摘要：目的：构建大鼠睡眠因子1（ Slfn1）基因的发夹状RNA质粒，并进行腺病毒载体包装。方法：根据Rat slfn1基因的转录本设计并合成3个干扰RNA靶点ShRNA-Slfn1（1）、ShRNA-Slfn1（2）及ShRNA-Slfn1（3），并将单链的引物退火成双链oligo序列，连接入双酶切线性化的RNA干扰载体（ pDKD-CMV-U6-shRNA）的U6启动子下游，替换掉原来的 ccdB 基因；利用 Admax 系统，将3种目的穿梭质粒分别与腺病毒骨架质粒共转染到HEK293细胞中重组获得病毒后进行小量扩增及病毒滴度测定；利用Slfn1过表达腺病毒质粒中目的基因携带Flag标签，通过Western Blot检测Slfn1过表达腺病毒质粒与靶点质粒共转染293T细胞中Flag表达，观察靶点质粒对Slfn1表达的影响。结果：经菌落PCR鉴定获得阳性克隆并测序验证正确，表明构建质粒成功；腺病毒包装ShRNA-Slfn1（1）、ShRNA-Slfn1（2）及ShRNA-Slfn1（3）的病毒滴度分别为1.0×1014 ifu/L，2.5×1014 ifu/L，6.3×1013 ifu/L，Western Blot证实ShRNA-Slfn1（1）及ShRNA-Slfn1（3）能显著降低转染293T细胞中Flag的表达，确定shRNA-Slfn1（1）及shRNA-Slfn1（3）为目的质粒。结论：成功构建了大鼠shRNA-slfn1的重组腺病毒载体。

摘要：目的:观察慢性氟中毒大鼠肝脏微管相关蛋白1轻链3（LC3）B、P62、Beclin1的蛋白和mRNA表达，探讨自噬在氟中毒肝损伤发病机制中的作用。方法:采用成组设计，54只SD大鼠，按照体重（100 ~ 120 g）采用随机数字表法分为9组，每组6只，雌雄各半，分别为对照组（NC组）、低氟组（LF组）、高氟组（HF组）、NC +雷帕霉素（RAP）组、LF + RAP组、HF + RAP组、NC +氯喹（CQ）组、LF + CQ组、HF + CQ组。NC组饮用自来水（氟离子浓度< 0.5 mg/L），LF和HF组分别饮用氟离子浓度为5.0、50.0 mg/L含氟水；NC + RAP、LF + RAP、HF + RAP组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射1.5 mg/kg RAP，共10 d；NC + CQ、LF + CQ、HF + CQ组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射60 mg/kg CQ，共10 d。采集各组大鼠四肢骨、24 h尿液，检测骨氟、尿氟含量；苏木素-伊红染色法观察肝组织形态学变化；免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法检测肝脏LC3B、P62、Beclin1蛋白和mRNA表达情况。结果:染氟后，与NC组比较[（0.03 ± 0.00）mg/kg、（0.34 ± 0.08）mg/L]，HF组骨氟[（3.86 ± 0.08）mg/kg]、尿氟含量[（1.11 ± 0.16）mg/L]均较高（ P均< 0.05）。光镜下，NC组大鼠肝组织小叶结构清晰，肝索排列整齐，细胞结构正常，LF、HF组出现不同程度的肝细胞水肿；给予RAP后，与相应染氟组比较，肝细胞形态未见明显变化；给予CQ后，与相应染氟组比较，可见肝细胞明显水肿，随染氟浓度增加水肿程度加重。与NC组比较，HF组LC3B、Beclin1蛋白表达量较高（ P均< 0.05），P62蛋白表达量较低（ P < 0.05）。腹腔注射RAP后，与LF组比较，LF + RAP组LC3B、P62蛋白表达量较低（ P均< 0.05）；与HF组比较，HF + RAP组LC3B、Beclin1蛋白表达量较低（ P均< 0.05）。腹腔注射CQ后，与LF组比较，LF + CQ组P62蛋白表达量较高（ P < 0.05）；与HF组比较，HF + CQ组P62蛋白表达量较高（ P < 0.05）。 结论:早期（3个月）氟摄入可促进大鼠肝细胞自噬，引起肝细胞水肿，RAP有类似作用；CQ可能通过抑制肝细胞自噬而诱导肝脏损伤。

摘要：目的 探讨局部晚期鼻咽癌诱导化疗后原发病灶（GTVnx）靶区勾画.方法 选择2012-2013年收治的52例局部晚期鼻咽癌患者,诱导化疗2～3周期后行CT定位、标记及图像采集;同期采取相同体位行鼻咽部MRI平扫及增强扫描,采集T1W1增强图像;分别在CT图像及MRI图像进行GTVnx勾画;转移淋巴结、CTV1、CTV2及正常组织均在CT图像进行勾画;通过放疗计划系统进行MRI/CT图像GTVnx靶区融合;两套靶区给予相同处方剂量及正常组织限量,物理师进行调强放疗计划设计.比较不同图像下诱导化疗后GTVnx、各靶区照射体积及剂量、正常组织受量变化.结果 在局部晚期鼻咽癌诱导化疗后GTVnx勾画中,MRI图像勾画靶体积大于CT图像[（43.14±28.40）、（40.09±27.04）cm^3,t=3.791,P＜0.001];MRI图像勾画靶体积与诱导化疗前原发病灶体积差值[（27.90±11.86） cm^3]小于CT图像勾画体积差值[（30.64±11.86）cm^3]（t=3.948,P＜0.001）.两套计划原发病灶靶区照射体积比较,融合靶区计划（41.71±26.86）cm^3大于CT图像计划[（38.65±25.66）cm^3]（t=4.098,P＜0.001）,但靶区剂量及正常组织受量差异无统计学意义.结论 采用MRI图像进行局部晚期鼻咽癌诱导化疗后原发病灶靶区勾面、MRI/CT靶区图像融合进行放疗计划设计,增加原发灶靶区体积及照射体积,可能减少诱导化疗后放射治疗靶区勾画漏靶发生.

摘要：目的构建大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率。方法针对大鼠TRPC4序列设计4个RNA干扰靶点序列并合成双链DNA oligo,连接入干扰载体后转入大肠杆菌感受态细胞,培养后挑取转化子进行PCR鉴定及测序比对。利用Admax包装系统获得重组腺病毒Ad-shRNA-TRPC4小量扩增并测定病毒滴度,检测重组腺病毒对TRPC4表达的影响,最后将获得的重组腺病毒转染EPCs,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪测定其转染效率。结果 4组干扰质粒经培养后的转化子中均有阳性克隆,且阳性克隆与设计的干扰靶点序列一致;4组目的质粒均可抑制TRPC4蛋白的表达,合成的Ad-shRNA-TRPC4病毒滴度为5×1010 ifu/mL;倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测重组腺病毒在大鼠EPCs的转染效率分别为(85.47±2.05)%和(67.27±2.94)%。结论本实验成功构建Ad-shRNA-TRPC4载体,其在EPCs的转染效率高。

摘要：微创神经外科技术在我国日渐普及,但微创理念未被正确地掌握和应用。微创理念是一种微创医学和微创外科技术治疗疾病的观念,是把手术对正常组织(主要是神经血管)的损伤控制到最小程度,同时最大程度地处理病灶,使患者尽可能获得最佳疗效。本文就非手术治疗、术前设计和规划、多模态技术、手术中“度”的把握、手术器械的正确使用等神经外科微创理念进行综述,旨在为临床神经外科医生提供参考。

摘要：目的调查分析护士对非ST段抬高型急性冠脉综合征的认知度。方法采取分层便利抽样法,选取2015年11月—2016年2月就职于贵州省4所三甲医院冠心病重症监护室(coronary care unit,CCU)、急诊重症监护室(emergency intensive care unit,EICU)、心内科普通病房护士185名,应用自行设计调查问卷对其进行非ST段抬高型急性冠脉综合征认知度的调查。结果护士对非ST段抬高型急性冠脉综合征基础知识的认知度整体偏低。CCU、EICU护士对非ST段抬高型急性冠脉综合征基础知识的认知度高于心内科普通病房护士(P0.05)。结论护士对非ST段抬高型急性冠脉综合征的认知度与其所在科室、工作年限有关,整体认知度偏低,应加强专科培训,提高专科护理水平。

摘要：目的:评价龙牡壮骨颗粒治疗小儿汗证肺脾气虚证(维生素D缺乏性佝偻病早期)的临床疗效及安全性。方法:采用随机双盲、阳性药平行对照、多中心设计,将240例患儿以1∶1比例分为试验组和对照组。试验组予龙牡壮骨颗粒+维生素D滴剂模拟剂,对照组予龙牡壮骨颗粒模拟剂+维生素D滴剂,疗程均为8周。比较两组自汗、盗汗总有效率,中医证候疗效,血清钙、磷、碱性磷酸酶、25-(OH)D_(3)、腕部X线复常率和安全性指标。结果:试验组、对照组自汗、盗汗疗效总有效率分别为86.44%(102/118)、75.00%(87/116),试验组优于对照组(P<0.05)。中医证候疗效试验组优于对照组(P<0.05);两组血清钙、磷、碱性磷酸酶、25-(OH)D_(3)、腕部X线复常率比较,差异无统计学意义。两组各发生16例不良事件,无药物不良反应,组间差异无统计学意义。结论:龙牡壮骨颗粒治疗小儿汗证肺脾气虚证(维生素D缺乏性佝偻病早期)疗效确切,且临床应用安全性较好。

摘要：目的了解护士对全球急性冠脉事件注册评分(GRACE评分)的知晓情况,并分析其影响因素。方法以便利抽样法抽取贵州省的4所三甲医院的185名护理人员为调查对象,自行设计调查问卷,并采用现场问卷调查。结果护士对GRACE评分名称、具体内容认知度偏低,不同科室、年限、职称、学历的护理人员对于GRACE评分的认知度差异没有统计学意义,(P>0.05)。结论护士对于GRACE评分的认知度偏低,缺乏专业评估工具的相关知识,有待进一步提高,应加强对心血管专科评估工具的培训,深化专科护理内涵,提升护理能力。

摘要：目的检索所有血管生成素2(angipoietin-2,Ang2)与早期急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)发生器官功能衰竭(organ failure,OF)和/或胰腺坏死(pancreatic necrosis,PN)的相关文献,并通过Meta分析确定Ang2对早期AP发生OF和/或PN的诊断价值。方法计算机检索中国知网、万方、维普中文科技期刊数据库、中国生物医学数据库、PubMed、Cochrane Library及EMBASE数据库,检索时间为建库至2019年10月15日,收集Ang2水平升高对AP早期发生OF和/或PN的临床研究,对符合纳入标准的研究进行质量评估和资料提取后,采用Stata软件进行Meta分析。结果共纳入5篇文献,6个病例对照组。研究结果显示,Ang2在早期对AP发生OF和/或PN的预测价值合并的灵敏性、特异性、阳性似然比、阴性似然比及诊断比值比分别为0.84(95%CI:0.72~0.92)、0.84(95%CI:0.74~0.90)、5.18(95%CI:3.02~8.85)、0.19(95%CI:0.10~0.36)、27.40(95%CI:9.24~81.26),合并的受试者工作特征的曲线下面积为0.90(95%CI:0.87~0.93)。亚组分析显示,样本量(≥100例或<100例)、研究设计(前瞻性或回顾性)、地理位置(亚洲或欧洲及美国)、影响因子(≥3或<3)、发病入院时间(≥24 h或<24 h)及Ang2取样时间(≥12 h或<12 h)不是整体异质性来源。结论Ang2对早期AP发生OF和/或PN的诊断具有较好的准确性,在临床治疗决策过程中可能起指导性作用。

摘要：目的:探讨呼吸机相关性肺炎(ventilator associated pneumonia,VAP)死亡与高黏液表型肺炎克雷伯菌感染的相关性。方法:选取2014-02-01～2018-06-30入住重症监护病房(ICU)接受机械通气发生肺炎克雷伯菌感染的VAP患者1 328例为研究对象,用纤维支气管镜采集其深部痰标本进行细菌培养及药敏试验,深部痰标本中分离出高黏液表型肺炎克雷伯菌感染患者107例为观察组,非高黏液表型肺炎克雷伯菌患者中642例为对照组,采用回顾巢式病例对照研究设计,用多因素Logistic回归模型分析比较高黏液表型肺炎克雷伯菌感染与VAP死亡的相关性。结果:两组入住ICU时间与总住院时间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高黏液表型肺炎克雷伯菌感染是VAP死亡的高危因素(OR=2.500,95%CI:1.366～4.574)。观察组VAP死亡患者抗菌药物使用时间长于存活患者(P<0.05)。结论:VAP高黏液表型肺炎克雷伯菌感染已成为临床严重问题,一旦感染将会显著增加患者病死率。