摘要：目的　了解慢性髓细胞白血病(CML)基因表达谱的规律,并对在CML中特异性高表达的一个新基因进行克隆、分析 与鉴定。方法　应用基因表达谱芯片技术,比较CML患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)基因的表达差异。检索核苷酸序列 数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序列数据库(SwissProt),对差异表达的基因进行生物信息学分析,与已知功能基因序列进行同源 性比较。根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新基因序列,据此设计并合成该基 因序列的特异性引物,提取CMLPBMC的总RNA,以RT-PCR技术扩增获得该新基因的全长序列,并对克隆的基因及其编码产物的 序列进行分析。结果　在CML患者PBMC中克隆一个新的基因,经测序证实,其编码序列全长为1872个核苷酸(nt),编码产物由 624个氨基酸残基(aa)组成,命名为CMLAP。在GenBank中注册,注册号为AY762229。结论　基因表达谱芯片技术与生物信息学 技术相结合,发现并鉴定、克隆了在CML中高表达的新基因CMLAP,为进一步研究CML发生发展的分子生物学机制奠定基础。

摘要：目的观察角质细胞生长因子受体（KGVR）腺病毒表达载体在大鼠急性肺损伤前后对肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道表达的促进作用，从而验证基因治疗急性肺损伤的效果。方法将雄性SD大鼠40只分成4组：正常对照组（n=8），致伤对照组（n=10），正常转基因组（n=10），致伤转基因组（n=12）。用脂多糖（LPS）造成急性肺损伤模型，以肺组织明显肿大病变为制模成功标准。正常转基因组和致伤转基因组均通过大鼠尾静脉注射KGFR基因的腺病毒表达载体应用液1mL，72h后致伤转基因组和致伤对照组分别通过大鼠尾静脉以5mg／kg注射LPS，正常转基因组和正常对照组则注射等量的生理盐水。过48h后，断头处死所有实验组大鼠，取肺组织进行实验。通过免疫组化和免疫电镜检测各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道的表达情况。数据采用完全随机区组设计的方差分析，行LSD-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道表达水平（免疫组化）由高到低依次为：正常对照组（PU值=47．7±3．33），正常转基因组（PU值=46．9±5．21），致伤转基因组（PU值=29．19±4．11）和致伤对照组（PU值=5．1±2．3）；致伤转基因组的钠离子通道表达水平低于正常转基因组（t=9．134，P〈0．001）和正常对照组（t=10．601，P〈0．001），但明显高于致伤对照组（t=16．466，P〈0．001）。结论KGFR腺病毒表达载体转基因效果明显，能够在LPS致伤情况下有效促进钠离子通道的表达，缓解肺泡腔内钠水潴留，达到转基因治疗肺损伤的效果。

摘要：目的　建立含有铜绿假单胞菌外毒素A基因DNA片段的克隆株。方法　根据已报道的序列设计铜绿假单胞菌外毒素A基因的特异引物 ,用PCR方法从标本扩增出预期大小的DNA片段 ,并将该片段纯化后与T载体连接 ,转化到大肠埃希菌 ,筛选出含有插入片段的克隆。结果　阳性克隆株经DNA序列测定 ,证实与已报道的铜绿假单胞菌外毒素A基因DNA序列 ,在399个碱基中仅有 3个碱基不同 ,但编码的氨基酸完全一致。结论　成功构建含有铜绿假单胞菌外毒素A基因的克隆 。