摘要：目的：利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼 lmna 基因的技术方法。方法在斑马鱼 lmna 基因序列中选择靶点，设计针对斑马鱼 lmna 基因的吗啉代寡核苷酸序列（lmna－MO），构建能特异指示 lmna 基因表达的 lmna－EGFP－pCS2＋重组质粒，并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中，通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应 lmna 基因表达量，并通过蛋白质印迹法检测胚胎中 lamin 蛋白表达量。结果蛋白质印迹法检测斑马鱼体内 lamin 蛋白的表达，分别有大小为69 KD 和62 KD 两种蛋白表达。设计并构建了 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋，单独注射 lmna－EGFP－pCS2＋质粒后观察到从6 hpf 到96 hpf 胚胎均有绿色荧光蛋白表达；二者共注射后观察到，与对照组相比，实验组从6 hpf 至30 hpf 胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失；蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内 lamin 蛋白表达量明显下降。表明已成功下调了斑马鱼胚胎 lmna 基因表达。结论可通过 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋共注射方法下调斑马鱼 lmna 基因表达，并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果。该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型。

摘要：目的：用band3基因的反义 mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交，检测 band3基因在野生型Tüebingen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法：Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物，采用RT-PCR法扩增band3基因cDNA编码区片段；通过基因重组技术构建PBSK-band3重组质粒，用BamHⅠ酶切得到线性化PBSK-band3；以T7 RNA聚合酶转录合成反义地高辛标记的band3 RNA探针，用全胚胎原位杂交法检测band3基因在斑马鱼胚胎早期的表达情况。结果：成功克隆band3基因片段，构建PBSK-band3重组质粒；经体外转录获得地高辛标记的反义band3 mRNA探针，原位杂交后检测证实band3基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中间细胞群（ICM）和主动脉性腺中肾区（AGM）呈现高表达。结论：地高辛标记的反义band3 mRNA探针可检测到斑马鱼胚胎中band3基因的定位表达。