为3组,即空白对照组、环孢素注射组及环孢素聚乳酸微球局部应用组,每组10只。方法:空白对照组不做特殊处理;环孢素注射组于气管原位移植后给予环孢素肌肉注射;环孢素聚乳酸微球局部应用组于气管原位移植后分别将10,30mg环孢素聚乳酸微球埋植于气管周围肌肉层内、外。主要观察指标:移植后4周麻醉后处死动物,对移植气管标本进行大体及病理学评估,计算上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞比值等指标,并进行组间比较。结果:①环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组大鼠全部存活至预杀期,空白对照组大鼠死亡1只。②移植后4周环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组的上皮积分均高于空白对照组(P<0.01);环孢素聚乳酸微球局部应用组高于环孢素注射组(P<0.01)。③移植后4周环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组的淋巴细胞计数均低于空白对照组(P<0.05,0.01);环孢素聚乳酸微球局部应用组低于环孢素注射组(P<0.05)。④移植后4周环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组无核软骨细胞与所有软骨细胞比值均低于空白对照组(P<0.05)。结论:同种异体气管原位移植后局部置入环孢素聚乳酸微球可以有效降低免疫排斥反应,对移植体的保护作用优于肌肉注射环孢素。

摘要：背景:血管生成素1具有抑制内皮细胞凋亡,促进血管出芽、迁徙、趋化,维持血管稳定,防止液体渗漏和减轻局部炎症等作用。应用载体携带血管生成素1基因表达血管生成素1治疗各种损伤正被广泛研究。目的:构建人血管生成素1(human angiopoietin 1,hAng-1)真核表达载体pcDNA3.1+-hAng1。设计、时间及地点:单一样本观察。实验于2007-10/2008-03在唐都医院中心实验室完成。材料:人血管生成素1基因为中国医科大学马腾博士赠送;pcDNA3.1+为Invitrogen公司产品;JM109感受态细胞为TAKARA公司产品。方法:血管生成素1基因片段经巢式聚合酶链反应方法扩增,血管生成素1基因片段及载体pcDNA3.1+分别经HindⅢ和XhoⅠ双酶切,之后经T4连接酶连接,构成pcDNA3.1+-hAng1。主要观察指标:①酶切鉴定。②合成载体测序鉴定。结果:所构建的pcDNA3.1+-hAng1载体经HindⅢ和XhoⅠ酶切,TBE胶电泳可得1.5kb的hAng1片段及5.4kb的pcDNA3.1+片段。合成载体送北京奥科测序,结果正确,与GenBank中AY121504一致。结论:利用基因重组和双酶切构建出了pcDNA3.1+-hAng1,为进一步研究其功能和活性奠定了基础。