摘要：背景:通过测序进行序列分析是发现基因突变的直接手段,转化生长因子β1(TGF-β1)作为细胞最主要的生长调控因子,参与多项生理和病理过程。该基因的突变对于所在细胞的生物学行为改变可能具有重要意义。目的:分析人成骨肉瘤细胞系中TGF-β1成熟肽基因序列,探讨TGF-β1基因突变存在的可能性及其机制,为肿瘤及骨软骨损伤的基因治疗提供新思路。设计:非随机非对照实验研究。地点和对象:实验在第四军医大学唐都医院解放军骨科中心骨肿瘤研究所完成,对象为人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607(本室建立)。干预:提取人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中的总RNA,参照Genebank数据库中的已知序列设计合成引物,采用RT-PCR法扩增TGF-β1成熟肽基因,克隆入质粒pcDNA3.0进行序列测定和分析。主要观察指标:将多次测序所得的TGF-β1成熟肽基因序列与Genebank数据库中的已知序列进行比较,分析恒定差异。结果:发现人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中TGF-β1基因存在两处点突变,其中第1788位突变引起相应多肽的结构改变。结论:人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中存在TGF-β1基因突变,其可能在病理机制中起重要作用,具有强功能活性突变子的获得对于骨软骨损伤的修复有重要意义。

摘要：背景:有研究者提出,脑内存在少量正常的神经干细胞能够向肿瘤组织迁移。这需要对从胶质瘤体外培养得到的肿瘤干细胞与正常的神经干细胞进行鉴别。目的:从人脑胶质瘤组织中分离脑胶质瘤干细胞进行体外培养,并对其干细胞特性加以鉴定,观察脑肿瘤干细胞的生长特性。设计、时间及地点:细胞学观察实验,于2007-02/12在解放军第四军医大学细胞工程研究中心完成。材料:7份肿瘤标本来源于胶质瘤患者,间变性星形细胞瘤标本3份,多形性胶质母细胞瘤标本4份。方法:将获取的胶质瘤细胞置于含2%B27、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、左旋谷胺酰氨、胰岛素、青霉素和链霉素生长因子的无血清DMEM/F12培养基中,重新悬浮为单细胞悬液,以1×108L-1接种于含有B27、表皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基中培养分离培养肿瘤干细胞球。取第5代的肿瘤干细胞球,离心后除去原培养基,用含有体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养基接种于放置有多聚赖氨酸包被盖玻片的小平皿中,观察肿瘤干细胞分化情况。主要观察指标:利用细胞免疫荧光及组织免疫组织化学法检测脑肿瘤干细胞在细胞培养或组织切片中CD133及巢蛋白表达。结果:在胶质瘤中存在一定量的细胞能在无血清培养基中存活并悬浮生长,并增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球,细胞核较大,核质比例高,具有肿瘤细胞的特性,与原肿瘤组织标本的苏木精-伊红染色比较,肿瘤干细胞分化后的子代细胞中大部分与胶质瘤细胞相似。原代及传代脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物巢蛋白和CD133。结论:人脑胶质瘤中存在一定量的肿瘤干细胞,并能在体外将其分离培养,能够自我更新增殖、诱导分化,表达神经干细胞标志物CD133。

摘要：背景:肢体负压治疗周围动脉闭塞性病变,具有方便、安全、无创伤和改善疼痛症状的作用。前列腺素E1可直接松弛血管平滑肌,对神经痛有良好的止痛效果。目的:观察肢体负压对周围动脉闭塞性病变模型犬中枢神经系统感觉神经纤维中前列腺素E1免疫反应阳性神经纤维的影响。设计:随机对照的动物实验。单位:南方医科大学附属珠江医院肿瘤中心,解放军第四军医大学西京医院普外三科。材料:实验于2003-04/2004-05在解放军第四军医大学西京医院动物实验室完成。健康成年杂种犬17只,随机数字表法随机分为3组,治疗组10只、非治疗组5只和正常对照组2只。方法:治疗组和非治疗组均将动物制作左后肢缺血模型,治疗组在模型制作后14d开始行患肢负压治疗,压力为-12kPa,持续15min,1次/d,连续10d;非治疗组不做负压治疗。正常对照组不干预。主要观察指标:各组均于实验开始后24d将动物麻醉后处死,切取L1～L5的脊髓及背根神经节,3组均行脊髓及背根神经节免疫组化染色,检测前列腺素E1免疫反应阳性纤维平均灰度值。结果:犬17只全部进入结果分析。非治疗组、治疗组和正常对照组脊髓前列腺素E1免疫反应阳性纤维平均灰度值分别为75.23±4.3,43.22±3.7,22.00±5.8;背根神经节前列腺素E1免疫反应阳性纤维平均灰度值分别为67.12±2.3,40.08±3.8,27.64±2.7,各组比较差异显著(P均<0.01)。结论:周围动脉闭塞性疾病发病后,远端肢体脊髓及背根神经节中的前列腺素E1免疫反应阳性神经纤维数量明显增多,可能是机体的一种自身保护机制。肢体负压疗法可缓解肢体疼痛,并能减少肢体动脉闭塞性病变伤害性刺激的传入。