摘要：目的构建小鼠白细胞介素-12的融合基因,并进行初号表达。方法通过重叠序列引物的设计与多聚酶链反应(PCR)技术,将小鼠IL-12的40kDa多肽链基因与35kDa多肽链基因,以甘氨酸接头(Gly4Ser)3序列连接成为融合蛋白编码基因,构建融合蛋白表达载体,转染小鼠成纤维细胞SVT2,表达具有生物学活性的融合蛋白型IL-12。结果构建的小鼠IL-12表达载体经测序无突变发生。以G418筛选转染的SVT2细胞,获得数十个抗性细胞克隆,测定其IL-12生物学活性,分泌量达52.1～112.6pg/ml。表达的融合型小鼠IL-12具有生物学活性。

摘要：以乙型肝炎病毒 (HBV)前C/C基因异质性来探讨在慢性感染者体内是否存在HBV准种。以中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 4例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV前C/C基因序列 ,克隆入pGEMTeasy载体 ,每例患者挑选 5个克隆测序以比较病毒的变异程度。测序结果发现同一患者前C/C基因碱基序列之间的同源性大于 98% ,但存有G83→A替换、C抗原内部缺失、移框突变等多种变异类型。结果提示 ,HBV长期携带者体内有HBV准种共存 ,推测前C/C区的多种变异可能与感染慢性化有关。

摘要：探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组异质性及其生物学意义。以已知HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 2例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列 ,克隆入pGEMTeasy质粒 ,随机挑选克隆进行DNA测序并加以比较。测序结果发现 ,来源不同的 5株HBV全基因组核苷酸序列的一致率为 93 6 % ,不同克隆的 4个开放读码框架长度有明显区别 ,氨基酸序列中存有移框、缺失、替换等多种变异类型。说明来源于同一患者的HBV基因组序列之间存在有较明显的变异现象 ,在患者体内构成了准种群。

摘要：干扰素α(IFNα)的应用是目前国际上公认的丙型肝炎治疗药物,但其疗效仍不十分令人满意。随着丙肝病毒(HCV)以及HCV与肝细胞之间相互作用的分子生物学机制的阐明,将有助于抗HCV基因治疗新方案的设计,标志着抗病毒治疗的一个重要研究方向。

摘要：目的　报告乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg) /表面抗体 (抗 -HBs)同时阳性患者血清中S区编码碱基序列及其氨基酸序列的变异特点。方法　以adr亚型的HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 2例HBsAg/抗 -HBs均阳性的患者体内扩增HBV全S基因片段 ,克隆入pGEMTasy质粒 ,DNA测序确定病毒的变异特点。结果　测序结果发现双阳患者与HBsAg阳性患者血清中的HBV全S基因比较 ,核苷酸序列有 4个核苷酸位点 (0 3% )的替换突变 ,表面抗原氨基酸序列无特异性替换突变 ,但HBV多聚酶的间隔区氨基酸序列有 3个位点的特异性替换突变。结论　HBV长期携带者体内有HBV准种共存 :HBsAg与抗 -HBs同时阳性的原因不能归因于病毒的变异 。

摘要：目的:应用基因芯片技术,对乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)聚合酶P结构域蛋白/逆转录酶(PR)的基因表达谱进行分析,探索PR对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能。方法:设计并合成PR基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增PR蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的PR编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDNA3. 1(-) PR。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3. 1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析。结果:基因芯片技术所检测的1 152个基因表达谱的筛选中, 79条基因表达水平上调, 90条基因表达水平下调。结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HBVDNA聚合酶PR转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明PR蛋白可能的分子生物学机制提供依据。

摘要：目的　通过对乙型肝炎病毒 (HBV)前S2基因序列的研究 ,证实HBV在慢性感染者中以准种状态存在 ,并对前S2序列异质性进行初步的阐明。方法　以中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性PCR引物 ,自 5 1例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV前S2基因序列 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术展示缺失突变 ,随机选择克隆测序 ,确定病毒的变异程度。结果　聚丙烯酰胺凝胶电泳结果发现 ,5 2 9% (2 7/ 5 1)患者血清中可获得 2或 3条扩增条带 ;测序结果发现前S2基因序列存在缺失突变高发区 ,氨基酸序列分析示缺失突变主要位于前S2编码蛋白的氨基端。结论　HBV前S2序列内有一缺失高变区 ,并在患者体内表现为多种变异形式 ;氨基端附近的变异可能影响中和抗体的识别作用。结果提示HBV慢性携带者体内有HBV准种共存。

摘要：目的　以乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)变异来探讨HBV准种的存在意义。方法　设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBVCP序列 ,克隆入pGEMTeasy质粒 ,随机挑选 37个克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果　测序发现HBVCP序列是变异的高发区 ,在直接重复序列 (DR)I上游存有一缺失突变高发 (48 7% ,18/37)区 ,缺失突变与替换突变在TATA样盒TA2、TA3区发生率较高 ,而TA4极为保守。结论　CP区内有一缺失高变区 ,TA2、TA3的变异影响前C蛋白的表达 ,但该区的变异不影响前基因组RNA的转录。结果提示 。

摘要：目的　应用基因芯片技术 ,检测乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)反式激活基因XTP1的表达对肝母细胞瘤细胞系HepG2基因表达谱的影响 ,进一步阐明XTP1蛋白可能的分子生物学功能。方法　设计并合成XTP1基因序列特异性的引物 ,应用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增XTP1基因片段 ,以常规的分子生物学技术将获得的XTP1编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定 ,构建真核表达载体pcDNA3 1(-)_XTP1。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取mRNA ,逆转录为cDNA ,与转染空表达载体pcDNA3 1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果　构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定 ,证实准确无误。提取高质量的mRNA ,逆转录为cDNA ,进行cDNA芯片分析。在 115 2个基因表达谱的筛选中 ,发现有 3个基因表达水平显著上调 ,2 4个基因表达水平显著下调。结论　应用基因表达谱芯片成功筛选了XTP1转染细胞后差异表达基因 ,为进一步阐明XTP1蛋白可能的生物学功能提供依据。

摘要：目的　应用微矩阵 (microarray)技术 ,结合生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白5A(NS5A)的反式激活基因 ,阐明慢性HCV感染、肝纤维化及肝细胞癌 (HCC)的等相关疾病的发病机制。方法　根据HCV H病毒株序列设计、合成序列特异性的引物。以含有全长HCV H株cDNA的pBRTM 3 0 11质粒DNA作为模板 ,进行多聚酶链反应 (PCR)扩增 ,获得的HCVNS5A编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定 ,构建真核表达载体pcDNA3 1(-) NS5A。以pcD NA3 1(-) NS5A转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取总RNA ,逆转录为cDNA后进行表达谱基因芯片分析。应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HCVNS5A反式激活作用的新的靶基因。结果　构建了真核表达载体pcDNA3 1(-) NS5A ,经过限制性内切酶作图分析和核苷酸序列分析证实正确无误。以pcDNA3 1(-) NS5A转染HepG2后提取总RNA ,逆转录后进行表达谱基因芯片技术分析。应用分子克隆技术结合生物信息学技术克隆NS5A反式激活的新型靶基因 ,命名为NS5ATP13 ,在GenBank中登录 ,登录号为D2 12 62。NS5ATP13基因的编码序列全长为 2 10 3个核苷酸 (nt) ,编码产物由 70 0个氨基酸残基 (aa)组成。结论　丙型肝炎病毒NS5A基因产物具有显著的反?