摘要：目的构建针对细胞周期素D1(cyclinD1,由CCND1基因编码)的shRNA表达载体,筛选出有效序列,观察其对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法设计针对cyclinD1基因编码区的3条寡核苷酸链,体外退火后克隆入干扰载体Pgenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。以脂质体法将空载体Pgenesil-1-K和3个重组质粒Pgenesil-1-CCND11、Pgenesil-1-CCND12、Pgenesil-1-CCND13分别导人549肺腺癌细胞,48h后用Real time PCR和Western blotting技术检测各实验组肺腺癌细胞内cyclin D1 mRNA及蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞周期观察构建的载体对A549细胞增殖的影响。结果经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒中已插入了目的基因片断。转染cyclin D1-shRNA的A549细胞48h后测定cyclin D1 mRNA和蛋白含量,以Pgenesil-1-CCND13抑制cyclin D1 mRNA及蛋白表达效果最为有效,其抑制率分别为62%和60%,而且它能抑制A549细胞的增殖。结论成功构建了针对cyclin D1的RNA干扰表达载体Pgenesil-1-CCND11、Pgenesil-1-CCND12、Pgenesil-1-CCND13,Pgenesil-1-CCND13能有效抑制cyclin D1在A549细胞中的表达,并抑制A549的增殖,为进一步应用于肺腺癌的治疗实验研究奠定了基础.