摘要：旨在对人白细胞介素-4(hIL-4)上、下游序列进行优化设计,提高在原核系统中的表达量,并对表达的包涵体进行复性研究提高复性率。利用B ioSun的RNA二级结构预测模块辅助设计hIL-4起始密码子(AUG)上、下游的序列,使局部二级结构的自由能满足高表达要求;根据pBV220载体和原核系统的特点优化引物序列提高hIL-4原核表达量。优化hIL-4包涵体复性条件和方法,提高复性率和生物活性。结果显示,成功构建了pBV220/hIL-4高效表达载体,原核表达的重组人IL-4占细菌总蛋白的35%以上,明显高于优化前表达量;经过复性研究hIL-4包涵体复性率可达到15%以上,生物活性鉴定发现,纯化的hhIL-4蛋白的比活等同或高于国外同类产品。影响原核表达的条件较多,对表达序列的优化设计可以大大提高蛋白的表达量。针对人IL-4基因序列的优化设计提高了人IL-4基因的表达,复性方法的改良提高了复性率和生物活性。

摘要：目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值。方法根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSETB中,构建重组质粒Rv0057/pET30aSETB和Rv1352/pET30aSETB。用NheⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv1352/pET30aSETB,SpeⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv0057/pET30aSETB,将回收的Rv1352基因片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒中,构建重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的包涵体蛋白经***蛋白纯化试剂盒纯化后,以其作为抗原建立化学发光酶免疫分析法,检测患者血清中抗结核抗体,并与市售***抗体诊断试剂盒和痰涂片法进行比较。结果构建的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB的核苷酸序列与设计序列完全一致;表达的重组融合蛋白Rv0057-Rv1352相对分子质量约为30 500,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组融合蛋白的浓度为1.6 mg/ml,纯度为95%;以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测患者血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性分别为66.70%和90.00%,而市售***抗体诊断试剂盒的灵敏度和特异性分别为80.00%和63.33%;30例活动性肺结核患者经痰涂片检测,灵敏度为20.0%,化学发光酶免疫分析法检测灵敏度为66.7%,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功制备了*** Rv0057-Rv1352融合蛋白,以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测抗结核抗体具有较高的灵敏度和特异性,在结核病血清学快速诊断方面具有广阔的应用前景。

摘要：目的构建smad2特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,并检测肿瘤细胞中其对smad2基因表达的干扰效果。方法根据smad2基因序列设计合理的smad2 siRNA,并将合成的寡核苷酸序列克隆到pSliencer 2.1-U6 neo载体中,转化大肠杆菌DH5α;挑取阳性菌落进行质粒酶切和序列分析;将构建正确的smad2 siRNA重组质粒转染,或与带Flag标签的smads真核表达载体共同转染293T细胞或HeLa细胞,收集细胞裂解物,Westem印迹检测siRNA的干扰效果。结果正确构建了smad2 siRNA重组质粒,对smad2表达的特异性干扰效果可达70%以上。结论成功构建了smad2 siRNA载体,为进一步探讨smad2在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。

摘要：目的:在原核系统内获得高表达的人血小板衍生生长因子BB(PGDF-BB),并对形成的包涵体进行复性。方法:对PGDF-BB核酸编码序列进行优化,构建pET-22b-PGDF-BB表达载体,以提高PCDF-BB的表达量;优化PGDF-BB包涵体复性条件,提高蛋白复性率和生物活性。结果:构建了pET-22b-PGDF-BB高效表达载体,原核表达的重组人PGDF-BB占细菌总蛋白的25%,PGDF-BB包涵体复性率达到15%。结论:对表达序列的优化设计可显著提高蛋白的表达量,复性方法的改良提高了蛋白的复性率和生物活性。

摘要：目的调查复治肺结核既往史信息,为国家制定和调整复治肺结核患者防治政策提供依据。方法使用统一设计的调查问卷,收集2010年9月11-21日期间在北京某两家结核病专科医院经所有住院的134例复治肺结核病患者相关信息,包括患者的基本信息、首次求医行为、首次诊断和治疗等内容并进行整理分析。结果与结核病专科医院等其他机构相比,首次就诊、确诊机构及治疗都是县级以上综合医院比例最高分别为55.22%(74/134)、61.19%(82/134)及53.73%(72/134),首次检查痰涂片检出率为63.43%(85/134);首次治疗个体化方案和标准化方案分别为92.53%(124/134)及7.47%(10/134);有28.36%(38/134)的患者在治疗期间中断治疗,55.26%(21/38)的患者治疗中断原因是自认为治愈而中断治疗;35.82%(48/134)的患者发生了不良反应,因不良反应中断治疗的患者为26.32%(10/38)。结论复治肺结核患者首次就诊转诊不到位,诊疗不规范,应加强多部分合作对转诊工作进行监督,规范诊疗,加强服药监督,提高患者治疗依从性,减少治疗中断,从而减少耐药及提高治愈率。

摘要：目的了解住院肺结核患者的结核病防治知识知晓现状，为更有效地开展住院肺结核患者健康教育提供依据。方法使用统一设计的调查问卷，对于2010年9月11～21日期间在北京市某结核病专科医院确诊后所有住院的369名结核病患者进行面对面调查，对结核病的知晓情况进行分析。结果共调查369名住院肺结核患者，结核病防治知识信息总知晓率为51．85％，对6条结核病防治信息全部知晓的患者为4．61％；文化水平为文盲的患者信息条目总知晓率最低（28．49％），大专、本科及以上最高（58．63％），不同文化程度患者知晓率差异有统计学意义（P〈0．05）；国家机关及事业单位工作人员信息条目总知晓率最高为63．81％，农民最低为43．02％；住院前听说过结核病的知晓率最高为78．59％：咳嗽、咳痰，或痰中带血丝，应怀疑得了肺结核的知晓率最低仅为15．45％。结论结核病患者知晓率较低，应加强政府承诺及医务人员培训，充分利用人际传播及大众传播等各种传播方式，加大宣传力度，有针对性地进行健康教育，提高知晓率。

摘要：目的了解住院肺结核患者的结核病防治知识知晓现状,为更有效地开展住院肺结核患者健康教育提供依据。方法使用统一设计的调查问卷,对于2010年9月11～21日期间在北京市某结核病专科医院确诊后所有住院的369名结核病患者进行面对面调查,对结核病的知晓情况进行分析。结果共调查369名住院肺结核患者,结核病防治知识信息总知晓率为51.85%,对6条结核病防治信息全部知晓的患者为4.61%;文化水平为文盲的患者信息条目总知晓率最低(28.49%),大专、本科及以上最高(58.63%),不同文化程度患者知晓率差异有统计学意义(P<0.05);国家机关及事业单位工作人员信息条目总知晓率最高为63.81%,农民最低为43.02%;住院前听说过结核病的知晓率最高为78.59%;咳嗽、咳痰,或痰中带血丝,应怀疑得了肺结核的知晓率最低仅为15.45%。结论结核病患者知晓率较低,应加强政府承诺及医务人员培训,充分利用人际传播及大众传播等各种传播方式,加大宣传力度,有针对性的进行健康教育,提高知晓率。

摘要：背景与目的 Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor ofapoptosis protein,IAP)家族的成员,在多种肿瘤组织中高度表达而在终末分化细胞中极少表达,因此可以作为癌症治疗的理想靶点。本研究旨在通过构建Survivin基因shRNA的慢病毒质粒并干扰肺癌细胞A549中Survivin的表达,分析其对细胞增殖的影响。方法设计Survivin干扰靶序列,构建重组质粒;将pLL3.7-Survivin转染293T细胞后利用Hela细胞检测病毒的滴度并感染A549细胞,应用RTPCR和Westernblot检测干扰效果;MTT与流式细胞术分析其对细胞增殖的影响。结果本研究成功构建了重组质粒;重组质粒可抑制A549细胞中Survivin基因的表达;细胞受阻于G_2/M期。结论本研究构建的重组质粒可抑制Survivin基因的表达并影响细胞的增殖,其为研究RNAi介导的肺癌基因治疗打下基础。