摘要：目的:建立一种基于重组聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)的铁皮石斛快速鉴别方法。方法:基于铁皮石斛核糖体基因转录间隔区(internal transcribed spacers,ITS)序列设计RPA引物和探针,对引物组合进行筛选和反应条件优化,建立实时荧光RPA快速鉴别方法,并测试方法的特异性、灵敏度和稳定性。结果:建立的荧光RPA扩增方法能够在39℃恒温条件下15 min内特异性鉴别铁皮石斛,与细茎石斛、美花石斛、重唇石斛、齿瓣石斛和钩状石斛等5种常见混淆品DNA均无交叉反应,对铁皮石斛DNA最低检出限为1.60×10^(-3)ng/μL,且稳定性好。结论:本研究建立的铁皮石斛荧光RPA鉴别方法简单快速,具有较高的特异性、灵敏度和稳定性,适用于铁皮石斛的快速精准鉴别。

摘要：免疫层析技术具有快速、成本低廉、操作简便、可视化分析等优势,已广泛应用于食品安全、环境监测及临床诊断等领域。基于颜色深浅进行结果判读的传统免疫层析技术,存在检测灵敏度低、难以实现定量分析等问题。表面增强拉曼散射(SERS)与免疫层析联合的技术提供了一个强大的分析平台,能够实现对分析物的多重、超灵敏及定量检测。本文从检测原理及类型、标签筛选、分析策略设计等方面简述了SERS免疫层析快速检测技术,归纳了其在致病菌、病毒、农兽药残留、真菌毒素等危害物检测方面的最新研究进展,并且对SERS免疫层析技术的研究方向与发展前景进行了分析和展望。

摘要：稳定的肠道微生物内环境是肠道微生物与肠道免疫反应相互作用的结果。在不断的进食过程中,昆虫肠道微生物种类和数量不断发生变化,肠道微生物与肠道上皮细胞之间形成了复杂的、动态的平衡机制。昆虫肠道上皮细胞可以感知有益和有害条件并利用免疫调控通路来实现微生物种群稳态的动态调节,例如双重氧化酶-活性氧(dual oxidase-reactive oxygen species,Duox-ROS)系统和免疫缺陷(immunodeficiency,Imd)信号通路可以感知肠道微生物数量变化并参与到肠道微生物稳态调节过程。除此之外,肠道微生物群也会通过群体感应(quorum sensing,QS)释放相应的效应因子来调节菌群行为,间接性起到稳态调节的作用。因此,本文综述了昆虫肠道中物理防御、免疫信号通路以及肠道微生物通过QS在昆虫肠道微生物稳态维持中的作用,加深对肠道组织与肠道微生物互作关系的认识。未来将继续对更多种类昆虫体内微生物的稳态调控机制及调控机制间的作用关系进行研究,并基于调控机制设计开发改变肠道微生物稳态的新型农药,为实现有效害虫防治提供新的靶标和思路。

摘要：南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,SBMV)是我国进境植物检疫性病毒,可随豆类种子远距离传播。本研究针对SBMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列设计特异引物组,建立了一种反转录(reverse transcription,RT)交叉引物扩增(cross-priming amplification,CPA)快速检测方法,并分别结合实时荧光和侧向层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)检测扩增产物构建了实时荧光RT-CPA和RT-CPA-LFD体系。结果显示,所建立的针对SBMV的RT-CPA检测方法特异性强,以其他4种可随豆类种传的植物检疫性病毒为对照,均无交叉反应。其中,实时荧光RT-CPA和RT-CPA-LFD检测SBMV灵敏度分别达5×10^(-4)ng/μL和5 ng/μL。所建立的RT-CPA检测SBMV方法具有快速、准确、可视化等优点,在口岸检测中具有良好的应用前景。

摘要：为准确快速地诊断浙江省慈溪市麦冬常见真菌病害——炭疽病和黑斑病,基于巢式多重PCR技术,针对核糖体内转录间隔区(ITS)序列分别设计特异性引物,并优化巢式多重PCR反应条件,建立可同时快速准确检测炭疽病病原菌山麦冬炭疽菌Colletotrichum liriopes和黑斑病病原菌互隔交链孢菌Alternaria alternata的方法。结果表明,建立的巢式多重PCR检测体系特异性好,同时检测2种病原菌的灵敏度高达100 pg DNA/μL,对10个田间病样进行检测,有5个病样检测到2种病原菌,3个病样检测到其中1种病原菌,2个样品未检测到目标病原菌,验证了该体系的可行性与准确性。表明所建立的巢氏多重PCR技术可用于快速准确检测麦冬2种主要病害的病原菌。

摘要：为考察编码腺苷琥珀酸裂解酶toyF基因对淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628合成丰加霉素的影响,本研究设计简并引物,首次克隆获得了菌株1628的toyF基因,并构建了敲除质粒p KC1132-toyF’,通过接合转移转入菌株1628,获得toyF基因缺失株1628-ΔTOYF。结果表明,与原始菌株1628相比,缺失株1628-ΔTOYF中TOYF的酶活和丰加霉素产量分别降低66.7%、87.5%。在缺失株1628-ΔTOYF中回补表达toyF基因构建了重组菌1628-ΔTOYF/toyF。重组菌1628-ΔTOYF/toyF中的TOYF酶活和丰加霉素产量,较缺失株1628-ΔTOYF分别提高了2.7和8.3倍。由此可见,toyF基因是参与菌株1628生物合成丰加霉素的关键酶基因。本文toyF基因的克隆及其功能研究,为克隆完整的丰加霉素生物合成基因簇及其丰加霉素生物合成机制的研究奠定了基础。

摘要：为阐明Adp A与淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628形态分化和合成丰加霉素(Toyocamycin,TM)的相关性。本研究设计简并引物成功克隆了来源于淀粉酶产色链霉菌1628大小为1263 bp的adp Asd基因(Gen Bank登录号:JX847412)。结果发现,Adp Asd的氨基酸序列与灰色链霉菌Streptomyces griseus的Adp Ag及天然色链霉菌Streptomyces coelicolor的Adp Ac的同源性分别为80.7%和78.9%。将adp Asd基因置于载体p IB139启动子Perm E*下游,构建了重组质粒p IB139-adp Asd,将其通过接合转移法分别转入菌株1628-T15(高产TM)和1628-T62(低产TM,孢子合成受阻)中,获得重组菌1628-T15A和1628-T62A。结果表明,与出发菌株1628-T62相比,重组菌1628-T62A产孢能力得到一定程度的恢复;重组菌1628-T15A与出发菌株1628-T15相比,整体形态无明显变化。摇瓶发酵试验表明,重组菌1628-T62A较出发菌株1628-T62的TM合成能力显著提高,最终TM产量提高了近3倍,而重组菌1628-T15A的TM产量比出发菌株1628-T15仅有小幅提升。以上结果证实adp Asd参与淀粉酶产色链霉菌1628形态分化以及TM合成,为今后深入理解adp Asd的分子调节机制奠定了基础。

摘要：【目的】为开发假眼小绿叶蝉Empoasca vitis分子标记,采用高通量测序技术对假眼小绿叶蝉DNA进行了测序与分析。【方法】本研究基于Illumina Hi Seq测序技术,构建了PE文库（~400bp）,对获得的测序数据利用生物信息学分析手段完成全基因组扫描,并进一步使用MISA分析鉴定基因组序列中出现的微卫星序列（SSR）。针对微卫星序列共设计10对引物,并使用3步法进行引物多态性筛选。【结果】共计检测Scaffold数量为183 194条,其中包含SSR的Scaffold共计1 545条,共计筛选出1 569个SSR位点。在假眼小绿叶蝉的微卫星中,共包括87种重复基元类型,二核苷酸与三核苷酸重复序列为主要重复类型,分别占SSRs总数的70.26%和27.84%;二核苷酸重复基元CA/TG和三核苷酸重复基元AAT/ATT是优势重复基元,分别占SSRs总数的33.96%和5.86%。在设计的10对引物中,5对具有多态性,在8个假眼小绿叶蝉个体中共发现16个等位基因。【结论】结果说明假眼小绿叶蝉SSR位点在多态性方面具有极大的可开发性,具有多态性的SSR位点可对假眼小绿叶蝉种群间的分化,种群间的扩散机理和途径及影响因素等问题提供分子视角。